病理組織的固定-骨質(zhì)脫鈣

病理檢驗(yàn)技術(shù)

常規(guī)組織病理技術(shù)病理組織的固定骨質(zhì)脫鈣病理組織的固定骨質(zhì)脫鈣目的：為了切片時(shí)切出完整的切片,又不損傷切片刀的刀鋒。在取材時(shí)如遇到骨質(zhì)或鈣化灶,應(yīng)先進(jìn)行脫鈣處理后,才可轉(zhuǎn)入脫水、透明。因骨質(zhì)由鈣鹽組成,切片時(shí)既切不成完整的切片,又損傷切片刀的刀鋒。一、骨質(zhì)脫鈣方法

酸類脫鈣：骨組織或鈣化組織內(nèi)的鈣鹽多為不溶性，鈣鹽遇酸后生成一種可溶性的鈣鹽而游離出鈣離子，經(jīng)脫鈣后的骨組織易于切片。特點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單、價(jià)廉、脫鈣時(shí)間較快。但脫鈣時(shí)間如掌握不準(zhǔn)確，容易破壞組織，胞核染色不良。一、骨質(zhì)脫鈣方法

電解脫鈣：骨組織用白金絲環(huán)繞置于電解液(10%的甲酸和8%的鹽酸)中,白金絲作為陽(yáng)電極，另一端用碳棒作為陰電極，用6V直流電通電進(jìn)行電解，使骨中的鈣鹽離解出鈣離子，以達(dá)到脫鈣的目的。特點(diǎn)：此法脫鈣快，不傷害組織，染色結(jié)果尚佳，但需要安裝一套特殊的設(shè)備。一、骨質(zhì)脫鈣方法

螯合劑脫鈣：利用螯合劑配鈣，利用整合劑乙二胺四乙酸(EDTA)與鈣離子發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)而脫鈣。

特點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)是組織不被破壞，某些酶類可以保存；缺點(diǎn)是脫鈣作用非常緩慢，需時(shí)約數(shù)周。一、骨質(zhì)脫鈣方法

離子交換樹(shù)脂脫鈣法：用一種銨型潢化聚苯乙烯樹(shù)脂鋪在脫鈣液容器底部約1.5cm厚，將骨組織放在樹(shù)脂上，加入20%的甲酸(不能用硝酸和鹽酸等無(wú)機(jī)酸)，鈣鹽和甲酸生成的可溶性鈣鹽游離出鈣離子，離子交換樹(shù)脂可吸附液體中的鈣離子而脫鈣。

特點(diǎn)：此法所用的脫鈣液不宜使用無(wú)機(jī)酸而應(yīng)使用甲酸。用過(guò)的樹(shù)脂可用0.1mol/L的鹽酸洗2次，再用蒸餾水洗3次后可反復(fù)使用多次。二、脫鈣液

酸類脫鈣因脫鈣時(shí)間快，操作簡(jiǎn)易，是臨床外檢常用的一種脫鈣法。常用的酸類脫鈣劑有以下幾種：硝酸(nitric

acid)是一種強(qiáng)酸，脫鈣作用迅速，為常用的酸性脫鈣液。脫鈣時(shí)濃度為5%～10%，脫鈣時(shí)間約數(shù)小時(shí)至一天，脫鈣過(guò)程中應(yīng)多次更換新液，以保證酸的有效濃度，否則脫鈣速度會(huì)慢慢降低。加溫脫鈣可縮短脫鈣時(shí)間，但應(yīng)在37℃恒溫箱內(nèi)進(jìn)行，并應(yīng)在骨質(zhì)轉(zhuǎn)入酸液一段時(shí)間后每隔15～30分鐘檢查一次，否則如脫鈣過(guò)度，組織受損，染色不良，甚至整塊骨組織溶化無(wú)法制片。其缺點(diǎn)：如時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)形成亞硝酸，使溶液呈黃色，并迅即減慢脫鈣速度。組織黃染后也影響染色反應(yīng)，故需常換新液。二、脫鈣液鹽酸(hydrochloric

acid)是一種強(qiáng)酸，脫鈣作用快，用做脫鈣液的濃度為3%～10%，骨組織在鹽酸久置后，組織受損傷，胞核染色不良，一般不單獨(dú)使用鹽酸作為脫鈣劑。甲酸(formic

acid)屬于有機(jī)酸，是一種良好的脫鈣劑，但脫鈣速度不如硝酸和鹽酸，用做脫鈣的濃度為10%～50%，甲酸脫鈣即使脫鈣時(shí)間過(guò)長(zhǎng)對(duì)組織的破壞也較輕微?；旌霞姿猁}酸脫鈣液由甲酸10ml、鹽酸10ml和蒸餾水80m組成。此液對(duì)組織破壞較小，但脫鈣時(shí)間較長(zhǎng)些。酸類脫鈣液應(yīng)少量而多次更換新液，根據(jù)骨組織大小，每次用廣口砂塞瓶盛裝50～100ml酸液即可。如置入37℃的恒溫箱加溫脫鈣，應(yīng)在恒溫箱門(mén)掛一脫鈣的醒目標(biāo)記，或亮一紅燈，或調(diào)以定時(shí)鐘以免遺忘。三、脫鈣終點(diǎn)測(cè)定骨組織在脫鈣過(guò)程中，如脫鈣過(guò)度，輕者可使胞核染色不良；重者組織可嚴(yán)重受損，胞核不著色，紅染一片；如脫鈣不足，切片時(shí)仍可損傷刀鋒，使切片有刀痕或切片裂開(kāi)。一般用針刺，用大頭針輕刺經(jīng)用酸脫鈣的骨組織，在刺入時(shí)如手感無(wú)阻力者則脫鈣完成，如手感有阻力者則仍需繼續(xù)脫鈣。這種方法會(huì)給組織帶來(lái)?yè)p傷。理想方法是用草酸銨測(cè)定，在脫鈣過(guò)程中更換的最后一瓶脫鈣酸液5ml，加少許濃氨水中和，然后加入草酸銨飽和液0.5～1ml混合，稍搖后靜置片刻，如液體變白色混濁，說(shuō)明脫鈣尚不完全，這是由于草酸鹽與脫鈣液中的鈣離子生成草酸鈣沉淀；若液體仍透明則說(shuō)明脫鈣已達(dá)終點(diǎn)。四、脫鈣后組織處理脫鈣后，組織應(yīng)置于流水中沖洗半小時(shí)至數(shù)小時(shí)，以除去組織內(nèi)的酸液，必要時(shí)可置入5%的硫酸鈉中，30