從微生物角探討衛(wèi)生紙衛(wèi)生衛(wèi)生

從微生物角探討衛(wèi)生紙衛(wèi)生衛(wèi)生第1頁(yè)/共12頁(yè)2、需要的器材

天平、燒杯、電爐、刻度吸管、接種環(huán)、酒精燈、玻片、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫水浴鍋、無(wú)菌平皿、剪刀、三角燒瓶、顯微鏡、高壓蒸汽滅菌鍋等。第2頁(yè)/共11頁(yè)第2頁(yè)/共12頁(yè)三、實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)預(yù)算

根據(jù)國(guó)標(biāo)GB20810-2006，我們的實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)大概為：570元（這是以一整瓶培養(yǎng)基的價(jià)錢計(jì)算的，因?yàn)槲覀兯门囵B(yǎng)基一般都是實(shí)驗(yàn)室常用的，而且我們所用的量很少，實(shí)驗(yàn)室以后還可以接著用，其實(shí)際的費(fèi)用應(yīng)該比這個(gè)低。其可行性應(yīng)該比較高）第3頁(yè)/共11頁(yè)第3頁(yè)/共12頁(yè)四、實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)一、樣品的采集與處理：從一提卷子中，稱量樣品10g±1g，減碎后加入到200ml滅菌生理鹽水中，充分混勻，得到一個(gè)生理鹽水樣液。

第4頁(yè)/共11頁(yè)第4頁(yè)/共12頁(yè)二、菌落總數(shù)的檢驗(yàn)1、操作步驟：將上述樣液自然沉降后取上清液接種5個(gè)平皿，每個(gè)平皿中加入1ml樣液，然后用冷卻至45℃左右熔化的營(yíng)養(yǎng)瓊脂15-20ml，倒入平皿內(nèi)，充分混勻。待瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿，置35℃±2℃

培養(yǎng)48h，然后計(jì)數(shù)菌落數(shù)（當(dāng)平板上菌落數(shù)超過(guò)200時(shí)應(yīng)稀釋后再計(jì)數(shù)）。

2、結(jié)果報(bào)告：菌落呈片狀生長(zhǎng)的菌落不宜采用，計(jì)數(shù)符合要求平板上的菌落按下式計(jì)算結(jié)果：X=A*K/5

式中：X——細(xì)菌菌落總數(shù)，單位為菌落形成單位每克(CFU/g)A——5塊瓊脂培養(yǎng)基平板上的細(xì)菌總數(shù)，單位為菌落形成單位每克(CFU/g)K——稀釋度

當(dāng)菌落數(shù)在100以內(nèi)時(shí)，按實(shí)有數(shù)報(bào)告，大于100時(shí)，采用兩位有效數(shù)字。如果樣品菌落總數(shù)超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的10%，按以上程序進(jìn)行復(fù)檢，當(dāng)兩次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均值都達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定，則判定被檢樣品合格，其中有任何一次結(jié)果平均值超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定則判定被檢樣品不合格。

第5頁(yè)/共11頁(yè)第5頁(yè)/共12頁(yè)三、大腸菌群的檢驗(yàn)程序

樣液5ml初發(fā)酵(乳糖膽鹽發(fā)酵管）選擇產(chǎn)酸產(chǎn)氣的陽(yáng)性管，平板分離（EMB)35℃±2℃18-24h觀察EMB上可疑菌落其可疑菌落為：紫紅色或黑紫色，圓形邊緣整齊、表面光滑濕潤(rùn)帶有金屬光澤35℃±2℃18-24h挑取可疑菌落進(jìn)行革蘭染色鏡檢陽(yáng)性菌落染色特性為：革蘭陰性桿菌，散在排列，有一部分呈長(zhǎng)絲狀復(fù)發(fā)酵（乳糖發(fā)酵管）結(jié)果觀察與報(bào)告凡乳糖膽鹽發(fā)酵產(chǎn)酸、產(chǎn)氣，乳糖發(fā)酵管產(chǎn)氣，典型大腸菌落特點(diǎn)的革蘭陰性無(wú)芽孢桿菌可報(bào)告陽(yáng)性第6頁(yè)/共11頁(yè)第6頁(yè)/共12頁(yè)四、金黃色葡萄球菌的檢驗(yàn)程序增菌（7.5%氯化鈉肉湯培養(yǎng)液）35℃±2℃，24h平板分離（血瓊脂平板）35℃±2℃24h革蘭染色鏡檢挑選可疑菌落金黃色大而凸起，圓形、表面光滑、周圍有溶血團(tuán)甘露醇發(fā)酵實(shí)驗(yàn)如鏡檢結(jié)果為：排列成葡萄狀，無(wú)芽孢與莢膜的菌落則應(yīng)進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)樣液5ml發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸者為陽(yáng)性血漿凝固酶試驗(yàn)（玻片法、試管法）結(jié)果報(bào)告先用玻片法，如樣品和生理鹽水均出現(xiàn)了凝集現(xiàn)象則再做試管法第7頁(yè)/共11頁(yè)第7頁(yè)/共12頁(yè)五、溶血性鏈球菌的檢驗(yàn)程序5ml樣液+50ml營(yíng)養(yǎng)肉湯接種血平板35℃±2℃24h觀察菌落特征典型菌落為灰白色，半透明或不透明，針尖狀突起，表面光滑，邊緣整齊，周圍有無(wú)色透明溶血環(huán)取典型菌落進(jìn)行革蘭染色鏡檢若為革蘭陽(yáng)性，且呈鏈狀排列的球菌鏈激酶實(shí)驗(yàn)桿菌肽敏感試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告鏡檢為革蘭陽(yáng)性鏈狀排列球菌，血平板上有溶血環(huán)，鏈激酶及桿菌肽敏感試驗(yàn)陽(yáng)性者，則可報(bào)告檢出35℃±2℃24h第8頁(yè)/共11頁(yè)第8頁(yè)/共12頁(yè)六、結(jié)果記錄與評(píng)價(jià)

表2、衛(wèi)生紙微生物指標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定微生物單位結(jié)果細(xì)菌總數(shù)CFU/g大腸菌群￣金黃色葡萄球菌￣溶血性鏈球菌￣微生物單位規(guī)定細(xì)菌總數(shù)CFU/g600大腸菌群￣不應(yīng)檢出金黃色葡萄球菌￣不應(yīng)檢出溶血性鏈球菌￣不應(yīng)檢出表1、衛(wèi)生紙微生物指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果第9頁(yè)/共11頁(yè)第9頁(yè)/共12頁(yè)七、實(shí)驗(yàn)安排

根據(jù)檢驗(yàn)內(nèi)容與程序，我們的實(shí)驗(yàn)安排大致如下：第一天：配制所需要的培養(yǎng)基，準(zhǔn)備所需的試劑與器材，樣品液的制備，菌落總數(shù)測(cè)定，大腸初發(fā)酵，金黃色葡萄球菌的增菌，溶血性鏈球菌的增菌第二天：對(duì)陽(yáng)性的檢測(cè)菌進(jìn)行平板分離第三天：對(duì)平板上的可疑菌進(jìn)行革蘭染色鏡檢，及進(jìn)一步的確證實(shí)驗(yàn)第四天：觀察最終結(jié)果，檢驗(yàn)結(jié)果的記錄與報(bào)告第10頁(yè)/共11頁(yè)第10頁(yè)/共12頁(yè)THE