非法酵革蘭陰性桿菌特征及鑒定思路

非法酵革蘭陰性桿菌特征及鑒定思路第1頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四內(nèi)容非發(fā)酵細菌分類主要非發(fā)酵細菌特征非發(fā)酵細菌耐藥特征臨床最常分離非發(fā)酵細菌鑒定第2頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四非法酵革蘭陰性桿菌感染特點引起臨床各科室人體各部位感染鑒定比腸桿菌科復(fù)雜耐藥譜廣臨床治療困難第3頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四非發(fā)酵菌的分類和生物學(xué)特性不發(fā)酵葡萄糖有氧方式代謝

包括不同的科、屬、種缺乏糖酵解酶類代謝必須在有氧環(huán)境中進行

非發(fā)酵菌

NonfermentativeBacilli不是細菌分類的正式名稱是對一大群細菌的統(tǒng)稱第4頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四非發(fā)酵菌的分類和命名

與腸桿菌科不同，非發(fā)酵菌不能簡單地歸于具有明顯特征的某一菌科，且很多非發(fā)酵菌的正確分類問題仍未解決主要的非發(fā)酵菌分為6個科1分類不明其余不屬于以上菌科的非發(fā)酵菌暫時歸類于分類學(xué)尚未明確的細菌第5頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四非發(fā)酵細菌原分類:

假單孢菌科奈瑟菌科未分科第6頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四非發(fā)酵細菌現(xiàn)代分類假單孢菌科產(chǎn)堿桿菌科甲基球菌科根瘤菌科黃桿菌科莫拉菌科未定第7頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四

臨床常見非發(fā)酵菌的分類

科名

屬名

假單胞菌科假單胞菌屬寡氧（窄食）單胞菌屬伯克菌屬甲基球菌科甲基桿菌屬產(chǎn)堿桿菌科產(chǎn)堿桿菌屬鮑特菌屬根瘤菌科土壤桿菌屬黃桿菌科黃桿菌屬金色桿菌屬穩(wěn)桿菌屬威克菌屬伯杰菌屬無色桿菌屬莫拉菌科莫拉菌屬不動桿菌屬分類不明玫瑰單胞菌屬人蒼白桿菌鞘氨醇菌屬第8頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四與鑒定方法相關(guān)的分組第一組有動力,極鞭毛:

假單胞菌科rRNA群I~V

第二組有動力,周鞭毛:

產(chǎn)堿桿菌科產(chǎn)堿桿菌屬

第三組無動力,OXI(+):

黃桿菌科黃桿菌屬華麗桿菌屬穩(wěn)桿菌屬第四組

無動力,OXI（-）不動桿菌屬第9頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四非發(fā)酵菌的分類假單胞菌科

rRNAI群rRNAIII群

rRNAV群rRNAIV群rRNAII群假單胞菌屬伯克菌屬叢毛單胞菌屬短波單胞菌屬寡養(yǎng)（窄食）單胞菌屬有動力極鞭毛第一組第10頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四假單孢菌科根據(jù)rRNA-DNA同源性

研究分為5組

rRNA-I:假單孢菌屬銅綠熒光惡臭門多薩產(chǎn)堿斯氏類產(chǎn)堿第11頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四假單胞菌屬生物學(xué)特性G-桿菌直或微彎一根或多根極鞭毛氧化利用葡萄糖氧化酶陽性第12頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四rRNAII伯克菌屬:類鼻疽;蔥頭;唐菖蒲;皮氏;第13頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四伯克菌屬生物學(xué)特性所有rRNAII群的細菌歸入一個新的菌屬伯克菌屬包括13個種其中假鼻疽伯克菌蔥頭、唐昌蒲、皮氏伯克菌均以前稱為假單胞菌第14頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四伯克菌屬生物學(xué)特性蔥頭伯克菌

G-桿菌多根極鞭毛氧化利用葡萄糖氧化酶陽性弱陽第15頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四伯克菌屬生物學(xué)特性蔥頭伯克菌黃色菌落賴氨生長無特殊要求SXT敏感常用藥物氨基糖甙類天然耐藥酸陽性植物病原菌蔥頭腐爛和人類的壞疽水源和潮濕表面第16頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四唐菖蒲伯克菌伯克菌屬生物學(xué)特性黃色無熒光菌落氧化酶陰性不分解麥芽糖ONPG陽性尿酶陽性第17頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四伯克菌屬生物學(xué)特性皮氏伯克菌生長緩慢3個生物型1~2根鞭毛針尖樣菌落第18頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四伯克菌屬生物學(xué)特性類鼻疽伯克菌人和動物類鼻疽病生長有特定區(qū)域存在于赤道南北緯20度之間的土壤和不流動的水中，主要泰國和越南。大多數(shù)感染無癥狀，只能通過血清學(xué)診斷刺激性泥土味生長無特殊要求第19頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四rRNAIII叢毛菌科:叢毛單胞菌屬食酸菌屬第20頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四叢毛單胞菌科生物學(xué)特性具有特征性的長極叢鞭毛

食酸叢毛單胞菌最常分離

通過OF果糖甘露醇乙酰胺陽性與其它菌相鑒別唯一橘黃色吲哚反應(yīng)

OF葡萄糖培養(yǎng)基上不產(chǎn)酸第21頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四叢毛單胞菌屬生物學(xué)特性叢毛單胞菌屬土生單胞菌不是人類致病菌食酸叢毛單胞菌機會感染菌唯一橘黃色吲哚反應(yīng)睪酮叢毛單胞菌屬

極為少見第22頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四食酸菌屬食酸菌屬生物學(xué)特性敏捷食酸菌中泛食酸菌德氏食酸菌氧化酶陽性有動力氧化利用糖類臨床意義不明第23頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四rRNAIV短波單胞菌屬缺陷短波單胞菌泡囊短波單胞菌第24頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四短波單胞菌屬生物學(xué)特性短波單胞菌屬氧化酶陽性不分解糖醇或反應(yīng)很弱短波緊密螺旋單極鞭毛生長緩慢48h可見菌落深黃到橘黃色素七液苷陽性區(qū)別于其他產(chǎn)堿假單胞菌臨床少見體弱免疫力低下患者感染

菌血癥第25頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四rRNAV寡養(yǎng)單胞菌屬或窄食單胞菌屬嗜麥芽寡氧單胞菌第26頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌名稱變化寡養(yǎng)單胞菌屬生物學(xué)特性1961年嗜麥芽假單胞菌

1983年嗜麥芽黃單胞菌1993年嗜麥芽寡養(yǎng)（窄食）單胞菌寡養(yǎng)(窄食)單胞菌屬第27頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四寡養(yǎng)單胞菌屬生物學(xué)特性無溶血呈淡綠色或淺綠色有氨水味血平板菌落粗糙菌落特點第28頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四氧化酶陰性葡萄糖氧化緩慢麥芽糖快速氧化賴氨酸DNA陽性寡養(yǎng)單胞菌屬生物學(xué)特性生化反應(yīng)第29頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四耐藥特點寡養(yǎng)單胞菌屬生物學(xué)特性天然耐藥泰能SXT敏感氨基糖甙類第30頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四不定菌屬的非發(fā)酵菌金色單胞菌屬黃色單胞菌屬（淺黃假單胞菌）淺金黃單胞菌棲稻黃色單胞菌（棲稻黃色假單胞菌）第31頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四不定菌屬的非發(fā)酵細菌鞘氨醇希瓦菌屬希瓦16個種深海羽田少動鞘氨醇菌有意義單胞菌屬第32頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四鞘氨醇單胞菌:16個少動鞘氨醇有意義希瓦菌:希瓦深海第33頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四非發(fā)酵菌的分類第二組有動力周鞭毛土壤桿菌屬醫(yī)學(xué)上唯一有意義的菌屬根瘤菌科產(chǎn)堿桿菌科產(chǎn)堿桿菌屬鮑特菌屬第34頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四非發(fā)酵菌的分類條件致病菌院內(nèi)感染產(chǎn)堿桿菌屬木糖氧化產(chǎn)堿桿菌木糖氧化亞種脫硝亞種糞產(chǎn)堿桿菌皮氏產(chǎn)堿桿菌第35頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四非發(fā)酵菌的分類產(chǎn)堿桿菌的主要生物學(xué)特性菌種硝酸鹽丙二木糖葡萄糖糞產(chǎn)堿-+--木糖氧化亞種++++脫硝亞種++--皮氏產(chǎn)堿桿菌----第36頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四產(chǎn)堿桿菌屬生物學(xué)特性產(chǎn)堿桿菌屬糞產(chǎn)堿桿菌木糖氧化產(chǎn)堿桿菌木糖氧化亞種

脫硝亞種皮氏產(chǎn)堿桿菌（1986年描述）第37頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四產(chǎn)堿桿菌屬生物學(xué)特性糞產(chǎn)堿桿菌臨床標(biāo)本中最常見菌落細小邊緣不規(guī)則在碳水化合物培養(yǎng)基上強烈堿性反應(yīng)還原亞硝酸鹽不還原硝酸鹽第38頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四黃桿菌科黃桿菌屬金色桿菌屬穩(wěn)桿菌屬威克菌屬伯杰菌屬非發(fā)酵菌的分類第三組無動力氧化酶陽性分類學(xué)不明鞘氨醇菌屬寡源菌屬莫拉菌屬華麗桿菌屬第39頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四最新分類變動很大金色桿菌屬粘黃桿菌產(chǎn)吲哚黃桿菌大比目魚黃桿菌腦膜敗血黃桿菌大菱鲆黃桿菌黃桿菌科生物學(xué)特性第40頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四被重新分為短穩(wěn)桿菌歸為新的屬—Myroides，水生約翰食果膠嗜冷嗜糖琥珀黃桿菌

黃桿菌屬吲哚都是陰性芳香黃桿菌短黃桿菌在人類臨床標(biāo)本中尚未發(fā)現(xiàn)黃桿菌科生物學(xué)特性第41頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四嗜醇鞘氨醇桿菌黃桿菌科分類及生物學(xué)特性臨床標(biāo)本中遇到的已有新的歸屬的種腦膜敗血金色桿菌IIb黃桿菌（伯杰手冊歸入金粉黃桿菌）短穩(wěn)黃桿菌多食鞘氨醇桿菌第42頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四第IV組

無動力氧化酶陰性

不動桿菌屬第43頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四不動桿菌的分類主要生物學(xué)特性新一版伯杰手冊醋酸鈣不動桿菌開始被歸于奈瑟菌科但最近又被歸于莫拉菌科DNA-DNA雜交營養(yǎng)特征17個基因種利用生化特征生長試驗可區(qū)分其中16個基因種7個基因種有菌名第44頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四不動桿菌的分類主要生物學(xué)特性只有7個基因種有菌名：基因種1——醋酸鈣基因種2——

鮑曼基因種4——溶血基因種5——

瓊氏基因種7——

約翰遜基因種8——

洛菲不動桿菌其余基因種未命名第45頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四不動桿菌的分類主要生物學(xué)特性生物學(xué)特性血瓊脂菌落圓形光滑邊緣整齊灰白色一般無色素有的產(chǎn)生黃褐色色素

G-球桿菌常成對排列不易脫色常染成假陽性拉絲試驗容易成假陰性有的種產(chǎn)生?溶血第46頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四不動桿菌的主要生物學(xué)特性氧化酶陰性觸酶反應(yīng)不定吲哚H2S甲基紅VP反應(yīng)均陰性不產(chǎn)生賴、鳥氨酸脫羧酶和精氨酸雙水解酶有的種能產(chǎn)生苯丙氨酸脫氨酶所有種不能還原硝酸鹽大多數(shù)能利用枸櫞酸鹽無動力，硝酸鹽還原陰性第47頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四非發(fā)酵菌的生物學(xué)特性G-桿菌球桿菌氧化酶大多陽性少數(shù)陰性多數(shù)菌屬有動力少數(shù)無動力極生周生鞭毛無鞭毛OF糖大多氧化型少數(shù)產(chǎn)堿或不利用第48頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四非發(fā)酵菌的鑒定臨床標(biāo)本中最常見銅綠鮑曼不動嗜麥芽窄食單胞菌選擇少數(shù)關(guān)鍵性試驗便可容易鑒定快速為臨床醫(yī)生提供信息

簡便法第49頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四非發(fā)酵菌的鑒定

分組法非銅綠鮑曼不動嗜麥芽必須增加其他試驗進行種的鑒定根據(jù)動力和氧化酶將各種臨床上重要的非發(fā)酵菌分為四個部分第50頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四非法酵革蘭陰性桿菌的共同特點在中國蘭或麥康開選擇培養(yǎng)基上呈不發(fā)酵乳糖的菌落(中國蘭上粉紅色)氧化酶大多陽性有鞭毛或無鞭毛革蘭陰性桿菌或球桿菌不能發(fā)酵糖色素第51頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四鑒定非發(fā)酵革蘭陰性桿菌的

基本步驟初始菌落識別:在中國蘭或麥康開培養(yǎng)基上呈不分解乳糖的菌落氧化酶革蘭染色色素確認非發(fā)酵細菌O/F鞭毛染色選擇鑒定系統(tǒng)API20NEATBVIEK2Compact等第52頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四臨床常見非發(fā)酵革蘭陰性細菌的耐藥特征銅綠假單孢菌不動桿菌嗜麥芽窄食單孢菌第53頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四綠膿桿菌耐藥機制膜蛋白缺失使通透性下降高產(chǎn)ampC酶;產(chǎn)ESBL;產(chǎn)金屬酶泵出機制第54頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四銅綠假單孢菌銅綠假單胞菌的細胞外膜上沒有大多數(shù)革蘭陰性細菌所具有的典型的高滲透性孔蛋白，它的孔蛋白通道對小分子物質(zhì)的滲透速度僅為典型孔蛋白通道的1%。

第55頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四產(chǎn)KPC酶國內(nèi)：已在腸桿菌科的多個菌屬中有報道。肺炎克雷伯菌、陰溝腸桿菌、大腸埃希菌、產(chǎn)酸克雷伯菌、沙門菌屬、弗勞地檸檬酸桿菌和銅綠假單胞菌等。該類酶除陰溝腸桿菌可有染色體介導(dǎo)外，其他各類細菌均可為質(zhì)粒介導(dǎo)，已成為臨床治療難題第56頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四如何檢測?產(chǎn)KPC酶的菌株用常規(guī)藥敏試驗不容易檢出。CLSI關(guān)于碳青霉烯類的判斷標(biāo)準(zhǔn)：厄他培南≤2μg/ml

亞胺培南、美羅培南≤4μg/ml因此，MIC2μg/ml或4μg/ml的菌株仍可判斷為敏感的警惕：在常規(guī)藥敏中如遇第三、第四代頭孢菌素以及其他的β-內(nèi)酰胺類耐藥的菌株均應(yīng)該進行稀釋法測定碳青霉烯類的對這些菌株的MIC。第57頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四檢測KPC酶的最佳底物厄他培南是檢測KPC酶的最佳底物。建議1：可將該藥列為常規(guī)藥敏試驗的品種建議2：對所有具有ESBLs/AmpC酶樣表型（即對第三、第四代頭孢菌素耐藥）的腸桿菌科細菌采用紙片法或MIC法（E-試驗）進行厄他培南（和其他碳青霉烯類）的測定。如MIC為2或4μg/ml應(yīng)視作有產(chǎn)KPC酶和其他碳青酶霉烯酶的可能。這時應(yīng)與臨床醫(yī)師聯(lián)系，并將該菌株送往參考試驗室作進一步的研究。第58頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四改良的Hodge試驗0.5麥?zhǔn)蠞岫葐挝淮竽c埃希菌

ATCC25922涂布MH平板中間貼亞胺培南（10μg）紙片接種待檢菌的無菌接種環(huán)自紙片外緣向平板邊緣劃線35℃過夜培養(yǎng)結(jié)果判斷：亞胺培南抑菌圈內(nèi)出現(xiàn)待檢菌矢狀生長者為產(chǎn)碳青霉烯酶菌株P(guān)CR擴增試驗、DNA測序證實為某種KPC酶EcoliATCC25922KPC+？KPC-KPC+？第59頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四不動桿菌的耐藥機制對多種窄譜－內(nèi)酰胺酶耐藥由于TEM－1和CARB型－內(nèi)酰胺酶對新型三代頭孢菌素耐藥是因為產(chǎn)大量染色體頭孢菌素酶和超廣譜的TEM酶第60頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四

不動桿中最主要的碳青霉烯酶是D類酶

OXA-23、24、25、26、27、40、49、51、54、55、58、60該酶能水解亞胺培南、青霉素，但不水解三代頭孢菌素.不動桿菌主要耐藥機制第61頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四不動桿菌中還產(chǎn)IMP或VIM型金屬酶，該酶水解底物范圍廣，包括碳青霉烯類、青霉素類和頭孢菌素抗生素，不被克拉維酸等酶抑制劑抑制，但能被EDTA、2-巰基丙酸抑制

第62頁，共70頁，2023年，2月20日，星期四嗜麥芽窄食單胞