磁珠分離細(xì)胞技術(shù)

磁珠分選技術(shù)目前一頁\總數(shù)二十二頁\編于四點(diǎn)磁珠分選技術(shù)免疫學(xué)+細(xì)胞生物學(xué)+磁力學(xué)基于抗體對(duì)抗原的特異性識(shí)別：免疫磁珠磁性微珠直接或者間接偶聯(lián)在抗體上，從而與細(xì)胞相連：抗體偶聯(lián)磁珠、二抗磁珠、生物素磁珠、OligodT磁珠在高強(qiáng)度、梯度磁場中達(dá)到磁性分離的目的：分離細(xì)胞、蛋白、核酸、細(xì)菌等目前二頁\總數(shù)二十二頁\編于四點(diǎn)磁珠磁力架分離柱或分離試管MACS，Dynal，BD，StemCell，R&D…磁珠分選系統(tǒng)目前三頁\總數(shù)二十二頁\編于四點(diǎn)管式分選Dynalbeads?Dynalbeads分離試管磁力架目前四頁\總數(shù)二十二頁\編于四點(diǎn)目前五頁\總數(shù)二十二頁\編于四點(diǎn)柱式分選目前六頁\總數(shù)二十二頁\編于四點(diǎn)未標(biāo)記的細(xì)胞

先行流出MACS微珠進(jìn)行磁性標(biāo)記撤去磁場，將標(biāo)記的細(xì)胞洗出磁性鐵珠在分選器作用下形成強(qiáng)大的磁場，使含磁珠的細(xì)胞懸浮在磁場中目前七頁\總數(shù)二十二頁\編于四點(diǎn)MACSd≈50nm，多聚糖和氧化鐵組成的超順磁化微粒；可被細(xì)胞生物降解而無需解離磁珠；分離豐度極小的細(xì)胞(10-8);Dynald=4.5um﹑2.8um﹑1um，多聚材料包被的氧化鐵超順磁微球；均一性好；也適用于細(xì)胞活化；BDd≈200nm，超順磁化微粒；包被了高質(zhì)量的BD抗體；StemCell管式；柱式;R&Dd≈150nm，鏈酶親和素磁珠，類膠體.目前八頁\總數(shù)二十二頁\編于四點(diǎn)直標(biāo)間標(biāo)抗鏈酶親和素磁珠抗生物素磁珠抗免疫球蛋白磁珠抗熒光素磁珠目前九頁\總數(shù)二十二頁\編于四點(diǎn)在沒有直接標(biāo)記微珠可選時(shí)使用自備抗體或配體的磁性分選中分選或去除用多個(gè)抗體混合物標(biāo)記的多種細(xì)胞分選稀有細(xì)胞和抗原弱表達(dá)的細(xì)胞間標(biāo)擴(kuò)展了分選范圍目前十頁\總數(shù)二十二頁\編于四點(diǎn)分選策略陽性分選去除分選多重分選目前十一頁\總數(shù)二十二頁\編于四點(diǎn)用磁珠標(biāo)記目標(biāo)細(xì)胞目標(biāo)細(xì)胞滯留在分選柱內(nèi)目標(biāo)細(xì)胞被洗脫，收集目的細(xì)胞磁性標(biāo)記后，作為陽性的標(biāo)記組分直接分選出來。高純度，高回收率，操作簡單，尤其是富集稀少細(xì)胞。目前十二頁\總數(shù)二十二頁\編于四點(diǎn)分選前陰性組分(未滯留在分選柱上的細(xì)胞)陽性組分(滯留在分選柱上的細(xì)胞)應(yīng)用anti-CD19磁珠分選人外周血中的B細(xì)胞目前十三頁\總數(shù)二十二頁\編于四點(diǎn)非目的細(xì)胞磁性標(biāo)記后，作為陰性的組分滯留在分選柱上，未標(biāo)記的目的細(xì)胞被分選出來。去除不需要的細(xì)胞缺乏針對(duì)目的細(xì)胞的特異性抗體（如腫瘤細(xì)胞）不需要抗體和目的細(xì)胞結(jié)合，即細(xì)胞不被刺激（如T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞功能分析）需進(jìn)一步通過陽性選擇分選細(xì)胞亞群。標(biāo)記非目的細(xì)胞非目的細(xì)胞滯留在分選柱上，被去除目前十四頁\總數(shù)二十二頁\編于四點(diǎn)生物素標(biāo)記CD2,CD14,CD16,CD36,CD43,CD235a;再加入鏈酶親和素標(biāo)記的磁珠應(yīng)用去除法分選人外周血中的B細(xì)胞目前十五頁\總數(shù)二十二頁\編于四點(diǎn)先去除非目的細(xì)胞，再進(jìn)行陽性分選。非目的細(xì)胞也表達(dá)用來陽性選擇目的細(xì)胞的抗原；要分選非常稀有細(xì)胞，先去除非目的細(xì)胞再行陽性分選，可獲得高純度的目的細(xì)胞。標(biāo)記去除非目的細(xì)胞標(biāo)記目的細(xì)胞洗脫目的細(xì)胞目前十六頁\總數(shù)二十二頁\編于四點(diǎn)應(yīng)用：分選人外周血中的CD4+CD25+

T細(xì)胞分選前去除分選后陽性分選后的陰性組分陽性分選后的陽性組分目前十七頁\總數(shù)二十二頁\編于四點(diǎn)洗脫目標(biāo)細(xì)胞用標(biāo)記1標(biāo)記目標(biāo)細(xì)胞用標(biāo)記2標(biāo)記目標(biāo)細(xì)胞去除磁珠標(biāo)記洗脫目標(biāo)細(xì)胞進(jìn)行多次連續(xù)陽性分選，進(jìn)行新標(biāo)記前先去除原來的磁珠標(biāo)記?？蛇M(jìn)行多參數(shù)分選。目前十八頁\總數(shù)二十二頁\編于四點(diǎn)應(yīng)用：分選人外周血中的CD3+CD56+

T細(xì)胞分選前第一次陽選第二次陽選目前十九頁\總數(shù)二十二頁\編于四點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：操作簡單，高效快捷，無菌和細(xì)胞狀態(tài)更有保證，回收率、純度高。缺點(diǎn)：不能在分選的同時(shí)進(jìn)行分析，分選過程中很難去除死細(xì)胞團(tuán)塊的干擾，難于同時(shí)進(jìn)行多種標(biāo)記物的分選。目前二十頁\總數(shù)二十二頁\編于四點(diǎn)分選前標(biāo)本處理密度梯度離心(Ficoll,Percoll)（根據(jù)情況）溶血(溶解紅細(xì)胞)過濾(單個(gè)細(xì)胞)分選標(biāo)本：不含有死細(xì)胞或者碎片的單細(xì)胞懸液骨髓、外周血、臍