臨床全自動(dòng)生化分析儀

關(guān)于臨床全自動(dòng)生化分析儀第1頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月教學(xué)目標(biāo)和要求掌握自動(dòng)生化分析儀的分析方法類(lèi)型及其特點(diǎn)，連續(xù)監(jiān)測(cè)法的理論K值，必選的分析參數(shù)，雙波長(zhǎng)測(cè)定的作用，雙試劑的優(yōu)點(diǎn)，分析儀與手工法比較的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。熟悉分立式自動(dòng)生化分析儀的基本結(jié)構(gòu)，備選的分析參數(shù)，測(cè)定過(guò)程的自動(dòng)監(jiān)測(cè)，校準(zhǔn)方式和校準(zhǔn)要求，影響分析儀分析速度的因素和分析儀性能指標(biāo)。了解某些分析參數(shù)的特殊意義，分析儀的工作過(guò)程和操作方法，干片式分析儀的結(jié)構(gòu)和分析原理，常用分析儀的分析性能。第2頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

自動(dòng)生化分析儀由電腦控制，將生化分析中的取樣(sampling)、加試劑、混勻、保溫反應(yīng)、檢測(cè)(detect)、結(jié)果計(jì)算、可靠性判斷、顯示和打印、以及清洗(cleaning)等步驟組合在一起自動(dòng)進(jìn)行操作的分析儀器。

第3頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

自動(dòng)生化分析技術(shù)的應(yīng)用提高了臨床生化檢驗(yàn)質(zhì)量和速度；減輕檢驗(yàn)人員的勞動(dòng)強(qiáng)度；節(jié)約樣品和試劑；增加檢驗(yàn)項(xiàng)目；提高檢測(cè)精密度，減少實(shí)驗(yàn)誤差；并且有利于臨床檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)現(xiàn)。不足：溫度、試劑、反應(yīng)時(shí)間、加樣第4頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月自動(dòng)生化分析儀按其工作方式不同分為連續(xù)流動(dòng)式(continuous

streamingmovement

style)或管道式：已很少用離心式(centrifugationstyle)：已很少用分立式(discrete

style)：應(yīng)用最廣泛干片技術(shù)(dryingstyle)：急診多用第5頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第一節(jié)分立式自動(dòng)生化分析儀的結(jié)構(gòu)

完全模仿手工操作方式設(shè)計(jì)，各部分結(jié)構(gòu)對(duì)應(yīng)手工操作的每個(gè)步驟包括取樣、加試劑、混勻、孵育、檢測(cè)、結(jié)果計(jì)算、器材清洗等。第6頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、基本結(jié)構(gòu)

（一）樣品盤(pán)或樣品架

樣品盤(pán)（specimendisc）：放置待測(cè)樣品的轉(zhuǎn)盤(pán)，可放置一定數(shù)量的樣品杯（specimencup）或不同規(guī)格的采血試管，通過(guò)樣品盤(pán)的轉(zhuǎn)動(dòng)來(lái)控制不同樣品的進(jìn)樣。第7頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

樣品架（specimenstock）：每個(gè)樣品架可放數(shù)只樣品杯或采血試管（多為5只或10只）。樣品架的移動(dòng)通過(guò)樣品傳送帶來(lái)進(jìn)行。樣品架上的條形碼（barcode）或編碼孔可識(shí)別樣品架號(hào)及樣品位置號(hào)。第8頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月樣品架的優(yōu)點(diǎn)①隨著樣品架移動(dòng)及樣品的被檢測(cè)，可不斷追加已放置樣品杯或采血試管的樣品架；②通過(guò)樣品架的移動(dòng)能將樣品傳送到另一個(gè)分析模塊（analysis

die-block）甚至另一臺(tái)分析儀上再進(jìn)行分析。

第9頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）試劑室和試劑瓶

轉(zhuǎn)盤(pán)式試劑室（reagentchamber）：內(nèi)裝放置試劑瓶的轉(zhuǎn)盤(pán)，一般可放置20種以上具有一定形狀的塑料試劑瓶，大型分析儀可放置30～45種試劑瓶。試劑瓶容量一般為10～100ml。通過(guò)試劑轉(zhuǎn)盤(pán)的轉(zhuǎn)動(dòng)來(lái)選用不同試劑。

第10頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

試劑架式試劑室：可放置容量為250ml～500ml的不同形狀的試劑瓶，試劑瓶不能轉(zhuǎn)動(dòng)，但每個(gè)試劑瓶?jī)?nèi)引出一條試劑管路及其噴嘴，即每種試劑均有專用的加試劑裝置，因而不同試劑間無(wú)交叉污染。但試劑管路較長(zhǎng)使試劑存在一定的死體積，因而適宜用于使用頻率高、消耗試劑量大的檢測(cè)項(xiàng)目。第11頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

大型分析儀同時(shí)備有第一試劑室和第二試劑室，即具備對(duì)同一檢測(cè)項(xiàng)目添加兩次試劑的功能，個(gè)別分析儀還具有加入第三試劑的功能。對(duì)有條形碼裝置的儀器可將帶條形碼的試劑瓶放在試劑室轉(zhuǎn)盤(pán)上的任意位置，儀器能自動(dòng)識(shí)別試劑的種類(lèi)、批號(hào)和有效期。試劑室均具有冷藏裝置，可將試劑保存在4～10℃。第12頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）反應(yīng)杯和反應(yīng)盤(pán)

反應(yīng)杯（reactioncup）是樣品與試劑進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)的場(chǎng)所，同時(shí)用作比色杯。由透光特性好的硬塑料或石英玻璃制成。比色杯光徑不同分析儀有0.5～0.7厘米不等，大多數(shù)分析儀在計(jì)算時(shí)將其折算為1厘米光徑。第13頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

反應(yīng)盤(pán)（reactiondisc）：100只或更多的反應(yīng)杯圍成一圈組成。在測(cè)定過(guò)程中反應(yīng)盤(pán)作恒速的圓周運(yùn)動(dòng)，在靜止時(shí)向反應(yīng)杯中加入樣品、試劑或進(jìn)行攪拌混勻，當(dāng)反應(yīng)盤(pán)恒速圓周運(yùn)動(dòng)經(jīng)過(guò)檢測(cè)窗口的比色杯可進(jìn)行吸光度檢測(cè)。第14頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（四）取樣和加試劑裝置

1．取樣裝置（sampling

assembly）：由取樣針、取樣臂、取樣管路、取樣注射器和閥門(mén)組成，能定量吸取樣品并加入到反應(yīng)杯。不同分析儀的取樣容量有不同的范圍，一般為2～35μl，步進(jìn)0.1微升不等。第15頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

取樣針設(shè)有電子液面感應(yīng)器，取樣針于樣品上方下降，一旦接觸到樣品液面即停止下降而開(kāi)始吸樣。適用于不同的采血試管上機(jī)測(cè)定。第16頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

多數(shù)加樣裝置設(shè)有防撞功能，遇到阻礙時(shí)取樣針立即停止運(yùn)動(dòng)并報(bào)警。某些取樣針還設(shè)有阻塞報(bào)警功能，當(dāng)取樣針被樣品中的凝塊、纖維蛋白等物質(zhì)阻塞時(shí)，機(jī)器會(huì)自動(dòng)報(bào)警、沖洗取樣針，并跳過(guò)當(dāng)前樣品，進(jìn)行下一個(gè)樣品的取樣檢測(cè)。

第17頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月取樣針?lè)澜徊嫖廴荆╟rossing

contamination）措施

絕大多數(shù)采用水洗方式（又有瀑布式和涌泉式之分），在吸取另一個(gè)樣品前對(duì)接觸樣品的樣品針內(nèi)外壁進(jìn)行沖洗；也有采用化學(xué)惰性液（chemicalinertia

fluid）膜的方式來(lái)隔絕樣品與取樣針內(nèi)外壁之間的接觸。第18頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2．加試劑裝置

加試劑裝置用于定量吸取試劑加入反應(yīng)杯，可加入試劑容量一般為20～350μl。步進(jìn)1～5微升不等，取樣精度在1微升左右。

注射器方式：組成部件與取樣裝置類(lèi)似，其液面感應(yīng)系統(tǒng)能檢測(cè)并提示試劑剩余量。

灌注式：具有許多條試劑管路及其噴嘴，每種試劑單獨(dú)使用一條試劑管路和噴嘴，不存在各試劑間的交叉污染。

第19頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

大型自動(dòng)生化儀多具有兩組加試劑裝置，可分別從兩個(gè)試劑室吸取同一個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的第一試劑和第二試劑，大多數(shù)分析儀所有檢測(cè)項(xiàng)目加入第二試劑的時(shí)間點(diǎn)統(tǒng)一固定為1個(gè)或2個(gè)點(diǎn)，也有分析儀有3個(gè)加入時(shí)間點(diǎn)可供選擇。第20頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（五）混勻與攪拌裝置

反應(yīng)杯里的樣品與試劑通過(guò)攪拌棒攪拌而充分混勻，攪拌棒的形狀為扁平棒狀或扁平螺旋狀，表面的疏水材料能防止反應(yīng)液被攪拌棒所攜帶。其工作方式大多為旋轉(zhuǎn)式攪拌，也有震動(dòng)式攪拌方式。也設(shè)置了防止攪拌棒在不同反應(yīng)液之間攜帶交叉污染的清洗措施。第21頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（六）溫控和定時(shí)系統(tǒng)

溫控系統(tǒng)使反應(yīng)杯浸浴在恒溫環(huán)境：恒溫循環(huán)水浴方式：溫度傳遞速度快，保養(yǎng)要求較高。恒溫空氣浴方式：溫度傳遞速度不如恒溫水浴循環(huán)方式，保養(yǎng)簡(jiǎn)單。溫度控制器能使循環(huán)水或循環(huán)空氣的溫度控制在規(guī)定溫度±0.1℃。規(guī)定溫度可有37℃和30℃兩種選擇，一般固定在37℃。第22頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

定時(shí)系統(tǒng)：不同分析儀對(duì)檢測(cè)吸光度的間隔時(shí)間有不同的規(guī)定，反應(yīng)時(shí)間應(yīng)該設(shè)定為此間隔時(shí)間的倍數(shù)。總反應(yīng)時(shí)間一般限制在8.5-10min內(nèi)，個(gè)別分析儀可以設(shè)定為15或22min等。第23頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（七）光路和檢測(cè)系統(tǒng)

自動(dòng)生化分析儀以紫外可見(jiàn)分光光度法為其中心和主要的檢測(cè)手段，與一般分光光度計(jì)一樣，其光路和檢測(cè)系統(tǒng)由光源、單色器和檢測(cè)器組成。第24頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1．光源（lightsource）

一般為鹵素鎢絲燈（halogen

tungstenfilament

lamp），也有采用長(zhǎng)壽命的氙燈（xelamp），要求在340～800nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)能發(fā)射出穩(wěn)定且較平坦的光能。第25頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2．單色器（monochromato）

①干涉濾光片（interferencefilter）分光系統(tǒng)：常帶有340、380、405、500、550、600、660nm等幾種濾光片，各濾光片固定在轉(zhuǎn)盤(pán)上，以轉(zhuǎn)盤(pán)旋轉(zhuǎn)的方式來(lái)選擇波長(zhǎng)。這種分光系統(tǒng)在半自動(dòng)和小型自動(dòng)分析儀中常用，且不能同一時(shí)刻進(jìn)行多波長(zhǎng)檢測(cè)。②光柵（raster）分光系統(tǒng)：常在340（或293）～800nm范圍內(nèi)選擇10～13種固定的單色光。第26頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月前分光和后分光方式

光柵分光有前分光和后分光兩種方式，光源首先經(jīng)過(guò)單色器分光，然后透射到比色溶液的方式為前分光。目前以后分光方式為多見(jiàn)，其優(yōu)點(diǎn)是單色器中沒(méi)有轉(zhuǎn)動(dòng)部分，雙波長(zhǎng)在同一時(shí)刻檢測(cè)，因而提高了檢測(cè)的精度和速度。第27頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

光源先透過(guò)比色杯中的反應(yīng)液再照射到光柵上，經(jīng)色散后所有固定單色光同時(shí)通過(guò)各自的光纖傳輸?shù)綄?duì)應(yīng)的檢測(cè)器，微處理器按該分析項(xiàng)目的分析參數(shù)，后分光方式

選擇其中一個(gè)或兩個(gè)波長(zhǎng)（雙波長(zhǎng)方式）的吸光度值，用于分析結(jié)果的計(jì)算。第28頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3．檢測(cè)器（detector）

由光敏二極管及放大電路組成，可按設(shè)定的間隔時(shí)間連續(xù)測(cè)定各反應(yīng)杯的吸光度值。第29頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（八）數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)

具有多種數(shù)據(jù)處理功能。計(jì)算測(cè)定結(jié)果判斷結(jié)果準(zhǔn)確性保存各種數(shù)據(jù)自我診斷功能

第30頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（九）清洗系統(tǒng)

反應(yīng)杯清洗裝置：一個(gè)反應(yīng)杯內(nèi)的反應(yīng)和檢測(cè)結(jié)束后，該反應(yīng)杯就被沖洗系統(tǒng)及時(shí)沖洗。清洗過(guò)程：由廢液針吸取反應(yīng)杯內(nèi)廢液，加入清洗劑（detergent）沖洗并抽干后，再經(jīng)數(shù)次去離子水沖洗及抽干，然后做杯空白的吸光度檢查，若通過(guò)檢查則此反應(yīng)杯可繼續(xù)循環(huán)使用；更高級(jí)的儀器帶有風(fēng)干技術(shù)。如果不能通過(guò)，分析儀將提示該反應(yīng)杯異常，并跳過(guò)此反應(yīng)杯使用下一個(gè)反應(yīng)杯，或提示更換反應(yīng)杯。第31頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月樣品針、試劑針和攪拌棒清洗

一般在用于下一個(gè)樣品、試劑或反應(yīng)杯前即清洗一次，此時(shí)多數(shù)為去離子水沖洗，在一批檢測(cè)完成后，則自動(dòng)進(jìn)行清洗劑清洗。清洗劑可配有1至3種可供選擇，除一種常規(guī)清洗劑外，其它1至2種可按設(shè)定對(duì)試劑針、樣品針或反應(yīng)杯進(jìn)行補(bǔ)充清洗。第32頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、組合式自動(dòng)分析儀

（一）組合式自動(dòng)生化分析儀

將相同或不同的兩臺(tái)或兩臺(tái)以上的分析部分，即分析模塊進(jìn)行組合連接，采用樣品架方式使樣品通過(guò)傳輸線在不同分析模塊間進(jìn)行傳遞并檢測(cè)。各分析模塊所分析項(xiàng)目的組合提高了分析效率，這些分析模塊除了基于紫外-可見(jiàn)光譜分析原理的分析模塊外，還有基于離子選擇電極的電解質(zhì)分析模塊，甚至還可組合建立在免疫發(fā)光分析原理的免疫分析模塊。

第33頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月組合式分析儀i2000SRImmunoassayModulec8000ClinicalChemistryModuleci8200ImmunoChemistryIntegration第34頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）實(shí)驗(yàn)室自動(dòng)化系統(tǒng)

（laboratoryautomationsystem，LAS）

包括樣品前處理系統(tǒng)、樣品輸送系統(tǒng)和各樣品分析系統(tǒng)。不同功能的各模塊以同一標(biāo)準(zhǔn)來(lái)連接，通過(guò)計(jì)算機(jī)控制運(yùn)行。隨著檢測(cè)樣品量的增加，只需添加需要的新模塊，將其安裝連接，即可擴(kuò)大處理能力。這樣可避免同類(lèi)硬件和功能的重復(fù)投資，節(jié)省占地面積所需的基礎(chǔ)投入。當(dāng)一模塊發(fā)生故障時(shí)，其余模塊仍在運(yùn)行，在24小時(shí)內(nèi)任意時(shí)間對(duì)模塊進(jìn)行交替保養(yǎng)維護(hù)，不影響日常工作。第35頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月樣品前處理系統(tǒng)

能獨(dú)立工作，由樣品投入部、離心分離部、開(kāi)栓部、在線分注部、非在線分注部、貼條碼部、蓋栓部、樣品分注收存部、樣品接收部等模塊構(gòu)成前處理系統(tǒng)，每一模塊既是系統(tǒng)的部分，又是獨(dú)立的單元，可根據(jù)不同需要選擇使用，具有靈活性和擴(kuò)展性。也可通過(guò)樣品輸送部分與樣品分析系統(tǒng)連接，組成類(lèi)似工業(yè)領(lǐng)域的生產(chǎn)流水線，從而實(shí)現(xiàn)了從采血到報(bào)告的實(shí)驗(yàn)室的全自動(dòng)化。

第36頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)生化自動(dòng)化分析方法概要

一、分析方法分類(lèi)（一）終點(diǎn)法（endassay）

被測(cè)物質(zhì)在反應(yīng)過(guò)程中完全被轉(zhuǎn)變?yōu)楫a(chǎn)物，到達(dá)反應(yīng)終點(diǎn)，根據(jù)終點(diǎn)吸光度的大小求出被測(cè)物濃度，稱為終點(diǎn)法。該法稱為平衡法更為恰當(dāng)。從時(shí)間-吸光度曲線來(lái)看，到達(dá)反應(yīng)終點(diǎn)或平衡點(diǎn)時(shí)，吸光度將不再變化。終點(diǎn)法參數(shù)設(shè)置簡(jiǎn)單，反應(yīng)時(shí)間一般較長(zhǎng)，精密度較好。第37頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月終點(diǎn)時(shí)間的確定①根據(jù)時(shí)間-吸光度曲線來(lái)確定，②根據(jù)被測(cè)物反應(yīng)終點(diǎn)，結(jié)合干擾物的反應(yīng)情況來(lái)確定。第38頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1．一點(diǎn)終點(diǎn)法（onepointendassay）

在反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)，即在時(shí)間-吸光度曲線上吸光度不再改變時(shí)選擇一個(gè)終點(diǎn)吸光度值，用于計(jì)算結(jié)果。結(jié)果計(jì)算公式：待測(cè)物濃度CU=（待測(cè)吸光度AU－試劑空白吸光度AB）×KK為校準(zhǔn)系數(shù)

第39頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月圖4-3

一點(diǎn)終點(diǎn)法反應(yīng)曲線

A單試劑一點(diǎn)終點(diǎn)法B雙試劑一點(diǎn)終點(diǎn)法第40頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2．兩點(diǎn)終點(diǎn)法（twopointendassay）

在被測(cè)物反應(yīng)或指示反應(yīng)尚未開(kāi)始時(shí)，選擇第一個(gè)吸光度，在反應(yīng)到達(dá)終點(diǎn)或平衡時(shí)選擇第二個(gè)吸光度，此兩點(diǎn)吸光度之差用于計(jì)算結(jié)果。計(jì)算公式為：

CU=（待測(cè)吸光度A2－待測(cè)吸光度A1）×K。第41頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月圖4-4

兩點(diǎn)終點(diǎn)法反應(yīng)曲線

A單試劑兩點(diǎn)終點(diǎn)法B雙試劑兩點(diǎn)終點(diǎn)法

第42頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

該法能有效地消除溶血(hemolysis)、黃疸（icterus）和脂濁（lipo-turbid）等樣品本身光吸收造成的干擾。圖4-5血紅蛋白、膽紅素和脂濁的

光吸收曲線

第43頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）固定時(shí)間法（fixed-timeassay）

指在時(shí)間-吸光度曲線上選擇兩個(gè)測(cè)光點(diǎn)，此兩點(diǎn)既非反應(yīng)初始吸光度亦非終點(diǎn)吸光度，這兩點(diǎn)的吸光度差值用于結(jié)果計(jì)算。有時(shí)也稱此法為兩點(diǎn)法。計(jì)算公式與兩點(diǎn)終點(diǎn)法相同，

CU=(A2-A1)×K。第44頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月圖4-6固定時(shí)間法反應(yīng)曲線

A單試劑固定時(shí)間法B雙試劑固定時(shí)間法該分析方法有助于解決某些反應(yīng)的非特異性問(wèn)題。

第45頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）連續(xù)監(jiān)測(cè)法

（continuousmonitoringassay）

又稱速率法（rateassay），是在測(cè)定酶活性或用酶法測(cè)定代謝產(chǎn)物時(shí)，連續(xù)選取時(shí)間-吸光度曲線中線性期（各兩點(diǎn)間吸光度差值相等）的吸光度值，并以此線性期的單位吸光度變化值（ΔA/min）計(jì)算結(jié)果。第46頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月圖4-7連續(xù)監(jiān)測(cè)法反應(yīng)曲線

A單試劑連續(xù)監(jiān)測(cè)法

B雙試劑連續(xù)監(jiān)測(cè)法

第47頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月酶促反應(yīng)的線性段

δ1及δ5值偏小，而δ2＝δ3＝δ4，故A1點(diǎn)至A4點(diǎn)屬線性段第48頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月連續(xù)監(jiān)測(cè)法的優(yōu)點(diǎn)

可以確定線性期并計(jì)算ΔA/min，根據(jù)此值再準(zhǔn)確地計(jì)算酶活性，因而使自動(dòng)生化分析儀在酶活性測(cè)定方面顯著地優(yōu)于手工法。連續(xù)監(jiān)測(cè)法也可用于測(cè)定呈線性反應(yīng)的代謝物濃度，一般是某些基于酶法測(cè)定的代謝物。酶活性（U/L）＝ΔA/min×理論（或校準(zhǔn)）K值。代謝物濃度CU=ΔA/min×校準(zhǔn)K值。第49頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1．理論K值

多用于酶活性測(cè)定中，因酶活性尚無(wú)公認(rèn)的校準(zhǔn)品可用。根據(jù)酶活性的國(guó)際單位定義得出酶活性的計(jì)算公式為：酶活性(U/L)=ΔA/min×將此式中以K來(lái)表示，即為：理論K值-可作為分析參數(shù)輸入到分析儀中。

第50頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月采用理論K值的前提

應(yīng)當(dāng)是樣品和試劑的加量準(zhǔn)確、比色杯光徑準(zhǔn)確、溫度控制精確以及波長(zhǎng)準(zhǔn)確等。但事實(shí)上由于各型分析儀在注射器容積步進(jìn)電機(jī)精度、濾光片帶寬等方面的差異，可造成樣品和試劑加量以及吸光度檢測(cè)的偏差，溫度的影響有時(shí)也非常大。第51頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

由于摩爾吸光系數(shù)受比色杯光徑、波長(zhǎng)等的影響，書(shū)本上或試劑廠家提供的理論摩爾吸光系數(shù)可能與實(shí)際所用分析儀所測(cè)的不同，因而有必要獲得實(shí)際的摩爾吸光系數(shù)，然后來(lái)計(jì)算理論K值。第52頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（1）NADH（NADPH）

“摩爾吸光系”數(shù)的測(cè)定NADH（NADPH）沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)純制品，而且配成溶液后穩(wěn)定性又較差，不能直接用NADH或NADPH標(biāo)準(zhǔn)液來(lái)校正儀器，須通過(guò)有NAD+(NADP+)參與的反應(yīng)途徑。第53頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月用已糖激酶(HK)或葡萄糖脫氫酶(GD)方法測(cè)定葡萄糖時(shí)，葡萄糖的消耗與NADH的生成呈等摩爾關(guān)系。葡萄糖有標(biāo)準(zhǔn)純制品。根據(jù)公式A=εbC，已知比色杯光徑b和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度，測(cè)得葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)管的吸光度A后便可計(jì)算出NADH（NADPH）的摩爾吸光系數(shù)ε為A/bC。第54頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月測(cè)定方法

葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液濃度為1Ommo1/L(0.01mol/L)，標(biāo)準(zhǔn)液加入量為3.5μL，酶試劑加入量為335μL，比色杯光徑為0.7cm，在340nm測(cè)得吸光度為0.465，則實(shí)測(cè)NADH摩爾吸光系數(shù)＝＝6424，即在此臺(tái)分析儀上

340nm波長(zhǎng)處測(cè)得NADH（NADPH）的摩爾吸光系數(shù)為6424，而理論上NADH（NADPH）的ε為6220。第55頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（2）“色素原”酶促產(chǎn)物

在405nm波長(zhǎng)摩爾吸光系數(shù)的測(cè)定

有許多酶底物為人工合成的“色素原”底物，其本身無(wú)色，經(jīng)酶作用后釋放出有色的反應(yīng)產(chǎn)物，在405nm波長(zhǎng)具有吸收峰。ALP底物磷酸對(duì)硝基苯酚(4-Nitrophenylphosphate，4-NPP)經(jīng)酶作用后釋放出黃色的對(duì)硝基苯酚(4-Nitrophenol，4-NP)GGT底物γ-L-谷氨酰對(duì)硝基苯胺(γ-L-Glutamyl-p-nitroanilide)或γ-L-谷氨酰-3-羥基-對(duì)硝基苯胺(γ-L-Glutamyl-3-carboxyl-p-nitroan)經(jīng)酶作用后釋放出黃色的對(duì)硝基苯胺(p-Nitroaniline，4-NA)或?qū)ο趸?5-氨基苯甲酸(2-amino-nitrobenzoicacid，ANBA)。

第56頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月以對(duì)硝基苯酚的摩爾吸光系數(shù)測(cè)定為例試劑：①4-NP標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)存液(1Ommo1/L)②4-NP標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(2.5mmo1/L，以0.84mol/LAMP緩沖液稀釋而成)③底物緩沖液(l5mmol/L4-NPP配于0.84mol/LAMP-HCL緩沖液中，37℃,pHl0.09土0.02)。第57頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月測(cè)定方法

4-NP標(biāo)準(zhǔn)液加入量為5μL，底物緩沖液加入量為350μL，波長(zhǎng)405nm，光徑0.7cm，溫度37℃，測(cè)定得吸光度為A1；另用蒸餾水代替4-NP標(biāo)準(zhǔn)液，按上述方法測(cè)定其吸光度為A2，4-NP標(biāo)準(zhǔn)液吸光度ΔA=A1-A2，若測(cè)得ΔA為0.460，則實(shí)測(cè)4-NP摩爾吸光系數(shù)＝18662第58頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2．校準(zhǔn)K值

酶活性校準(zhǔn)品經(jīng)校準(zhǔn)操作后由分析儀自動(dòng)計(jì)算得出。在進(jìn)行酶學(xué)測(cè)定時(shí)，如果分析條件的變化如溫度、樣品試劑加量和吸光度檢測(cè)偏差可同等程度地影響校準(zhǔn)物和待測(cè)樣品，則使用校準(zhǔn)品能進(jìn)行補(bǔ)償。一般來(lái)說(shuō)以使用校準(zhǔn)K值為好，但必須有兩個(gè)先決條件：①必須使用配套的試劑；②必須使用配套的高質(zhì)量的校準(zhǔn)品，該校準(zhǔn)品應(yīng)具有溯源性。

第59頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（四）透射比濁法

抗原與相應(yīng)的抗體結(jié)合形成的免疫復(fù)合物，在反應(yīng)液中具有一定的濁度，可由一般分光光度法進(jìn)行透射比濁（transmissionturbidimetry）測(cè)定，可用于某些蛋白質(zhì)和藥物濃度等的測(cè)定。該法須做多點(diǎn)校準(zhǔn)，再經(jīng)非線性回歸，求出抗原或抗體的含量。第60頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、常用生化檢測(cè)項(xiàng)目分析方法舉例

1．終點(diǎn)法檢測(cè)

常用的有總膽紅素（氧化法或重氮法）、結(jié)合膽紅素（氧化法或重氮法）、血清總蛋白（雙縮脲法）、血清白蛋白（溴甲酚氯法）、總膽汁酸（酶法）、葡萄糖（葡萄糖氧化酶法）、尿酸（尿酸酶法）、總膽固醇（膽固醇氧化酶法）、甘油三酯（磷酸甘油氧化酶酶法）、高密度脂蛋白膽固醇（直接測(cè)定法）、鈣（偶氮砷Ⅲ法）、磷（紫外法）、鎂（二甲苯胺藍(lán)法）等。第61頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2．固定時(shí)間法

苦味酸法測(cè)定肌酐采用此法。

第62頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3．連續(xù)監(jiān)測(cè)法

對(duì)于酶活性測(cè)定一般應(yīng)選用連續(xù)監(jiān)測(cè)法，如：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、γ谷氨氨酰基轉(zhuǎn)移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。一些代謝物酶法測(cè)定的項(xiàng)目如：脲酶偶聯(lián)法測(cè)定尿素等，也可用連續(xù)監(jiān)測(cè)法。第63頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4．透射比濁法

透射比濁法可用于測(cè)定產(chǎn)生濁度反應(yīng)的項(xiàng)目，多數(shù)屬免疫比濁法，載脂蛋白、免疫球蛋白、補(bǔ)體、抗“O”、類(lèi)風(fēng)濕因子，以及血清中的其他蛋白質(zhì)如前白蛋白、結(jié)合珠蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白等均可用此法。第64頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)分析參數(shù)設(shè)置

各種測(cè)定項(xiàng)目的分析參數(shù)（analysis

paramete）大部分也已設(shè)計(jì)好，存于磁盤(pán)中，供用戶使用；目前大多數(shù)生化分析儀為開(kāi)放式，用戶可以更改這些參數(shù)。生化分析儀一般另外留一些檢測(cè)項(xiàng)目的空白通道，由用戶自己設(shè)定分析參數(shù)。因此必須理解各參數(shù)的確切意義。

第65頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、分析參數(shù)介紹

（一）必選分析參數(shù)

1．試驗(yàn)名稱（testcode）2．方法類(lèi)型（也稱反應(yīng)模式）(assaymode)3．反應(yīng)溫度

4．主波長(zhǎng)（primarywavelength）5．次波長(zhǎng)（secondarywavelength）6.反應(yīng)方向（responsedirection）

第66頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月7．樣品量（samplingvolum）常量、減量和增量。8．第一試劑量（firstreagentvolum）一般20-300μl9．第二試劑量（secondreagentvolum）同上。10．總反應(yīng)容量（totalreactingvolum）一般180-350μl，現(xiàn)儀器能減少至120μl。11．孵育時(shí)間（incubatetime）12．延遲時(shí)間（delaytime）第67頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月13．連續(xù)監(jiān)測(cè)時(shí)間（continuousmonitoringtime）一般為60～120s，不少于4個(gè)吸光度檢測(cè)點(diǎn)（3個(gè)吸光度變化值）14．校準(zhǔn)液（calibrator）個(gè)數(shù)及濃度15．校準(zhǔn)K值（calibratecoefficient）或理論K值16．線性范圍（linearityrange）17．小數(shù)點(diǎn)位數(shù)（decimalpointdigit）

第68頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）備選分析參數(shù)

這類(lèi)分析參數(shù)與檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性有關(guān)，一般來(lái)說(shuō)不設(shè)置這類(lèi)分析參數(shù)，分析儀也能檢測(cè)出結(jié)果，但若樣品中待測(cè)物濃度太高等，檢測(cè)結(jié)果可能不準(zhǔn)確。第69頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1．樣品預(yù)稀釋設(shè)置樣品量、稀釋劑量和稀釋后樣品量三個(gè)數(shù)值，便可在分析前自動(dòng)對(duì)樣品進(jìn)行高倍稀釋。2．底物耗盡值（substrateexhaustlimit）在負(fù)反應(yīng)的酶活性測(cè)定中，可設(shè)置此參數(shù)，以規(guī)定一個(gè)吸光度下降限。若低于此限時(shí)底物已太少，不足以維持零級(jí)反應(yīng)而導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。

第70頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3．前區(qū)檢查免疫比濁法中應(yīng)用，以判斷是否有抗原過(guò)剩。將終點(diǎn)法最后兩個(gè)吸光度值的差別（ΔA）設(shè)置一個(gè)限值，如果后一點(diǎn)的吸光度比前一點(diǎn)低，表示已有抗原過(guò)剩，應(yīng)稀釋樣品后重測(cè)。4．試劑空白吸光度范圍超過(guò)此設(shè)定范圍表示試劑已變質(zhì)，應(yīng)更換合格試劑。第71頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月5．試劑空白速率連續(xù)監(jiān)測(cè)法中使用，是試劑本身在監(jiān)測(cè)過(guò)程中沒(méi)有化學(xué)反應(yīng)時(shí)的變化速率。6．方法學(xué)補(bǔ)償系數(shù)用于校準(zhǔn)不同分析方法間測(cè)定結(jié)果的一致性，有斜率和截距兩個(gè)參數(shù)。7．參考值范圍對(duì)超過(guò)此范圍的測(cè)定結(jié)果，儀器會(huì)打印出提示。第72頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）某些參數(shù)的特殊意義

1．最小樣品量一般分析儀的最小樣品量是2μl，目前也有小至1.6μl的。2．最大試劑量對(duì)方法靈敏度很高而線性上限低的檢測(cè)項(xiàng)目，很重要。

第73頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3．彈性速率（flexrate）

在酶活性測(cè)定中，當(dāng)酶活性太高，在連續(xù)監(jiān)測(cè)期中已不呈線性反應(yīng)時(shí)，有些儀器具有彈性速率功能，能自動(dòng)選擇反應(yīng)曲線上連續(xù)監(jiān)測(cè)期中仍呈線性的吸光度數(shù)據(jù)計(jì)算結(jié)果，使酶活性測(cè)定的線性范圍得以擴(kuò)大。如AST可從1000U/L擴(kuò)展至2000U/L，從而減少稀釋及重測(cè)次數(shù)、降低成本。第74頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4．標(biāo)本空白速率

以膽紅素干擾堿性苦味酸法測(cè)定肌酐為例：樣品中存在膽紅素時(shí)，膽紅素對(duì)堿性苦味酸速率法或兩點(diǎn)法測(cè)定肌酐有負(fù)干擾。因?yàn)槟懠t素在肌酐檢測(cè)的波長(zhǎng)505nm有較高光吸收，而且膽紅素在堿性環(huán)境中可被氧化轉(zhuǎn)變，因而在肌酐反應(yīng)過(guò)程中膽紅素的光吸收呈下降趨勢(shì)。第75頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月設(shè)置空白速率以消除膽紅素干擾

若在加入第一試劑后一段時(shí)間內(nèi)設(shè)置試劑空白速率，因?yàn)榇硕沃锌辔端嵘形磁c肌酐反應(yīng)，而膽紅素在第一試劑的堿性環(huán)境中已同樣被氧化轉(zhuǎn)變，因而以第二試劑加入后的速率變化，減去試劑空白速率變化，便可消除膽紅素的負(fù)干擾，見(jiàn)圖4-8。

第76頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

空白速率法消除膽紅素對(duì)肌酐測(cè)定的干擾

圖4-8第77頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、單波長(zhǎng)和雙波長(zhǎng)方式

（一）概念

采用一個(gè)波長(zhǎng)檢測(cè)物質(zhì)的光吸收強(qiáng)度的方式稱為單波長(zhǎng)方式。當(dāng)反應(yīng)液中含有一種組分，或在混合反應(yīng)液中待測(cè)組分的吸收峰與其它共存物質(zhì)的吸收波長(zhǎng)無(wú)重疊時(shí)，可以選用。使用一個(gè)主波長(zhǎng)和一個(gè)次波長(zhǎng)的稱雙波長(zhǎng)方式。當(dāng)反應(yīng)液中存在干擾物的較大吸收、從而影響測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性時(shí)，采用雙波長(zhǎng)方式更好。第78頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）雙波長(zhǎng)的作用①消除噪音干擾;②減少雜散光影響;③減少樣品本身光吸收的干擾：當(dāng)樣品中存在非化學(xué)反應(yīng)的干擾物如甘油三酯、血紅蛋白、膽紅素等時(shí)，會(huì)產(chǎn)生非特異性的光吸收，雙波長(zhǎng)方式可以部分消除這類(lèi)光吸收干擾。第79頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）次波長(zhǎng)的確定方法

當(dāng)被測(cè)物的主波長(zhǎng)確定之后，根據(jù)干擾物吸收光譜特征選擇次波長(zhǎng)，使干擾物在主、次波長(zhǎng)處有盡可能相同的光吸收值，而被測(cè)物在主、次波長(zhǎng)處的光吸收值應(yīng)有較大的差異。一般來(lái)說(shuō)，次波長(zhǎng)應(yīng)大于主波長(zhǎng)100nm。以主波長(zhǎng)與次波長(zhǎng)吸光度差來(lái)計(jì)算結(jié)果。第80頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、單試劑和雙試劑方式

反應(yīng)過(guò)程中只加一次試劑稱單試劑方式，加兩次試劑便為雙試劑方式。雙試劑方式分析的優(yōu)點(diǎn)是：①可提高試劑的保存穩(wěn)定性；②能設(shè)置兩點(diǎn)終點(diǎn)法；③在某些項(xiàng)目檢測(cè)時(shí)能消除非特異性化學(xué)反應(yīng)干擾。第81頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月雙試劑方式消除非特異性化學(xué)

反應(yīng)干擾舉例

血清ALT測(cè)定時(shí)，血清中原有酮酸也可與試劑LDH起反應(yīng)，使結(jié)果偏高。若先加入缺乏α-酮戊二酸的第一試劑，使原有酮酸與LDH反應(yīng)，之后加入含有α-酮戊二酸的第二試劑，啟動(dòng)ALT酶促反應(yīng)生成丙酮酸，這些丙酮酸與LDH反應(yīng)消耗的NAD＋能真正反映ALT活性，從而消除以上副反應(yīng)的影響。

第82頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月四、測(cè)定過(guò)程的自動(dòng)監(jiān)測(cè)

1．試劑空白監(jiān)測(cè)：①每瓶試劑在使用前先自動(dòng)檢測(cè)試劑空白吸光度；②每個(gè)樣品測(cè)定前均檢測(cè)試劑空白吸光度。為某些先加試劑后取樣品的分析儀所采用。第83頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2．試劑空白變化速率監(jiān)測(cè)

設(shè)置此項(xiàng)監(jiān)測(cè)后，分析儀在結(jié)果計(jì)算時(shí)會(huì)自動(dòng)減去試劑空白變化速率。在以監(jiān)測(cè)NAD（P）H減少為指示反應(yīng)的酶活性測(cè)定中，空白速率速率可監(jiān)測(cè)并消除由NADH自身氧化所造成的吸光度下降；在色素原為底物的酶活性測(cè)定中，空白速率可監(jiān)測(cè)并消除底物自身分解造成的吸光度升高。有關(guān)空白速率監(jiān)測(cè)在膽紅素對(duì)堿性苦味酸速率法測(cè)定肌酐負(fù)干擾消除中的作用，已如前述。第84頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3．樣品信息監(jiān)測(cè)

由于樣品的溶血、脂濁、黃疸會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果產(chǎn)生非化學(xué)反應(yīng)的干擾。根據(jù)溶血、脂濁、黃疸的光譜吸收特性，用雙波長(zhǎng)或多波長(zhǎng)檢測(cè)其性質(zhì)和程度，一般是測(cè)定樣品在600nm／570nm、700nm/660nm和505nm/480nm吸光度比值的大小來(lái)分別判斷樣品溶血、脂濁和黃疸程度。然后在結(jié)果計(jì)算時(shí)自動(dòng)減去這部分干擾，這將有利于提高分析結(jié)果的可靠性。第85頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4．結(jié)果可靠性監(jiān)測(cè)（1）終點(diǎn)監(jiān)測(cè)（2）線性期監(jiān)測(cè)①將連續(xù)監(jiān)測(cè)到的各吸光度值進(jìn)行線性回歸，計(jì)算出各點(diǎn)的方差，根據(jù)方差值的大小來(lái)判斷是否呈線性；②取連續(xù)監(jiān)測(cè)期開(kāi)始若干點(diǎn)的變化速率與連續(xù)監(jiān)測(cè)期最后若干點(diǎn)的變化速率進(jìn)行比較，來(lái)判斷是否為線性期。

第86頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月5．底物消耗的監(jiān)測(cè)

在連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定酶活性時(shí)，如果在監(jiān)測(cè)期內(nèi)吸光度上升或下降超過(guò)其底物耗盡值，則說(shuō)明該樣品酶活性非常高，底物將被耗盡，監(jiān)測(cè)期的吸光度將偏離線性，使測(cè)定結(jié)果不可靠。此監(jiān)測(cè)對(duì)于采用負(fù)反應(yīng)分析酶活性的方法甚為重要。

第87頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

底物消耗監(jiān)測(cè)

圖4-9第88頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月6．方法線性范圍監(jiān)測(cè)

每種待測(cè)物分析都有一個(gè)可測(cè)定的濃度或活性范圍，樣品結(jié)果若超過(guò)此范圍，分析儀將顯示測(cè)定結(jié)果超過(guò)線性范圍的提示，多數(shù)分析儀會(huì)自動(dòng)將樣品減量或增量重新測(cè)定。

第89頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月四、分析參數(shù)設(shè)置舉例

以肌酸激酶測(cè)定為例。

1.肌酸激酶試劑盒通用參數(shù)

樣品量50μl，第一試劑1000μl，37℃保溫5min，加第二試劑500μl，延時(shí)2min在340nm讀第一點(diǎn)吸光度，連續(xù)監(jiān)測(cè)2min。第90頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.某生化分析儀有關(guān)參數(shù)的設(shè)置范圍

樣品量2－35μl，第一試劑量20－270μl，第二試劑量20－270μl，總反應(yīng)容量180－350μ，吸光度監(jiān)測(cè)周期18s，總反應(yīng)時(shí)間10min，各試劑可加入時(shí)間：1.5min，4.5min，9.5min。第91頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3.參數(shù)設(shè)置如下

（1）按比例減少樣品量和各試劑量，使反應(yīng)液總?cè)萘吭诜治鰞x180－350μl范圍內(nèi)。選擇樣品量為10μl，第一試劑200μl，第二試劑100μl，這時(shí)反應(yīng)液總?cè)萘渴?10μl。或者選擇樣品量為8μl，第一試劑160μl，第二試劑80μl，這時(shí)反應(yīng)液總?cè)萘渴?48μl。第92頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（2）確定第二試劑加入時(shí)間，根據(jù)通用參數(shù)，應(yīng)選擇4.5min為第二試劑加入點(diǎn)。（3）確定各個(gè)吸光度選擇點(diǎn)，由于第二試劑加入時(shí)間4.5min，換算成監(jiān)測(cè)時(shí)間為第16，17點(diǎn)之間，加上2min延時(shí)，則在第24監(jiān)測(cè)點(diǎn)為第一點(diǎn)吸光度，并連續(xù)選擇24-31監(jiān)測(cè)點(diǎn)。第93頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（4）計(jì)算K值：根據(jù)樣品量10μl，第一試劑200μl，第二試劑100μl，代入計(jì)算公式則K===4984

也可以采用肌酸激酶的校準(zhǔn)品，執(zhí)行校準(zhǔn)程序來(lái)得到校準(zhǔn)K值。第94頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4．對(duì)新設(shè)置的反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行試運(yùn)行

在開(kāi)始運(yùn)行時(shí)，分析儀會(huì)對(duì)各反應(yīng)參數(shù)之間的邏輯合法性進(jìn)行檢測(cè)，如果反應(yīng)參數(shù)中出現(xiàn)邏輯性錯(cuò)誤，則分析儀會(huì)顯示錯(cuò)誤信息并停機(jī)，這時(shí)可以根據(jù)提示信息對(duì)反應(yīng)參數(shù)進(jìn)行修改。第95頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第四節(jié)自動(dòng)生化分析儀

工作過(guò)程和操作方法

一、工作過(guò)程在測(cè)定過(guò)程中所有機(jī)械步驟均由微處理器根據(jù)已設(shè)定的程序（procedure）進(jìn)行工作。第96頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1．取樣加試劑和混勻

樣品盤(pán)轉(zhuǎn)動(dòng)使樣品進(jìn)入待測(cè)位置

樣品針定量吸取樣品加入一反應(yīng)杯反應(yīng)盤(pán)旋轉(zhuǎn)

試劑轉(zhuǎn)盤(pán)轉(zhuǎn)動(dòng)使所需試劑瓶進(jìn)入試劑吸取位置

試劑針定量吸取試劑加入反應(yīng)杯

攪拌機(jī)構(gòu)將反應(yīng)杯內(nèi)液體進(jìn)行攪拌混勻第97頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2．保溫反應(yīng)和吸光度檢測(cè)反應(yīng)盤(pán)旋轉(zhuǎn)

反應(yīng)杯內(nèi)液體在恒溫條件下進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)當(dāng)該反應(yīng)杯通過(guò)檢測(cè)窗口時(shí)被檢測(cè)得到一個(gè)吸光度值按規(guī)定的間隔時(shí)間檢測(cè)吸光度值直至總反應(yīng)結(jié)束

總反應(yīng)時(shí)間一般為10min，如果18s為檢測(cè)吸光度的間隔時(shí)間（intervaltime），則10min得到34個(gè)吸光度值，若15s為間隔時(shí)間，則得到40個(gè)吸光度值。

第98頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3．計(jì)算并顯示或打印結(jié)果

分析儀根據(jù)各測(cè)光點(diǎn)讀數(shù)對(duì)某一檢測(cè)項(xiàng)目進(jìn)行結(jié)果計(jì)算，并顯示或打印出每個(gè)項(xiàng)目的報(bào)告，也可按標(biāo)本顯示或打印出全部項(xiàng)目的累積。即待某樣品指定的項(xiàng)目測(cè)試完畢，便顯示或打印檢測(cè)結(jié)果。第99頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、操作方法

（一）操作前的各項(xiàng)檢查（1）正常開(kāi)機(jī)以后，檢查沖洗用水裝置是否正常、各項(xiàng)分析試劑是否充足、各種清洗劑是否足夠，以及樣品針、試劑針和攪拌棒是否清潔。（2）確認(rèn)要進(jìn)行校準(zhǔn)的項(xiàng)目，確認(rèn)要做的質(zhì)控批號(hào)及項(xiàng)目，以及校準(zhǔn)品、質(zhì)控品是否足夠。（3）進(jìn)行光度計(jì)自檢來(lái)確認(rèn)光路與檢測(cè)系統(tǒng)是否處于正常工作狀態(tài)。第100頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）校準(zhǔn)

分析儀在樣品分析之前都要對(duì)該分析項(xiàng)目進(jìn)行校準(zhǔn)（也稱定標(biāo)），得出一個(gè)該項(xiàng)目的校準(zhǔn)系數(shù)（K）。校準(zhǔn)前首先必須在反應(yīng)程序里設(shè)定有關(guān)校準(zhǔn)的參數(shù)，如校準(zhǔn)液的代碼、位置及濃度值等。執(zhí)行校準(zhǔn)程序，檢測(cè)得到該校準(zhǔn)品的吸光度值，再根據(jù)校準(zhǔn)濃度計(jì)算校準(zhǔn)系數(shù)（K=校準(zhǔn)品濃度/校準(zhǔn)品吸光度）。

第101頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1．校準(zhǔn)方式

有單點(diǎn)校準(zhǔn)、兩點(diǎn)校準(zhǔn)和多點(diǎn)校準(zhǔn)單點(diǎn)校準(zhǔn)：校準(zhǔn)曲線呈直線且通過(guò)原點(diǎn)，用單個(gè)濃度的校準(zhǔn)液即可，兩點(diǎn)校準(zhǔn)：若校準(zhǔn)曲線呈直線但不通過(guò)原點(diǎn)，則需用兩個(gè)濃度的校準(zhǔn)液做兩點(diǎn)校準(zhǔn)；多點(diǎn)校準(zhǔn)：當(dāng)校準(zhǔn)曲線不呈直線而為真正的曲線時(shí)，應(yīng)做多點(diǎn)校準(zhǔn)，并按其線形選擇不同的曲線方程進(jìn)行擬和，如雙曲線、拋物線、冪函數(shù)、指數(shù)函數(shù)、對(duì)數(shù)函數(shù)等方程等。第102頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2．對(duì)校準(zhǔn)的要求

（1）選擇合適（配套）的校準(zhǔn)品（2）如有可能校準(zhǔn)品應(yīng)溯源到參考方法或參考物質(zhì)。（3）確定校準(zhǔn)的頻度。

第103頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（4）如有下列情況發(fā)生時(shí)，必須進(jìn)行校準(zhǔn)：①改變?cè)噭┑姆N類(lèi)或批號(hào)；②儀器或者檢驗(yàn)系統(tǒng)進(jìn)行一次大的預(yù)防性維護(hù)或者更換了重要部件；③質(zhì)控反映出異常的趨勢(shì)或偏移，或者超出了實(shí)驗(yàn)室規(guī)定的接受限。第104頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）質(zhì)控品測(cè)定

質(zhì)控是保證檢測(cè)結(jié)果可靠性的一個(gè)重要手段，因此每批樣品的分析測(cè)定均應(yīng)該有質(zhì)控樣品同時(shí)監(jiān)測(cè)。關(guān)于分析儀的批測(cè)定，是指一批樣品從開(kāi)始測(cè)定到完成測(cè)定后停止的整個(gè)過(guò)程。其中如果進(jìn)行了添加或更新試劑、進(jìn)行了有可能改變吸光度的維護(hù)等操作，均應(yīng)進(jìn)行一次質(zhì)控樣品的檢測(cè)，以便及時(shí)監(jiān)測(cè)到分析系統(tǒng)的改變。第105頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

所有分析儀都已設(shè)定或固化了有關(guān)質(zhì)控的分析程序：①設(shè)定有關(guān)質(zhì)控參數(shù)，如每個(gè)質(zhì)控品的批號(hào)、靶值和標(biāo)準(zhǔn)差；②選擇質(zhì)控圖的方式，如均值－標(biāo)準(zhǔn)差質(zhì)控圖；③質(zhì)控結(jié)果的統(tǒng)計(jì)分析，分析儀會(huì)保存每次測(cè)定的質(zhì)控結(jié)果，并對(duì)其進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，以列表及質(zhì)控圖的形式在屏幕上顯示。第106頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

可根據(jù)質(zhì)控結(jié)果在質(zhì)控圖上的位置判斷其是否在控。如果判為失控則應(yīng)從試劑、質(zhì)控品、校準(zhǔn)品和分析儀等幾方面尋找原因。通過(guò)對(duì)質(zhì)控結(jié)果的分析，可以了解某項(xiàng)目的分析精密度和準(zhǔn)確度的改變。第107頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（四）檢測(cè)項(xiàng)目的輸入與測(cè)定

1．項(xiàng)目輸入（1）逐項(xiàng)輸入：每份樣品可以任選分析儀中已設(shè)置的且試劑室內(nèi)已預(yù)置試劑的項(xiàng)目中的一項(xiàng)、幾項(xiàng)或全部項(xiàng)目。第108頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（2）項(xiàng)目組合輸入：把與疾病相關(guān)的檢驗(yàn)項(xiàng)目組合在一起，進(jìn)行組合檢驗(yàn)，這有利于方便病人，有利于疾病的診斷和預(yù)后分析，同時(shí)也簡(jiǎn)化了分析操作，提高分析效率。（3）批量輸入：對(duì)于有連續(xù)相同測(cè)定項(xiàng)目的樣品，可使用批量輸入的方法。第109頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

多數(shù)全自動(dòng)分析儀的操作非常方便，在開(kāi)始測(cè)定畫(huà)面，輸入該批第一個(gè)樣品的樣品號(hào)，分析儀即會(huì)自動(dòng)逐個(gè)地對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定。一般在開(kāi)始畫(huà)面還可選擇：①是否需要對(duì)結(jié)果超過(guò)設(shè)定的線性范圍、超過(guò)允許的吸光度上限等的樣品自動(dòng)進(jìn)行重復(fù)測(cè)定；②測(cè)定結(jié)果是否需要按照已設(shè)定的打印格式自動(dòng)打印與測(cè)定結(jié)果有關(guān)的選項(xiàng)。2．進(jìn)行測(cè)定第110頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3．急診檢驗(yàn)

幾乎所有全自動(dòng)生化分析儀都具備“急診優(yōu)先”的功能，儀器留有急診樣品的分析位置或?qū)Ｓ脴悠芳芤曰蚣痹\分析的專用編號(hào)。一旦在急診樣品位置上放置了樣品，并設(shè)定了急診檢驗(yàn)的項(xiàng)目，分析儀就會(huì)在常規(guī)樣品的測(cè)定過(guò)程中，優(yōu)先安排對(duì)該樣品進(jìn)行分析測(cè)定。第111頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（五）樣品的減量與預(yù)稀釋方式

樣品的預(yù)稀釋方式是指在分析過(guò)程中儀器首先對(duì)樣品做自動(dòng)稀釋，然后進(jìn)行測(cè)定。

操作過(guò)程:a.樣品針吸取一定量樣品，加入反應(yīng)杯，b.試劑針把稀釋液加入已取樣品的反應(yīng)杯，并攪拌混勻，c.由取樣針在已稀釋的反應(yīng)杯里吸取已稀釋的樣品，加至另一個(gè)反應(yīng)杯進(jìn)行分析測(cè)定。

樣品預(yù)稀釋的優(yōu)點(diǎn)：稀釋過(guò)程自動(dòng)化，能使用到高達(dá)100倍或更高的稀釋比例。缺點(diǎn)：需占用3個(gè)取樣周期(samplingcycle)。第112頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（六）分析儀的維護(hù)

分析儀的常規(guī)維護(hù)(maintenanc)是保證分析儀能夠正常運(yùn)行的重要手段。分析儀要嚴(yán)格根據(jù)操作手冊(cè)的要求進(jìn)行維護(hù)。每天維護(hù)每周維護(hù)不定期維護(hù)

第113頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（七）分析儀數(shù)據(jù)連網(wǎng)

分析儀的數(shù)據(jù)連網(wǎng)是指分析儀與實(shí)驗(yàn)室電腦網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)之間分析數(shù)據(jù)的互傳與共享。連網(wǎng)的實(shí)現(xiàn)是通過(guò)分析儀的數(shù)據(jù)接口以及接口軟件來(lái)完成。通過(guò)連網(wǎng)，能使來(lái)自分析儀的結(jié)果數(shù)據(jù)在網(wǎng)絡(luò)軟件的強(qiáng)大功能下得到進(jìn)一步的處理，如報(bào)告單的格式（形式）更加為醫(yī)生與患者所接受；患者的信息與對(duì)應(yīng)的檢驗(yàn)結(jié)果能長(zhǎng)期保存；結(jié)果的分析與管理更為完善。

第114頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、自動(dòng)化分析與手工操作的比較

（一）優(yōu)點(diǎn)

1.檢測(cè)速度快

2.檢測(cè)靈敏度高

3.檢測(cè)準(zhǔn)確度高

4.檢測(cè)精密度高

5.樣品和試劑用量減少

6.其他:能精確地控制反應(yīng)時(shí)間;能精確地控制反應(yīng)溫度;能進(jìn)行復(fù)雜的結(jié)果計(jì)算。

第115頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）缺點(diǎn)

1.選擇次波長(zhǎng)較困難2.操作時(shí)間受限3.操作復(fù)雜性受限:加試劑的次數(shù)受限制;無(wú)法做復(fù)雜的操作;選擇和改變反應(yīng)溫度困難4.樣品量/試劑量的比例受限制5.不適宜做參考方法6.儀器維護(hù)和保養(yǎng)較復(fù)雜

第116頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第五節(jié)

干片式生化分析儀簡(jiǎn)介

一、儀器結(jié)構(gòu)

（一）干片試劑

干片試劑的結(jié)構(gòu)從上到下一般分為展開(kāi)層、試劑層、顯色層和支持層，見(jiàn)圖4-10。（二）檢測(cè)儀器

也有半自動(dòng)和全自動(dòng)之分

第117頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月干化學(xué)的原理（1）

試劑結(jié)構(gòu)Sample散布層試劑層顯色層支持層第118頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、分析原理

（一）分析過(guò)程

1．展開(kāi)層待測(cè)樣品定量加到干片試劑，由展開(kāi)層把樣品均勻展開(kāi)，并且阻擋固體物質(zhì)如紅細(xì)胞和大分子物質(zhì)進(jìn)入試劑層。展開(kāi)層還能為反射光檢測(cè)提供一個(gè)具有反射的背景。2．試劑層樣品中的水分成為干式試劑的溶劑，試劑與待測(cè)物質(zhì)進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)。試劑層的結(jié)構(gòu)還能控制多步化學(xué)反應(yīng)的反應(yīng)次序。第119頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3．顯色層化學(xué)反應(yīng)的產(chǎn)物在顯色層與顯色試劑起呈色反應(yīng)。支持層為一透明膠片，僅起支撐試劑干片的作用。4．吸光度檢測(cè)整個(gè)過(guò)程經(jīng)過(guò)一個(gè)規(guī)定的時(shí)間，由反射光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè)分析。光度計(jì)的單色光透過(guò)支持層、顯色層、試劑層，一部分光線被吸收，另一部分光線則反射到接收器被檢測(cè)。待測(cè)物濃度越高，光線被吸收越多，檢測(cè)到的反射光越弱，因而待測(cè)物濃度與吸光度成正比。（圖4-10）

第120頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月干化學(xué)的原理（2）反應(yīng)過(guò)程演示第121頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月干化學(xué)的原理（3）

比色展開(kāi)層試劑層顯色層支持層

接收器第122頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）分析方法原理

以血氨測(cè)定為例，氨干試劑片的有效成分是溴酚藍(lán)（BromphenolBlue）,其它成分包括表面活性劑、緩沖成分和保濕劑。氨通過(guò)半透膜進(jìn)入試劑層，與指示染料溴酚藍(lán)反應(yīng)產(chǎn)生顏色產(chǎn)物，其顏色強(qiáng)度也即吸光度與樣品中氨含量成正比，由反射光度計(jì)在605nm進(jìn)行吸光度檢測(cè)，與經(jīng)同樣檢測(cè)的氨校準(zhǔn)品進(jìn)行比較，得到樣品中氨的濃度。血氨測(cè)定的分析參數(shù)很簡(jiǎn)單：樣品10μl，反應(yīng)時(shí)間5min，波長(zhǎng)605nm。第123頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第六節(jié)自動(dòng)生化分析儀性能評(píng)價(jià)

全自動(dòng)分析儀將取樣至出結(jié)果的全過(guò)程都自動(dòng)完成。操作者只要把樣品放在分析儀一定的位置上，輸入要測(cè)定的項(xiàng)目代號(hào)，儀器就會(huì)根據(jù)分析程序自動(dòng)地進(jìn)行操作，并打印出測(cè)定結(jié)果。舉例來(lái)說(shuō)，一臺(tái)分析速度為1600測(cè)試/h的分析儀，工作4小時(shí)所完成的工作量，如果用手工操作，一般需要10到15個(gè)人工作1天。另外由于全自動(dòng)化操作，并且分析儀設(shè)有完善的測(cè)定過(guò)程監(jiān)測(cè)功能，因此人為主觀誤差因素很小，檢測(cè)精密度大大提高。第124頁(yè)，課件共139頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

半自動(dòng)分析儀根據(jù)其工作原理叫自動(dòng)比色儀可能更恰當(dāng)，其共用流動(dòng)式比色杯，反應(yīng)液之間互染率大。其優(yōu)點(diǎn)是結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，價(jià)格便宜。缺點(diǎn)有：①交叉污染較重，反應(yīng)液間相互影響不可避免。②每個(gè)項(xiàng)目檢測(cè)后均需沖洗才能進(jìn)行下一個(gè)項(xiàng)目測(cè)定，速度慢。③分析過(guò)程中的某些步驟需手工完成（如加試劑、取樣、