精子形態(tài)分析及染色

精子常規(guī)分析與形態(tài)學(xué)染色

河南省人口和計(jì)劃生育科學(xué)技術(shù)研究院孕前優(yōu)生健康檢查臨床檢驗(yàn)操作技術(shù)培訓(xùn)

2021/5/91精液常規(guī)檢驗(yàn)采集：采集前必須禁欲2~7天，采集后立即送檢，存放時(shí)間不要超過(guò)1小時(shí)，運(yùn)送時(shí)溫度與體溫相近。外觀和氣味：正常呈灰白或乳白色，厚稠膠凍狀，液化后呈乳白色半透明狀。精子數(shù)量少，精液透明且稀??；精液中有較多紅細(xì)胞，可呈紅褐色；黃色精液見(jiàn)于精液中有較多膿細(xì)胞，或服用藥物。量：正常>=2mL，下限是1.5mL，小于1mL，視為異常，見(jiàn)于精囊腺和前列腺病變。2021/5/92液化：室溫正常5~10分鐘液化，20~40分鐘可完全液化，1小時(shí)仍不液化應(yīng)視為異常，一般與缺乏蛋白水解酶有關(guān)。粘稠度：精液粘稠度異常可影響精子的活力和穿透力。用吸管吸入精液，滴落精液觀察，粘稠度增加時(shí)，精液懸滴可形成>2cm的拉絲。PH值：正常精液PH呈弱堿性，>=7.2（滴PH試紙<30秒）。精液的PH過(guò)低，可影響其對(duì)陰道酸性環(huán)境的調(diào)節(jié)作用，影響精子活力。亦可能與精囊發(fā)育不良有關(guān)。2021/5/93精子濃度的參考值下限為：15X106/mL精子總數(shù)的參考值下限為：39X106/mL精子密度過(guò)低或無(wú)精見(jiàn)于：1、睪丸生精功能異常2、輸精管、射精管、精囊存在缺陷3、精索靜脈曲張4、生殖道炎癥5、流行性腮腺炎并發(fā)睪丸炎6、絕育手術(shù)后7、放射性照射，有害化學(xué)物質(zhì)污染及藥物作用等。2021/5/94精子存活率：活精子數(shù)量在精子總數(shù)量中所占的比例。伊紅-苯胺黑染色：50uL精液與等體積的染液混勻，等待30秒；采用拉薄技術(shù)制成涂片，空氣中干燥，高倍鏡觀察，活精子頭部成白色或淡粉紅色，死精子頭部呈紅色或暗粉紅色。正常參考值：（參考下限是58%）

>=70%（射精后1h）

>=40~50%（射精后3h）

>=20~30%（射精后6h）2021/5/95精子活力：正常精子的活動(dòng)力，精子向前運(yùn)動(dòng)的能力。計(jì)數(shù)200個(gè)精子的分級(jí)情況。WHO把精子的活動(dòng)力分為4級(jí)。(5版分3級(jí))d：不動(dòng)PR：前向運(yùn)動(dòng)c：非前向運(yùn)動(dòng)NP：非前向運(yùn)動(dòng)b：慢速或呆滯的前向運(yùn)動(dòng)IM：不活動(dòng)a：快速向前運(yùn)動(dòng)2021/5/96正常為：a級(jí)>25%或a+b>50%（5版）的參考值下限是前向運(yùn)動(dòng)精子（PR）：32%精子總活力（PR+NP）：40%臨床意義：活力下降、弱精子癥：見(jiàn)于液化不良、粘稠度增高、精液凝集，精子結(jié)構(gòu)異常，內(nèi)分泌功能異常，精索靜脈曲張等。2021/5/97精子細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查1、正常精子形態(tài)：正常在精液中占15%(5版)參考下限為：4%2、畸形精子：頭部形狀、大小異常；體部異常；尾部異常。臨床意義：精子形態(tài)異常與生殖系統(tǒng)的感染、外傷、雄激素變化、化學(xué)藥物中毒及遺傳因素有關(guān)。2021/5/983、生精細(xì)胞、精原、初級(jí)精母、次級(jí)精母、精子細(xì)胞。正常時(shí)少量，當(dāng)曲精管的生精能力受到損害時(shí)，精液中可出現(xiàn)較多的病理性幼稚細(xì)胞。4、其他成分紅細(xì)胞（極少）：血精癥、睪丸瘤、前列腺瘤白細(xì)胞（<=1X106/mL）：生殖道炎癥癌細(xì)胞：輸精管惡性腫瘤2021/5/99人精子形態(tài)模式圖頭部：輪廓規(guī)則，頂體清楚，頂體帽至少覆蓋頭部表面的1/3。中段：細(xì)長(zhǎng)，不超過(guò)頭寬1/3，輪廓直而規(guī)則。尾部：細(xì)長(zhǎng)，彎曲不卷曲。2021/5/910

正常形態(tài)精子的概念把“具備潛在受精能力精子”（亞群）的外觀作為形態(tài)正常的標(biāo)準(zhǔn)。人為設(shè)定臨界標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)定“臨界形態(tài)精子都是異?！薄?021/5/911操作前準(zhǔn)備一側(cè)有磨砂載玻片蓋玻片（24mmX50mm）10uL移液器及吸頭紗布或紙巾記號(hào)筆巴氏染液或Diff染液2021/5/912精液涂片的制備每份新鮮的精液標(biāo)本應(yīng)制備兩張或更多的涂片，以防染色發(fā)生問(wèn)題或載玻片破碎。每次取樣前要充分混勻精液。對(duì)于未稀釋的精液，采用拉薄技術(shù)；對(duì)于已洗滌的精液，采用移液管法。涂片前準(zhǔn)備：1.用紗布或紙巾擦干凈載玻片的兩面2.用記號(hào)筆在載玻片的磨砂處標(biāo)記上編號(hào)、日期。2021/5/913涂片的方法充分混勻待涂片精液標(biāo)本，根據(jù)精子濃度，用移液器去5~10uL的精液滴在載玻片的一端，立即用第二張載玻片的非磨砂端以45°角（角度越小，涂片越薄）沿第一張載玻片的表面移動(dòng)并接觸精液滴，然后沿載玻片的長(zhǎng)軸緩慢拖回拉片（約一秒；速度越快，涂片越厚），制成一張涂片。2021/5/914對(duì)于高粘稠或低密度或充滿碎屑精液：稀釋精漿或離心去精漿。方法：取0.2~0.5mL精液，加10mL生理鹽水，800g離心10分鐘，除去大部分上清液，輕輕拍打試管，使精子團(tuán)重新混懸于剩余的上清液中。必要時(shí)可加生理鹽水重復(fù)洗滌一次。洗滌后的精子濃度在20-50X106/ml為好。洗滌的目的是減少背景雜質(zhì)，并減少背景著色。2021/5/915如圖：取5~10uL懸浮液于清潔載玻片上，用滴管使精液在載玻片上展開(kāi)。然后在400倍光鏡下掃視一下確保精液涂片均勻，400倍下每個(gè)視野20-50個(gè)精子，并且沒(méi)有精子成團(tuán)或重疊。2021/5/916注意：1.精液標(biāo)本完全液化，充分混勻；2.快速取樣，使精子沒(méi)有時(shí)間從混懸液中沉降下來(lái)；3.重復(fù)取樣前，再次混勻精液標(biāo)本；4.精液滴在載玻片上，立即涂片，不要放置數(shù)秒后再涂片。2021/5/917染色步驟1.精子懸液涂片制備完成后，水平放置，空氣中自然干燥；2.加A液覆蓋組織片室溫反應(yīng)15秒，將玻片直立吸水紙上除去多余染液；3.加B液覆蓋組織片室溫反應(yīng)10秒，將玻片直立吸水紙上除去多余染液；4.加C液覆蓋組織片室溫反應(yīng)15秒，將玻片直立吸水紙上除去多余染液；5.流水中浸洗10~15次以除去多余染液；6.將玻片垂直豎立以去除水分，待完全干燥；7.油鏡下觀察精子形態(tài)。2021/5/918結(jié)果觀察1.精子頂體區(qū)染淡紫色，頂體后區(qū)染深紫色，精子體尾區(qū)染成淡紅色。2.世界衛(wèi)生組織（WHO）精子缺陷類型分類如下：2021/5/9192021/5/9201

正常精子形態(tài)2021/5/9212小頭梨形頭頂體區(qū)>70%頂體后區(qū)空泡>2過(guò)多殘留胞漿中段粗、彎曲插入雙尾彎曲2021/5/9223圓形頭錐形頭不定形頭大頭針狀頂體區(qū)>70%頂體區(qū)<40%頂體后區(qū)空泡>2中段粗不規(guī)則插入2021/5/9234扁平底不規(guī)則頭頂體區(qū)<40%中段粗不規(guī)則插入彎曲2021/5/9245頂體區(qū)>70%頂體后區(qū)空泡中段彎曲粗、不規(guī)則插入尾環(huán)狀卷曲、彎曲雙尾2021/5/925精子形態(tài)分析2021/5/9266-12021/5/9276-22021/5/9287-12021/5/9297-22021/5/9308-12021/5/9