大腸菌群檢測(cè)SOP

文件名稱大腸菌群檢測(cè)SOP文件編號(hào)C05-01主辦部門研發(fā)品管部版本別A頁(yè)次1/5大腸菌群檢測(cè)SOP核準(zhǔn)：審核：制作：日期：日期：日期：2018.09.15

文件名稱大腸菌群檢測(cè)SOP文件編號(hào)C05-01主辦部門研發(fā)品管部版本別A頁(yè)次2/5異動(dòng)日期修訂者版本文件異動(dòng)記錄2008.12.15A新制定

文件名稱大腸菌群檢測(cè)SOP文件編號(hào)C05-01主辦部門研發(fā)品管部版本別A頁(yè)次3/5目的為了使公司產(chǎn)品的品質(zhì)保證穩(wěn)定，對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行管控。適用范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了原物料、成品、樣品的檢測(cè)方法。權(quán)責(zé)3.1資料收集：品管3.2標(biāo)準(zhǔn)制定：品管參考文件GB/T4789.28定義：無作業(yè)內(nèi)容(如下)6.1原理：大腸菌群系指一群能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。該菌主要來源于人畜糞便，故以此作為糞便污染指標(biāo)來評(píng)價(jià)食品的衛(wèi)生質(zhì)量，推斷食品中有否污染腸道致病菌的可能。食品中大腸菌群數(shù)系以100mL(g)檢樣內(nèi)大腸菌群最可能數(shù)(MPN)表示。6.2設(shè)備和材料溫箱：36±1°C。冰箱：0?4C。恒溫水浴：44.5±0.5C。6.2.4天平。6.2.5顯微鏡6.2.6均質(zhì)器或乳缽。6.2.7平皿：直徑為90mm。6.2.8試管。6.2.9吸管。使用的表單使用的工器具發(fā)布菌落總數(shù)、大腸菌群檢測(cè)報(bào)告核準(zhǔn)：審核：制作：日期：日期：日期：2018.09.15

文件名稱大腸菌群檢測(cè)SOP文件編號(hào)C05-01主辦部門研發(fā)品管部版本別A頁(yè)次4/56.2.10廣口瓶或三角燒瓶：容量為500mL。6.2.11玻璃珠：直徑約5mm。6.2.12載玻片。6.2.13酒精燈。6.2.14試管架。6.3培養(yǎng)基和試劑6.3.1乳糖膽鹽發(fā)酵管：按GB4789.28中4.9規(guī)定。6.3.2伊紅美藍(lán)瓊脂平板：按GB4789.28中4.25瀝規(guī)定。6.3.3乳糖發(fā)酵管：按GB4789.28中4.10規(guī)定。6.3.4生理鹽水。6.3.5革蘭氏染色液：按GB4789.28中2.2規(guī)定。6.4操作步驟6.4.1檢樣稀釋6.4.1.1以無菌操作將檢樣25mL（或g）放于含有225mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的滅菌玻璃瓶?jī)?nèi)（瓶?jī)?nèi)予置適當(dāng)數(shù)量的玻璃珠）或滅菌乳缽內(nèi)，經(jīng)充分振搖或研磨做成1：10的均勻稀釋液。固體檢樣最好用均質(zhì)器，以8000?10000r/min的速度處理1min，做成1：10的均勻稀釋液。6.4.1.2用1mL滅菌吸管吸取1：10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水或其他稀釋液的試管內(nèi)，振搖試管混勻，做成1：100的稀釋液。6.4.1.3另取1mL滅菌吸管，按上條操作依次做10倍遞增稀釋液，每遞增稀釋一次，換用1支1mL火菌吸管。6.4.1.4根據(jù)食品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)要求或?qū)z樣污染情況的估計(jì)，選擇三個(gè)稀釋度，每個(gè)稀釋度接種3管。6.4.2乳糖發(fā)酵試驗(yàn)：將待檢樣品接種于乳匕糖膽鹽發(fā)酵管內(nèi)，接種量在1mL以上者，用雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管，1mL及1mL以下者，用單料乳糖膽鹽發(fā)酵管。每一稀釋度接種3管，置36±1°C溫箱內(nèi)，培使用的表單使用的工器具發(fā)布菌落總數(shù)、大腸菌群檢測(cè)報(bào)告核準(zhǔn)：審核：制作：日期：日期：日期：2018.09.15

文件名稱大腸菌群檢測(cè)SOP文件編號(hào)C05-01主辦部門研發(fā)品管部版本別A頁(yè)次5/5養(yǎng)24±2h，如所有乳糖膽鹽發(fā)酵管都不產(chǎn)氣，則可報(bào)告為大腸菌群陰性，如有產(chǎn)氣者，則按下列程序進(jìn)行。6.5.3分離培養(yǎng)將產(chǎn)氣的發(fā)酵管分別轉(zhuǎn)種在伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置36±1°C溫箱內(nèi)，培養(yǎng)18?24h，然后取出，觀察菌落形態(tài)，并做革蘭氏染色和證實(shí)試驗(yàn)。6.5.4證實(shí)試驗(yàn)在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落1?2個(gè)進(jìn)行革蘭氏染色，同時(shí)接種乳糖發(fā)酵管，置36±1C溫箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h，觀察產(chǎn)氣情況。凡乳糖管產(chǎn)氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞桿菌，即可報(bào)告為大腸菌群陽(yáng)性。6.6報(bào)告：根據(jù)證實(shí)為大腸菌群陽(yáng)性的管數(shù)，查MPN檢索表，報(bào)告每100mL(g)大腸菌群的MPN值6.7糞大腸菌群(faecalcoliform)6.7.1用接種環(huán)將所有產(chǎn)氣的乳糖膽鹽發(fā)酵管培養(yǎng)物(見7.2條)轉(zhuǎn)種于EC肉湯管內(nèi)，置44.5±0.2C水浴箱內(nèi)(水浴箱內(nèi)的水面應(yīng)高于EC肉湯液面)，培養(yǎng)24±2h經(jīng)培養(yǎng)后，如所有EC肉湯管均不產(chǎn)氣，則可報(bào)告為陰性；如有產(chǎn)氣者，則將所有產(chǎn)氣的EC肉湯管分別轉(zhuǎn)種于伊紅美藍(lán)瓊脂平板上，置36±1C培養(yǎng)18?24h，凡平板上有典型菌落者，則證實(shí)為糞大腸菌群陽(yáng)性。6.7.2結(jié)果報(bào)告：根據(jù)證