膠體金的制備及其應(yīng)用

膠體金的制備及其應(yīng)用第1頁，共16頁，2023年，2月20日，星期四主要內(nèi)容概述免疫膠體金技術(shù)的基本原理膠體金的特性膠體金的制備方法膠體金的鑒定免疫膠體金制備免疫膠體金應(yīng)用第2頁，共16頁，2023年，2月20日，星期四概述膠體金溶液：膠體金溶液是指分散相粒子直徑在l—150nm之間的金溶膠，屬于多相不均勻體系，顏色呈桔紅色到紫紅色。1971年膠體金作為標記物開始用于免疫組織化學(xué),Faulk等應(yīng)用電鏡免疫膠體金染色法(IGS)觀察沙門氏菌,此后他們把膠體金與多種蛋白質(zhì)結(jié)合；1974年Romano等將膠體金標記在第二抗體（馬抗人IgG）上，建立了間接免疫膠體金染色法；1978年geoghega發(fā)現(xiàn)了膠體金標記物在光鏡水平的應(yīng)用。第3頁，共16頁，2023年，2月20日，星期四概述膠體金在免疫化學(xué)中的這種應(yīng)用，又被稱為免疫金，許多學(xué)者進一步證實膠體金能穩(wěn)定又迅速地吸附蛋白質(zhì)，而蛋白質(zhì)的生物活性無明顯改變．它可以作為探針進行細胞表面和細胞內(nèi)多糖、蛋白質(zhì)、多膚、抗原、激素、核酸等生物大分子的精確定位,也可以用于日常的免疫診斷，進行免疫組織化學(xué)定位，因而在臨床診斷及藥物檢測等方面的應(yīng)用已受到廣泛的重視。

目前電鏡水平的免疫金染色(IGS)，光鏡水平的免疫金銀染色(IGSS)，以及肉眼水平的斑點免疫金染色技術(shù)日益成為科學(xué)研究和臨床診斷的有力工具第4頁，共16頁，2023年，2月20日，星期四免疫膠體金技術(shù)的基本原理

氯金酸(HAuCl4)在還原劑作用下，可聚合成一定大小的金顆粒，形成帶負電的疏水膠溶液。由于靜電作用而成為穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱膠體金。膠體金顆粒由一個基礎(chǔ)金核（原子金Au）及包圍在外的雙離子層構(gòu)成，緊連在金核表面的是內(nèi)層負離子(AuCl2-)，外層離子層H+則分散在膠體間溶液中，以維持膠體金游離于溶膠間的懸液狀態(tài)。

較小的膠體金顆粒基本是圓形的，較大(粒徑在30nm以上)的呈橢圓刑第5頁，共16頁，2023年，2月20日，星期四免疫膠體金技術(shù)的基本原理膠體金標記，實質(zhì)上是蛋白質(zhì)等高分子被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。吸附機理可能是膠體金顆粒表面負電荷，與蛋白質(zhì)的正電荷基團因靜電吸附而形成牢固結(jié)合。免疫金標記技術(shù)(Immunogoldlabellingtechique)

主要利用了金顆粒具有高電子密度的特性，在金標蛋白結(jié)合處，在顯微鏡下可見黑褐色顆粒，當這些標記物在相應(yīng)的配體處大量聚集時，肉眼可見紅色或粉紅色斑點，因而用于定性或半定量的快速免疫檢測方法中，這一反應(yīng)也可以通過銀顆粒的沉積被放大，稱之為免疫金銀染色。第6頁，共16頁，2023年，2月20日，星期四膠體金的特性1、膠體性質(zhì)膠體金顆粒大小多在1～100nm，微小金顆粒穩(wěn)定地、均勻地、呈單一分散狀態(tài)懸浮在液體中，成為膠體金溶液；2、呈色性微小顆粒膠體呈紅色，但不同大小的膠體呈色有一定的差別。最小的膠體金（2～5nm）是橙黃色的，中等大小的膠體金（10～20nm）是酒紅色的，較大顆粒的膠體金（30～80nm）則是紫紅色的；3、膠體金具有很高的動力學(xué)穩(wěn)定性，在穩(wěn)定因素不受破壞時自身凝聚極慢，可放置數(shù)年不發(fā)生凝聚。影響穩(wěn)定的因素主要有電解質(zhì)、溶膠濃度、溫度、非電解質(zhì)等。第7頁，共16頁，2023年，2月20日，星期四膠體金的制備方法

膠體金的制備一般采用還原法，常用的還原劑有檸檬酸鈉、鞣酸、抗壞血酸、白磷、硼氫化鈉等。第8頁，共16頁，2023年，2月20日，星期四膠體金的制備方法方法一：檸檬酸三鈉還原法制備金溶膠第9頁，共16頁，2023年，2月20日，星期四膠體金的制備方法方法二：檸檬酸三鈉－鞣酸混合還原劑第10頁，共16頁，2023年，2月20日，星期四膠體金的制備方法方法三：白磷還原法制備金溶膠第11頁，共16頁，2023年，2月20日，星期四膠體金的鑒定

第12頁，共16頁，2023年，2月20日，星期四免疫膠體金制備

第13頁，共16頁，2023年，2月20日，星期四免疫膠體金的應(yīng)用

１、膠體金在電鏡水平的應(yīng)用第14頁，共16頁，2023年，2月20日，星期四膠體金在免疫層析快速診斷技術(shù)中的應(yīng)用

免疫層析法(immunochromatography)

原理是將特異的抗體先固定于硝酸纖維素膜的某一區(qū)帶，當該干燥的硝酸纖維素一端浸入樣品（尿液或血清）后，由于毛細管作用，樣品將沿著該膜向前移動，當移動至固定有抗體的區(qū)域時，樣品中相應(yīng)的抗原即與該抗體發(fā)生特