需氧和兼性厭氧球菌

第三篇常見微生物鑒定技術(shù)永州職業(yè)技術(shù)學(xué)院楊曉斌常見微生物需氧和兼性厭氧球菌葡萄球菌屬鏈球菌屬腸球菌屬奈瑟氏屬革蘭陰性需氧和兼性厭氧桿菌腸桿菌科埃希菌屬沙門菌屬志賀菌屬克雷伯菌屬變形桿菌屬腸桿菌屬耶爾森菌屬弧菌科弧菌屬氣單胞菌屬假單胞菌屬非發(fā)酵革蘭陰性桿菌假單胞菌屬產(chǎn)堿桿菌屬不動(dòng)桿菌屬其他非發(fā)酵革蘭陰性桿菌其他革蘭陰性苛氧菌嗜血桿菌屬鮑特菌屬軍團(tuán)菌屬布魯菌屬幽門螺桿屬革蘭陽性需氧和兼性厭氧桿菌革蘭陽性無芽胞桿菌革蘭陽性需氧芽胞桿菌分枝桿菌屬和諾卡菌屬分枝桿菌屬諾卡菌屬厭氧菌梭狀芽胞桿菌屬革蘭陰性無芽胞厭氧桿菌革蘭陽性無芽胞厭氧桿菌和放線菌屬厭氧球菌螺旋體、支原體、衣原體、立克次體真菌病毒第七章需氧和兼性厭氧球菌需氧和兼性厭氧球菌廣泛分布于自然界、人的體表及與外界相通的腔道中。大多為條件致病菌，種類繁多鑒定較復(fù)雜，可根據(jù)溶血、形態(tài)染色和觸酶試驗(yàn)進(jìn)行初步鑒定。對人致病的球菌稱病原性球菌，主要引起化膿性炎癥，故又稱化膿性球菌。染色性革蘭陽性球菌：葡萄球菌屬、鏈球菌屬、腸球菌屬革蘭陰性球菌：奈瑟菌屬、卡他布蘭漢菌球菌革蘭染色革蘭陽性觸酶陽性微球菌科氧化微球菌屬發(fā)酵葡萄球菌屬O/F陰性鏈球菌科生長腸球菌屬不生長鏈球菌屬6.5%氯化鈉革蘭陰性生長卡他莫拉菌屬DNA酶陽性不生長奈瑟菌屬營養(yǎng)瓊脂，22℃第一節(jié)葡萄球菌屬葡萄球菌屬觸酶試驗(yàn)陽性、革蘭染色陽性球菌葡萄球菌屬目前有35個(gè)種、17個(gè)亞種，堆積成葡萄串狀，故稱之為葡萄球菌。引起人類疾病的重要菌種有金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌頭狀葡萄球菌人葡萄球菌一、生物學(xué)特性1.形態(tài)與染色直徑0.5?1.5μm、革蘭陽性球菌呈單個(gè)、成雙、短鏈（液體培養(yǎng)基或膿汁中）或成簇排列呈葡萄串樣。無鞭毛和芽胞，某些菌株能形成莢膜。當(dāng)細(xì)菌衰老、死亡、被吞噬后或在藥物作用下（L型菌），菌體可呈革蘭陰性。在金黃色葡萄球菌的細(xì)胞壁上有葡萄球菌A蛋白（SPA），具有抗原性。2.培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧，營養(yǎng)要求不高，在大多數(shù)培養(yǎng)基上生長迅速，最適溫度35?37℃，最適PH7.4。普通培養(yǎng)基上形成直徑2?3mm、圓形、凸起、表面光滑、濕潤不透明的菌落。產(chǎn)生金黃色、白色、檸檬色等脂溶性色素附著在菌落上。金黃色葡萄球菌血瓊脂平板上的典型菌落：金黃色、光滑整齊、微隆起、不透明。菌落周圍有透明溶血環(huán)（β-溶血環(huán)），其中有的小菌落變異株生長緩慢，菌落較小，易與β-溶血性鏈球菌的菌落混淆。在液體培養(yǎng)基中呈均勻混濁生長。某些菌株能耐受10%~15%的氯化鈉，在高鹽甘露醇平板上呈淡橙黃色菌落。金黃色葡萄球菌菌落透明溶血環(huán)（β-溶血環(huán)）3.生化反應(yīng)觸酶陽性，多數(shù)菌株分解葡萄糖、麥芽糖和蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。致病菌株分解甘露醇產(chǎn)酸，產(chǎn)生血漿凝固酶，耐熱DNA酶陽性。4.抗原構(gòu)造細(xì)胞壁抗原：蛋白抗原、多糖抗原蛋白抗原是完全抗原，有種屬特異性，無型特異性。SPA：葡萄球菌A蛋白，存在于葡萄球菌表面，結(jié)合在細(xì)胞壁的粘肽部分，具有抗吞噬作用。SPA可與人類IgG的Fc段非特異性結(jié)合，而不影響Fab段與特異性抗原結(jié)合的功能。5.分類葡萄球菌屬目前有35個(gè)種、17個(gè)亞種凝固酶凝固酶陽性葡萄球菌凝固酶陰性葡萄球菌噬菌體分型可將金黃色葡萄球菌分成4～5群26型質(zhì)粒分型、血清學(xué)分型、抗生素分型和細(xì)菌DNA的同源性分型，用來研究細(xì)菌的致病性、耐藥性、流行病學(xué)特點(diǎn)和細(xì)菌鑒別的關(guān)系引起人類疾病的重要菌種有金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、溶血性葡萄球菌

性狀金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌

菌落色素 金黃色白色白色或檸檬色

血漿凝固酶 ＋ — —

溶血素 ＋ — — SPA ＋ — —

分解甘露醇 ＋ — — 致病性 強(qiáng) 弱 無6.抵抗力耐熱：60℃1小時(shí)或80℃30min方可殺滅。耐干燥：在干燥的病理標(biāo)本中可存活2~3月。耐鹽：10％～15%Nacl培養(yǎng)基中能生長對堿性染料敏感（龍膽紫），50g/L苯酚、1g/L升汞溶液中15min死亡。耐藥菌株高（90%以上），耐甲氧西林金葡菌(MRSA)抵抗力最強(qiáng)的無芽胞細(xì)菌7.酶和毒素耐熱核酸酶葡萄球菌溶血素有α、β、γ、δ等破壞紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板以及肝細(xì)胞等腸毒素是一組對熱穩(wěn)定的可溶性蛋白質(zhì)，耐熱100℃30min,分子量為26～30kDa，能夠抵抗胃腸液中蛋白酶的水解作用。毒性休克綜合征毒素透明質(zhì)酸酶、磷脂酶、觸酶、殺白細(xì)胞素和表皮剝脫毒素等攜帶誘導(dǎo)性的青霉素酶和乙?；D(zhuǎn)移酶質(zhì)粒，通過轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)行質(zhì)粒的轉(zhuǎn)移部分菌株通過獲得外源性的macA基因而產(chǎn)生青霉素結(jié)合蛋白2a（PBP2a），導(dǎo)致對所有β內(nèi)酰胺類抗生素耐藥二、微生物學(xué)檢驗(yàn)1.標(biāo)本膿汁、血液、剩余食物、嘔吐物等2.鑒定（1）涂片染色鏡檢初步報(bào)告：“查見革蘭陽性球菌，葡萄串狀排列，疑為葡萄球菌”（2）分離培養(yǎng)血液、CSF等，增菌，如有混濁、膠凍狀凝塊，轉(zhuǎn)種膿、咽拭子、尿道分泌物，血平板糞便、嘔吐物、食物，高鹽甘露醇平板、卵黃高鹽平板（3）生化反應(yīng)觸酶試驗(yàn)血漿凝固酶試驗(yàn)：金葡陽性，可用乳膠凝集試驗(yàn)快速鑒定金葡甘露醇分解試驗(yàn)：金葡陽性（4）腸毒素檢測標(biāo)本-高鹽肉湯35℃48小時(shí)-煮沸肉湯30min-離心，取上清2ml注射至幼貓腹腔-4小時(shí)內(nèi)觀察。觸酶試驗(yàn)1.原理具有過氧化氫酶的細(xì)菌，能催化過氧化氫生成水和氧，出現(xiàn)氣泡2.試劑3%過氧化氫溶液3.方法取菌置于潔凈的試管或玻片上，然后滴加3%過氧化氫數(shù)滴，觀察結(jié)果4.結(jié)果出現(xiàn)大量氣泡的為陽性，不產(chǎn)生氣泡的為陰性5.應(yīng)用用于革蘭氏陽性球菌的鑒別，葡萄球菌和微球菌為陽性，鏈球菌和腸球菌為陰性，腸球菌多假陽性凝固酶試驗(yàn)1.原理葡萄球菌可產(chǎn)生兩種凝固酶：結(jié)合凝固酶，結(jié)合在細(xì)胞壁上，使血漿中的纖維蛋白原變成纖維蛋白而附著于細(xì)菌表面，發(fā)生凝集，可用玻片法測出。游離凝固酶，分泌至菌體外，作用類似凝血酶原物質(zhì)，可被血漿中的協(xié)同因子激活變?yōu)槟笜游镔|(zhì)，而使纖維蛋白原變成纖維蛋白，從而使血漿凝固，可用試管法測出。2.方法玻片法檢測結(jié)合凝固酶兔血漿試管法檢測游離凝固酶0.5ml兔血漿37℃水浴1-4h3.結(jié)果玻片法中有明顯顆粒樣凝集而鹽水對照無凝集為陽性試管法以血漿凝固為陽性4.意義致病性葡萄球菌；金黃色葡萄球菌多陽性3.鑒別要點(diǎn)三、臨床意義凝固酶陽性的金黃色葡萄球菌是重要致病菌可引起社區(qū)和醫(yī)院感染感染的特點(diǎn)化膿、壞死和形成膿腫，如果未經(jīng)有效治療，感染可擴(kuò)散至周圍組織或經(jīng)菌血癥轉(zhuǎn)移至其他器官常見的感染化膿性感染局部化膿性感染：癤、癰、外科切口、創(chuàng)傷等全身性感染：骨髓炎、化膿性關(guān)節(jié)炎、肺炎、心內(nèi)膜炎、腦膜炎、菌血癥等毒素樣疾?。菏澄镏卸?、胃腸炎等葡萄球菌性腸炎：使用抗生素引起的正常菌群失調(diào)凝固酶陰性的葡萄球菌（CoNS）是人體皮膚黏膜正常菌群之一是醫(yī)院感染的主要病原菌表皮葡萄球菌人工瓣膜性心內(nèi)膜炎、靜脈導(dǎo)管感染、腹膜透析性腹膜炎、血管移植物感染和人工關(guān)節(jié)感染等腐生葡萄球菌女性尿路感染的重要病原菌其他凝固酶陰性葡萄球菌重要的條件致病菌和免疫受損患者的感染菌產(chǎn)生莢膜多糖或糖萼有關(guān)增強(qiáng)細(xì)菌與外來物質(zhì)（生物性瓣膜、導(dǎo)管等）表面的粘附或在其表面形成一層生物膜而保護(hù)細(xì)菌對抗殺菌物質(zhì)作用。當(dāng)臨床檢測出MRSA，即使體外藥敏對頭孢菌素類“敏感”，也不宜向臨床報(bào)告。因?yàn)轶w內(nèi)活性試驗(yàn)已證實(shí)頭孢類對MRSA無效，且MRSA對所有的青霉素類、頭孢類、碳青烯霉烯類和β-內(nèi)酰胺/β-內(nèi)酰胺抑制劑復(fù)合抗菌劑及其相關(guān)抗生素耐藥，對氨基糖苷類和大環(huán)內(nèi)酯類常協(xié)同耐藥。治療MRSA所感染的藥物：糖肽類的萬古霉素和替考拉寧氟諾喹酮類的環(huán)丙沙星利福平（與其他抗生素聯(lián)用）磺胺類的復(fù)方磺胺甲惡唑（TMP-SMZ）第二節(jié)鏈球菌屬是一大群觸酶試驗(yàn)陰性，在液體培養(yǎng)基中常呈鏈狀排列的革蘭氏陽性球菌，是引起化膿性感染的另一大類主要的病原性球菌。A群鏈球菌化膿性炎癥、猩紅熱、產(chǎn)褥熱、新生兒敗血癥和鏈球菌超敏反應(yīng)。肺炎鏈球菌大葉性肺炎一、生物學(xué)特性1.形態(tài)與染色G＋球菌，圓形或卵圓形，直徑0.5~1.0μm液體培養(yǎng)基，鏈狀排列，長短不一。固體培養(yǎng)基或膿汁標(biāo)本，呈短鏈狀、成雙或單個(gè)排列無鞭毛、無芽胞，幼齡菌有莢膜。肺炎鏈球菌呈矛頭頭狀，鈍面相對，成雙排列。2.培養(yǎng)特性需氧或兼性厭氧，營養(yǎng)要求高，在含血液、血清或腹水的營養(yǎng)培養(yǎng)基中生長良好。最適溫度35?37℃，最適PH7.4~7.6，在5%~10%CO2中生長更好。（1）液體培養(yǎng)基中溶血性菌株：絮狀或顆粒狀沉淀生長不溶血性菌株：均勻混濁生長（2）固體培養(yǎng)基中0.1~0.75mm灰白色或乳白色、圓形、突起、表面光滑、半透明或不透明的細(xì)小菌落。血瓊脂平板菌落：灰白色、光滑型的細(xì)小菌落，中央呈臍窩狀。不同鏈球菌溶血狀況不同：甲型溶血性鏈球菌：草綠色溶血環(huán)（α型）乙型溶血性鏈球菌：透明溶血環(huán)（β型）丙型鏈球菌：不溶血（γ型）菌落：灰白色、光滑型的細(xì)小菌落，中央呈臍窩狀α-hemolyticstreptococcusγ-streptococcusβ-hemolyticstreptococcus3.生化反應(yīng)觸酶陰性、分解葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。有些鏈球菌水解七葉苷、馬尿酸鹽和淀粉。有些可耐受6.5%氯化鈉和膽汁。A群鏈球菌：桿菌肽敏感，PYR試驗(yàn)陽性B群鏈球菌：CAMP試驗(yàn)陽性α-溶血性鏈球菌不分解菊糖，對optochin耐藥肺炎鏈球菌分解菊糖，對optochin敏感，膽鹽溶菌試驗(yàn)陽性，莢膜腫脹試驗(yàn)陽性PYR試驗(yàn)（P138）1)原理：多數(shù)腸球菌含有吡咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮-β-萘基酰胺(PYR)，釋放出β-萘基酰胺，后者可與PYR試劑作用，形成紅色的復(fù)合物。2)方法：用接種環(huán)挑取待檢菌在含有PYR的紙片上涂擦，然后置35℃孵育5min，再于紙片上滴加PYR試劑，觀察紙片顏色。3)結(jié)果判斷、解釋和報(bào)告：約1min后紙片呈紅色為陽性，不變色為陰性。本試驗(yàn)是一種快速篩選鑒定試驗(yàn)，可用于鑒定能產(chǎn)生吡咯烷酮芳基酰胺酶的細(xì)菌如腸球菌、A群化膿性鏈球菌和某些凝固酶陰性的葡萄球菌等。尤其是用于腸球菌和D群鏈球菌的鑒別，腸球菌為PYR試驗(yàn)陽性，D群鏈球菌為陰性CAMP試驗(yàn)原理B群鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，可促進(jìn)葡萄球菌的β溶血毒素溶解RBC的活性，在兩菌的交界處溶血力加強(qiáng)，出現(xiàn)箭頭狀（半月形）溶血區(qū)培養(yǎng)基BAP方法先以產(chǎn)β溶血毒素的金葡菌劃一橫線接種于BAP，再將被測菌與前一劃線作垂直劃線接種，兩線不能相交，相距0.5-1cm，37℃培養(yǎng)18-24小時(shí)觀察結(jié)果，設(shè)陰陽性對照結(jié)果在兩劃線交界處出現(xiàn)箭頭樣溶血區(qū)為陽性應(yīng)用鏈球菌中，只有B群鏈球菌陽性，可作鑒定用4.抗原構(gòu)造（1）多糖抗原（C抗原）C抗原，具群特異性，細(xì)胞壁上的多糖成分，以此可將鏈球菌分類為A、B、C、D、F、G等20群。（2）蛋白質(zhì)抗原表面抗原，具型特異性，位于C抗原表面，是細(xì)胞壁的多糖成分。主要有M蛋白、F蛋白、G蛋白，其中M抗原是A群鏈球菌的主要致病物質(zhì)，還是引起超敏反應(yīng)的異嗜性抗原。肺炎鏈球菌有毒菌株有莢膜多糖抗原，存在于莢膜中，與毒力有關(guān)。肺炎鏈球菌含有C多糖，可與血清中一種正常蛋白質(zhì)出現(xiàn)沉淀反應(yīng)，這種正常蛋白質(zhì)稱C反應(yīng)蛋白（CRP）5.分類（1）根據(jù)溶血分類甲型溶血性鏈球菌（α-溶血，又稱草綠色鏈球菌）：代謝產(chǎn)物氧化紅細(xì)胞的血紅蛋白，紅細(xì)胞不完全溶解，在菌落周圍出現(xiàn)1~2mm寬的草綠色溶血環(huán)。乙型溶血性鏈球菌（β–溶血，又稱溶血性鏈球菌）：菌落周圍形成寬大（2~4mm）透明溶血環(huán)。丙型鏈球菌（γ溶血，又稱非溶血性鏈球菌）：不溶血，一般不致病，分布在乳類和糞便中。（2）根據(jù)多糖抗原分類細(xì)胞壁多糖抗原不同，分為20個(gè)血清群（A～H、K~V）對人類致病的90%為A群（均為乙鏈）B、C、D、G群偶見致病6.抵抗力對外界抵抗力不強(qiáng)，60℃30min可殺死。對常用消毒劑敏感，青霉素為首選藥。7.變異性有莢膜的肺炎鏈球菌經(jīng)人工傳代培養(yǎng)后可發(fā)生S-R變異，莢膜消失后互毒力隨之降低。二、微生物學(xué)檢驗(yàn)1.標(biāo)本膿汁、血液、鼻咽拭子、血液等，鏈球菌所致超敏反應(yīng)采血清做ASO。2.鑒定（1）涂片染色鏡檢膿汁或增菌液直接涂片，革蘭染色鏡檢：革蘭陽性呈鏈狀排列球菌，初步報(bào)告：“查見革蘭陽性球菌，鏈狀排列，疑為鏈球菌”革蘭陽性矛頭狀球菌成雙排列、菌體周圍有透明環(huán)，初步報(bào)告：“查見革蘭陽性矛頭狀球菌，成雙排列，疑為肺炎鏈球菌”肺炎鏈球菌（2）分離培養(yǎng)血液等，增菌，如有上層澄清、下層沉淀生長、紅細(xì)胞溶血或呈混濁或有綠色熒光，轉(zhuǎn)種血平板。如無菌生長，7天后報(bào)陰性。如疑為草綠色鏈球菌引起的惡急性心內(nèi)膜炎標(biāo)本，增菌培養(yǎng)應(yīng)廷長到4周。膿汁、鼻咽拭子，血平板，24~48小時(shí)后根據(jù)溶血現(xiàn)象不同區(qū)分甲型、乙型、丙型鏈球菌。（3）生化反應(yīng)觸酶試驗(yàn)陰性β-溶血性鏈球菌A群（化膿性鏈球菌）：桿菌肽敏感、PYR陽性B群（無乳鏈球菌）：CAMP陽性C群：CAMP陰性、桿菌肽耐藥、6.5%氯化鈉耐鹽陰性α-溶血鏈球菌草綠色鏈球菌：膽汁溶菌陰性、optochin耐藥、無B、D抗原、6.5%氯化鈉耐鹽陰性、PYR陰性，10℃、45℃不生長，膽汁七葉苷陰性，萬古霉素敏感。肺炎鏈球菌：分解菊糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣、optochin敏感、膽汁溶菌陽性D群鏈球菌：具D群多糖抗原，膽汁七葉苷陽性，6.5%氯化鈉耐鹽陰性、PYR陰性三、臨床意義三種重要的致病菌：A群、B群（β-溶血）和肺炎鏈球菌（α-溶血）1.β-溶血性鏈球菌β-溶血性鏈球菌主要介紹A、B、C群鏈球菌A群鏈球菌：致病性極強(qiáng)毒素致熱外毒素（紅疹毒素）：發(fā)熱，皮疹，引起猩紅熱鏈球菌溶血素：對心肌、神經(jīng)細(xì)胞有毒性作用；細(xì)胞毒性：破壞RBC、WBC、血小板等。侵襲性酶透明質(zhì)酸酶：分解透明質(zhì)酸，又名擴(kuò)散因子鏈激酶：溶解纖維蛋白，有利細(xì)菌擴(kuò)散鏈道酶：溶解DNA，有利細(xì)菌擴(kuò)散自身致病物質(zhì)粘附素：磷壁酸，F(xiàn)蛋白M蛋白：抗吞噬、粘附作用是胞壁成分，與人心肌、腎小球基底膜有共同抗原，引起超敏反應(yīng)。鏈球菌溶血素O（SLO)對O2敏感（含S-H）；抗原性強(qiáng)，相應(yīng)抗體—抗鏈球菌溶血素O抗體（抗O），可做為新近感染鏈球菌或風(fēng)濕活動(dòng)指標(biāo)（抗O效價(jià)大于1：400）。鏈球菌溶血素S（SLS）對氧穩(wěn)定；抗原性弱。B群鏈球菌（無乳鏈球菌）正常寄居于陰道和人體腸道或鼻咽部中。致病物質(zhì)與A群相似是引起新生兒菌血癥、腦膜炎、新生兒肺炎和敗血癥、產(chǎn)褥期膿毒血癥的常見菌。C群鏈球菌咽喉炎的病原菌2.α-溶血性鏈球菌主要包括草綠色鏈球菌（甲型鏈球菌）、肺炎鏈球菌和D群鏈球菌部分菌株。草綠色鏈球菌（甲型鏈球菌）口、鼻咽正常菌群肺炎鏈球菌口、鼻咽正常菌群，僅少數(shù)有莢膜的菌株對人致病?？芍麓笕~性肺炎、支氣管炎、化膿性腦膜炎、中耳炎等D群鏈球菌臨床意義肺炎鏈球菌1.G＋雙球菌，矛尖狀，鈍端相對，有莢膜。2.血平板：圓形凸起的細(xì)小菌落，草綠色半透明溶血環(huán)（a溶血)。3.與甲型溶血性鏈球菌的鑒別。肺炎鏈球菌甲型溶血性鏈球菌膽汁溶菌試驗(yàn)+-膽汁自溶酶菌體自溶激活４.致病物質(zhì)：莢膜、磷壁酸、神經(jīng)氨酸酶條件致病菌，主要引起大葉性肺炎。首選藥物：青霉素首選替代藥物：窄譜的頭孢菌素、紅霉素、萬古霉素特別注意：肺炎鏈球菌出現(xiàn)青霉素耐藥的肺炎鏈球菌（PRSP）和多重耐藥蜂窩組織炎（Cellulitis）

鏈球菌感染沿淋巴管擴(kuò)散原始培養(yǎng)物18h后菌落傳代后的純培養(yǎng)物傳代后的菌落直徑較首代有些縮小了,菌落濕潤程度也有些降低,但仍然很濕潤.optochin抑制試驗(yàn)抑菌環(huán)中也微弱的生長了些菌落,但經(jīng)過涂片發(fā)現(xiàn)是口腔球菌.可能是做該試驗(yàn)的同事挑菌落的時(shí)候,沒把握好.把雜菌帶進(jìn)去了.盡管如此,抑菌環(huán)還是非常明顯而寬大(22mm).生化反應(yīng)用的就是普通微量管,在接種前滴加小牛血清1滴.5%CO2,35℃培養(yǎng)18~24h后讀取并記錄結(jié)果.肺炎鏈球菌乳膠凝集試驗(yàn)左邊是測試，右邊是陰性對照藥敏試驗(yàn)（K-B法）很明顯，該菌是一株P(guān)NSP，是否為PRSP還要作MIC法才能確定。由于頭孢類不能采用K-B法，所以沒有做美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(CLSI)規(guī)定，最小抑菌濃度(MIC)≥2ug/ml為青霉素耐藥肺炎鏈球菌(PRSP)，MIC為0.12-1.0ug/ml為青霉素中度耐藥(PISP)或稱低度耐藥肺炎鏈球菌,MIC≤0.06ug/ml為青霉素敏感肺炎鏈球菌(PSSP)。青霉素不敏感肺炎鏈球菌(PNSP)包括PRSP和PISP第三節(jié)腸球菌屬腸球菌屬，觸酶試驗(yàn)陰性的單個(gè)、成雙或短鏈狀排列的革蘭陽性球菌。正常菌群，是重要的醫(yī)院內(nèi)感染致病菌。一、生物學(xué)特性1.形態(tài)與染色革蘭陽性球菌、呈單個(gè)、成對或短鏈狀排列。瓊脂平板上生長的細(xì)菌呈球桿狀。液體培養(yǎng)基中呈卵圓形、鏈狀排列。無芽胞和莢膜，個(gè)別菌種有稀疏鞭毛。2.培養(yǎng)特性兼性厭氧，最適生長溫度35℃，多數(shù)菌株在10℃和45℃均能生長，營養(yǎng)要求不高。部分糞腸球菌菌株在含有兔血、馬血或人血的平板上出現(xiàn)β-溶血，而在羊血平板上不出現(xiàn)。其他菌種出現(xiàn)α溶血或不溶血。在高鹽（6.5%氯化鈉）、堿性（PH9.6）、高膽汁（40%）培養(yǎng)基能生長?？膳c鏈球菌鑒別。3.生化反應(yīng)觸酶陰性，分解糖類產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，多數(shù)PYR陽性，膽汁七葉苷陽性。4.分類腸球菌屬原歸類于鏈球菌屬，但種系分類法證實(shí)糞腸球菌和屎腸球菌不同于鏈球菌屬的細(xì)菌，1984年將其命名為腸球菌屬.臨床標(biāo)本分離的腸球菌多屬于第2群。5.抵抗力抵抗力低，對低濃度氨基糖苷類、復(fù)方增效磺胺、頭孢、克林霉素耐藥。近年獲得性耐藥菌株增多，表現(xiàn)為對氨基糖苷類髙水平耐藥和對萬古霉素耐藥，對萬古霉索的耐藥是由基因介導(dǎo)。二、微生物學(xué)檢驗(yàn)1.標(biāo)本2.鑒定涂片染色鏡檢革蘭陽性，單個(gè)、成雙或短鏈狀排列球菌，初步報(bào)告“查見革蘭陽性球菌”分離培養(yǎng)血液標(biāo)本：增菌培養(yǎng)，至7天，如有混濁生長，轉(zhuǎn)種到血平板。膿、尿、傷口分泌物：血平板或選擇性培養(yǎng)基（疊氮鈉膽汁七葉苷平板）、麥康凱平板生化反應(yīng)觸酶陰性、氧化酶陰性分解甘露醇、蔗糖、精氨酸PYR陽性、膽汁七葉苷陽性6.5%氯化鈉可生長，10℃和45℃均能生長。血清學(xué)試驗(yàn)與D群抗血清發(fā)生凝集第四節(jié)奈瑟菌屬奈瑟菌屬專性需氧、革蘭陰性球菌對人體致病的只有腦膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌流行性腦脊髓膜炎淋病一、腦膜炎奈瑟菌（一）生物學(xué)特性1.形態(tài)與染色G-雙球菌，菌體呈腎形，成對排列，凹面相對；無芽胞、無鞭毛，新分離菌株多有莢膜和菌毛。流腦病人CSF中性粒細(xì)胞內(nèi)G-雙球菌離心，取沉淀物涂片革蘭染色2.培養(yǎng)特性苛養(yǎng)菌，營養(yǎng)要求高，在含有血清、血液或多種氨基酸和無機(jī)鹽培養(yǎng)基才能生長。氣體：初次培養(yǎng)須供給5%~10%CO2濕度：50%溫度：最適35℃~37℃酸堿度：PH7.4~7.6常用血平板、巧克力平板，1~2mm、光滑濕潤、灰褐色、半透明、邊緣整齊、圓形、凸起的菌落（露滴狀）。血平板上不溶血。卵黃雙抗平板（EPV）菌落較大。菌落在鹽水中易乳化。血清肉湯中混濁生長，如培養(yǎng)時(shí)間過長可產(chǎn)生自溶酶發(fā)生自溶。3.生化反應(yīng)觸酶陽性、氧化酶陽性分解葡萄糖和麥芽糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，不分解乳糖、甘露醇、半乳糖和果糖。4.抗原構(gòu)造和分類抗原構(gòu)造莢膜多糖抗原、外膜蛋白抗原、脂多糖抗原、核蛋白抗原根據(jù)莢膜多糖抗原分血清群：A、B、C、D、H、I、K、L、X、Y、Z、1916、29E、W135。致病的多為A、B、C三群，我國流行以A群為主。5.抵抗力抵抗力弱，床邊接種。對冷、熱、干燥、消毒劑和青霉素敏感。室溫中僅存活3小時(shí)。（二）微生物學(xué)檢驗(yàn)1.標(biāo)本血液，CSF，癍疹滲出物，鼻咽分泌物能產(chǎn)生自溶酶、抵抗力低，標(biāo)本注意保溫、保濕及時(shí)送檢或床旁接種。培養(yǎng)基要預(yù)溫，標(biāo)本不能置冰箱保存。2.鑒定涂片染色鏡檢革蘭染色陰性、中性粒細(xì)胞內(nèi)外、腎形、成雙排列，初步報(bào)告：“查見革蘭陰性雙球菌”分離培養(yǎng)血液、CSF：增菌（不含十二烷基硫酸鈉多粘菌素B蔗糖（SPS））、轉(zhuǎn)種其他標(biāo)本：血平板、巧克力平板、EPV，5%~10%CO2菌落涂片染色鏡檢生化反應(yīng)觸酶陽性、氧化酶陽性，分解葡萄糖和麥芽糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣血清學(xué)試驗(yàn)莢膜多糖抗原直接凝集試驗(yàn)陽性。先用群抗體血清，再用單價(jià)血清鑒定型別。3.鑒別要點(diǎn)（1）與其他相似菌屬的鑒別菌屬形態(tài)菌落特征氧化酶觸酶葡萄糖產(chǎn)酸硝酸鹽還原奈瑟菌屬球形灰白色、濕潤+++-莫拉菌屬球桿狀灰白色、濕潤++--不動(dòng)桿菌屬球桿狀灰白色、濕潤-++-金氏菌屬球桿狀米黃、灰棕色、濕潤+-++（2）與卡他布蘭漢菌鑒別菌名菌落特征莢膜自凝DNA酶葡萄糖產(chǎn)酸硝酸鹽還原奈瑟菌灰白色、濕潤、邊緣齊+--+-卡他布蘭漢菌灰白色或紅棕色、較干燥，邊緣不齊，特殊手感-++-+卡他布蘭漢菌：G-雙球菌，無芽胞無鞭毛，形態(tài)上不易與奈瑟菌鑒別。營養(yǎng)要求不高普通培養(yǎng)基18~20℃即