精美模板共色

精美模板共色第1頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四選題依據(jù)、研究現(xiàn)狀協(xié)同作用的評(píng)價(jià)以及對(duì)酶活的影響協(xié)同作用及機(jī)制（部分）的研究

研究方法與技術(shù)路線揭示協(xié)同作用下酶活的變化背景及意義研究?jī)?nèi)容研究創(chuàng)新點(diǎn)技術(shù)實(shí)施路線預(yù)期成果Contents

工作進(jìn)展及安排計(jì)劃安排第2頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四背景及意義（一）1、如何能在肝細(xì)胞功能性損傷之前，從源頭上進(jìn)行早期的預(yù)防和干預(yù)措施、防止肝臟損傷的增加，對(duì)酒精性肝病的防治具有深刻意義。2、枸杞中含有的LBP能夠進(jìn)行免疫調(diào)節(jié)、清除自由基及抗衰老、抗腫瘤、降血糖、保護(hù)心血管等，同時(shí)具有低系統(tǒng)毒性的優(yōu)點(diǎn)。已有研究表明其對(duì)酒精肝的抑制和治療有顯著療效。3、研究表明，補(bǔ)鋅能夠通過(guò)非MT依賴性的方式抑制生成活性氧的產(chǎn)生（P4502E1）和提高抗氧化酶活性的途徑防止酒精性肝損傷。4、肝損傷最突出的結(jié)果的是向血液中釋放胞內(nèi)酶,因此血清ALT和AST以及ADH和CYP2E1可以作為衡量肝狀態(tài)的指標(biāo)。第3頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四背景及意義（二）酒精在肝臟中的代謝及誘導(dǎo)肝損傷途徑

適量酒量乙醛乙酸CO2+H2O乙醇脫氫酶過(guò)氧化氫酶細(xì)胞色素氧化酶乙醛脫氫酶過(guò)量酒量誘導(dǎo)細(xì)胞色素氧化酶過(guò)表達(dá)(CYP2E1)產(chǎn)生大量ROS，引起氧化應(yīng)激反應(yīng)。炎癥肝損傷第4頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四研究創(chuàng)新點(diǎn)1、ZnSO4和LBP均對(duì)酒精肝有強(qiáng)烈的抑制和幫助恢復(fù)作用，但當(dāng)前研究?jī)H停留在對(duì)單一成分作用效果的研究，而鮮有其復(fù)配效果的研究，因此我們將其進(jìn)行復(fù)配來(lái)研究其對(duì)肝損傷的保護(hù)是否具有協(xié)同作用。2、本實(shí)驗(yàn)對(duì)復(fù)配之后的藥劑在體內(nèi)酶活性影響層面上進(jìn)行研究，深層次地揭示了其作用機(jī)理。第5頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四研究?jī)?nèi)容（一）

DPPH自由基清除能力的測(cè)定對(duì)自由基誘導(dǎo)蛋白氧化損傷的保護(hù)作用LBP/ZnSO4體外抗氧化活性協(xié)同作用的評(píng)價(jià)。對(duì)自由基誘導(dǎo)脂質(zhì)氧化損傷的保護(hù)作用

協(xié)同作用檢測(cè)第6頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四研究?jī)?nèi)容（一）注：1、DPPH自由基清除能力的測(cè)定2、對(duì)自由基誘導(dǎo)蛋白氧化損傷的保護(hù)作用

1)實(shí)驗(yàn)試劑配制

2)對(duì)Cu2+/H2O2誘導(dǎo)蛋白羰基化的保護(hù)作用 3、對(duì)自由基誘導(dǎo)脂質(zhì)氧化損傷的保護(hù)作用 1)實(shí)驗(yàn)試劑配制

2)羥自由基誘導(dǎo)亞油酸氧化反應(yīng)體系的建立

3)TBA法 4、協(xié)同作用的檢測(cè)

CDI（曹臻1989萬(wàn)等，2008）的計(jì)算公式如下：CDI=AB/（A×B）。AB是組合團(tuán)隊(duì)比毒素對(duì)照組的相應(yīng)的參數(shù)，A或B為單劑組比毒素對(duì)照組的相應(yīng)參數(shù)參數(shù)的比例。因此，CDI值小于，等于或大于1表明，該藥物是協(xié)同，相加或拮抗，。CDI小于0.7表明，該藥物是顯著的協(xié)同作用第7頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四研究?jī)?nèi)容（二）LBP、ZnSO4對(duì)小鼠酒精性肝損傷的協(xié)同保護(hù)作用（從酶活性變化的角度）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(酶活)ALT、AST（血清）MDA、SOD、GSH-Px（肝勻漿）酒精性肝損傷大鼠肝臟TNF-α和IL1-β表達(dá)的測(cè)定酒精性肝損傷大鼠肝臟CYP2E1表達(dá)的變化肝組織固定、切片、

染色（HE染色）協(xié)同作用第8頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四研究方法與技術(shù)路線1、實(shí)驗(yàn)大鼠的喂養(yǎng)與藥劑灌胃

⑴36只雄性大鼠250-280克，在22±1℃，濕度:59%一61%，每天光照與黑暗時(shí)間各為12h，適應(yīng)性喂養(yǎng)7天。適應(yīng)過(guò)程中，給予大鼠水和的標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室食品（大鼠飼料）自由采食。⑵分組設(shè)置①模型對(duì)照組②空白對(duì)照組（同劑量生理鹽水）③ZnSO4+LBP組（24mg/kg+500mg/kg）④單一ZnSO4組（24mg/kg）⑤單一枸杞多糖組（LBP500mg/kg）⑥ZnSO4+LBP組（12mg/kg+250mg/kg）灌胃次數(shù)1次/天，酒精劑量為1ml/100g。第9頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四研究方法與技術(shù)路線2、實(shí)驗(yàn)指標(biāo)觀察與測(cè)定⑴病理學(xué)觀察

肝組織固定、切片、染色，HE染色后于光學(xué)顯微鏡下觀察肝組織病理學(xué)改變。（預(yù)測(cè)5周末，會(huì)產(chǎn)生肝細(xì)胞脂肪變部分大鼠肝小葉中心帶肝細(xì)胞中出現(xiàn)大小不等的脂肪滴，肝小葉可見點(diǎn)狀或灶狀壞死以及輕度炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)）。⑵血清肝功能生化指標(biāo)測(cè)定甘油三酯（TG）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanineaminotransferase，ALT)、天門冬酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartateaminotransferase，AST)含量測(cè)定。⑶肝組織勻漿中脂質(zhì)過(guò)氧化指標(biāo)的測(cè)定

超氧化物歧化酶(SOD)、GSH-PX活性，GSH、MDA含量和金屬硫蛋白（MT）、CYP2E1、ADH、ALDH表達(dá)量的測(cè)定。第10頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四研究方法與技術(shù)路線3、技術(shù)實(shí)施路線第11頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四預(yù)期成果

1、LBP和ZnSO4有協(xié)同作用。用兩者復(fù)配的溶液的抗氧化能力比單因子的抗氧化能力強(qiáng)。2、復(fù)配溶液其抑制酒精所致肝損傷的作用機(jī)制可能與抗氧化應(yīng)激、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化、抑制TNF-α、IL-1β等細(xì)胞因子以及CYP2E1的表達(dá)有關(guān)。3、酒精肝病后，血清中丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)增加,而乙醇脫氫酶（ADH）在酒精肝病發(fā)生后，其活性顯著降低。同時(shí)酒精可以增加分解色素氧化酶（CYP2E1）的代謝途徑。但是在LBP和ZnSO4有協(xié)同作用后，以上現(xiàn)象均有所緩解。第12頁(yè)，共14頁(yè)，2023年，2月20日，星期四計(jì)劃安排2013.9~2013.10文獻(xiàn)查閱，實(shí)驗(yàn)方法初步擬定2014.2~2014.3體外抗氧化部分實(shí)驗(yàn)2014.3~2014.4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)2014.4~2014.5動(dòng)物實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的