上海市臨檢中心 PCR人員上崗培訓(xùn)班 課件8、臨床PCR實驗室常見問題及整改措施-蔣玲麗2016.3.23

臨床PCR實驗室常見問題及整改措施上海市臨床檢驗中心

蔣玲麗2016.3.23回顧1990年：PCR

技術(shù)在國內(nèi)開始用于臨床檢測90年代中期：假陽性？（假陰性？）《關(guān)于暫停臨床基因擴增檢驗的通知》（衛(wèi)醫(yī)政發(fā)[1998]第9號）《臨床基因擴增檢驗實驗室管理暫行辦法》（衛(wèi)醫(yī)發(fā)[2002]10號）《醫(yī)療技術(shù)臨床應(yīng)用管理辦法》的通知（衛(wèi)醫(yī)政〔2009〕18號）《臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》（衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)[2010]194號）醫(yī)療技術(shù)臨床應(yīng)用管理辦法（分類分級管理、審核）第一類：安全性、有效性確切，醫(yī)療機構(gòu)通過常規(guī)管理在臨床應(yīng)用中能確保其安全性、有效性的技術(shù)—醫(yī)療機構(gòu)自行組織實施第二類：安全性、有效性確切，涉及一定倫理問題或者風(fēng)險較高，衛(wèi)生行政部門應(yīng)當(dāng)加以控制管理的醫(yī)療技術(shù)—省級衛(wèi)生行政部門指定或者組建的技術(shù)機構(gòu)負責(zé)技術(shù)審核臨床基因擴增檢驗技術(shù)；第三類：具有下列情形之一，需要衛(wèi)生行政部門加以嚴格控制管理的醫(yī)療技術(shù)—衛(wèi)生部或衛(wèi)生部委托省級衛(wèi)生行政組織負責(zé)對指定的第三類醫(yī)療技術(shù)進行審核（一）涉及重大倫理問題（二）高風(fēng)險（三）安全性、有效性尚需經(jīng)規(guī)范的臨床試驗研究進一步驗證（四）需要使用稀缺資源基因芯片診斷技術(shù)（2011.5.3調(diào)整為二類）（五）衛(wèi)生部規(guī)定的其他需要特殊管理的醫(yī)療技術(shù)概況《上海市衛(wèi)生局<關(guān)于指定上海市臨床檢驗中心作為本市醫(yī)療技術(shù)臨床應(yīng)用能力技術(shù)審核機構(gòu)的通知>》（滬衛(wèi)醫(yī)政[2011]090號）《上海市臨床檢驗中心關(guān)于印發(fā)<上海市醫(yī)療機構(gòu)臨床基因擴增檢驗技術(shù)審核辦法>和<上海市醫(yī)療機構(gòu)基因芯片診斷技術(shù)審核辦法>的通知>》（滬臨檢辦[2011]29號）2014年中心自行開發(fā)了分子診斷技術(shù)臨床應(yīng)用管理專欄，其中包括審核申請、審核查詢、公共查詢、政策法規(guī)等欄目。（）《國務(wù)院關(guān)于第一批取消62項中央指定地方實施行政審批事項的決定》（國發(fā)〔2015〕57號）截止至2015年11月，目前通過審核的實驗室有104家。概況上海市臨床檢驗中心制定了《上海市醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室質(zhì)量管理基本內(nèi)容和要求》（附錄E）《上海市醫(yī)院臨床檢驗專業(yè)質(zhì)控督察表（分子生物學(xué)專業(yè)）》2011年起每年年底根據(jù)上述要求進行上海地區(qū)PCR實驗室全覆蓋督查實驗室設(shè)置督察內(nèi)容檢查方法

存在問題整改措施按照《醫(yī)療機構(gòu)臨

實驗室分區(qū)

各緩沖間相通，實際使用

1.實驗時隨手關(guān)門床基因擴增檢驗實

設(shè)置應(yīng)符合

和驗收時不一致驗室管理辦法》和

檢測方法要《基因芯片診斷技

求2.緩沖間相同的實驗室應(yīng)封鎖通道未根據(jù)項目相應(yīng)增加IV區(qū)

根據(jù)使用技術(shù)的要求術(shù)管理規(guī)范（試行）》相關(guān)要求執(zhí)行（例采用雜交法開展HPV分型項目）相應(yīng)增加區(qū)域試劑準備區(qū)形同虛設(shè)（無

試劑分裝應(yīng)在試劑準移液器等）

備區(qū)操作II區(qū)安裝沖眼器并保證正常使用狀態(tài)未安裝沖眼器或不能正常出水移動紫外車缺或已壞未及

每個實驗區(qū)配備移動紫外車并保證正常使用狀態(tài)時更換文件和記錄管理督察內(nèi)容檢查方法

存在問題整改措施原始記錄和質(zhì)

檢查原始記

記錄表格設(shè)計不量記錄應(yīng)完整、

錄和質(zhì)量記

適用（或簡單或?qū)嶒炇覒?yīng)有適合自身實際情況又符合現(xiàn)行規(guī)章制度的記錄管理制度及記錄表格清晰，至少保存2年。錄。復(fù)雜）記錄不全\潦草\涂改\不真實記錄應(yīng)完整，修改應(yīng)采用杠改；記錄應(yīng)真實可追溯儀器壞，數(shù)據(jù)丟失原始數(shù)據(jù)應(yīng)定期備份（不同電腦）無儀器打印結(jié)果的檢驗項目缺原始記錄或記錄不全（例雜交項目無儀器打印結(jié)果的檢驗項目記錄信息至少應(yīng)包括檢測項目、試劑品牌、批號、有效期、標本唯一編號、檢測結(jié)果、檢測者、檢測記錄保存有缺陷）

日期（例雜交建議采用掃描、拍照等方式電子版保留)人員資質(zhì)督察內(nèi)容檢查方法存在問題整改措施實驗室至少應(yīng)有2檢查檢測人員的相

1.未取得上崗證的

1.及時參加培訓(xùn)取名具有臨床基因擴

關(guān)資質(zhì)、PCR上崗增檢驗技術(shù)上崗證

證等。的本單位在職技術(shù)人員。開展遺傳性疾病或基于組織、人員獨立操作，主

得上崗證；觀認為只要不在報告上出現(xiàn)名字就可以；2.規(guī)定報告審核操作規(guī)程。2.病人報告單上的檢測人員和審核人員與實際不一致；細胞等分子病理并出具診斷報告的實驗室，至少應(yīng)有1名具備出具相關(guān)診斷報告資質(zhì)的本單位在職醫(yī)師。3.試劑公司人員參與檢測。人員資質(zhì)督察內(nèi)容檢查方法

存在問題整改措施新進人員應(yīng)有崗前培訓(xùn)檢查新進人

1.缺相應(yīng)的制度員培訓(xùn)記錄1.實驗室應(yīng)制定員工能力評審的內(nèi)容和方法（新進、轉(zhuǎn)崗）。2.以為取得PCR上崗證就可以2.定期評審員工的工作能力，并保存勝任的證據(jù)：直接觀察常規(guī)工作過程和程序、直接觀察設(shè)備維護和功能檢查、監(jiān)控檢驗結(jié)果的記錄和報告過程、核查工作記錄、評估解決問題的技能、檢驗特定樣品。3.初審實驗室大多數(shù)缺員工是否能勝任其崗位的記錄人員管理督察內(nèi)容檢查方法存在問題整改措施應(yīng)建立全部人員

PCR人員檔案記

1.實驗室技術(shù)人員

實驗室應(yīng)分冊建相關(guān)的教育背景、錄專業(yè)資格、培訓(xùn)、經(jīng)歷及能力記錄檔案。檔案內(nèi)容過于簡單：

立技術(shù)人員技術(shù)只有學(xué)歷、職稱、

檔案，檔案至少PCR上崗證書復(fù)印件，應(yīng)包括以下內(nèi)容：其余缺學(xué)歷、職稱、臨床基因擴增檢驗技術(shù)上崗證書復(fù)印件；培訓(xùn)、能力評審等資料，并定期更新。2.未及時更新人員培訓(xùn)與評估督察內(nèi)容檢查方法存在問題整改措施臨床實驗室負責(zé)人

檢查PCR相關(guān)

1.缺培訓(xùn)計劃、或

1.計劃制定應(yīng)有針對性，應(yīng)組織實驗室人員

人員培訓(xùn)記進行業(yè)務(wù)學(xué)習(xí)和培

錄，培訓(xùn)效訓(xùn)，有相應(yīng)的學(xué)習(xí)

果進行評估培訓(xùn)制度、計劃和

的記錄。記錄，并定期（每12個月至少一次）對學(xué)習(xí)培訓(xùn)效果進行評估。計劃缺乏針對性；

每年有重點2.培訓(xùn)形式可以多樣：講2.未見培訓(xùn)記錄座（包括小組教學(xué)）、計算機相關(guān)的練習(xí)、自學(xué)、觀看示例-

現(xiàn)場或視頻、實踐監(jiān)督、實踐結(jié)果的自我評估、特殊樣品的檢驗或鑒定3.有培訓(xùn)記錄未見效果評估記錄3.效果評估形式：口頭提問、筆試、現(xiàn)場操作演示、獲取合格證、填寫培訓(xùn)小結(jié)等環(huán)境與設(shè)施1督察內(nèi)容

檢查方法存在問題整改措施實驗室檢驗流程應(yīng)滿足檢驗質(zhì)量的需求，應(yīng)保證檢驗過程中各種環(huán)境和輔助條件的穩(wěn)定檢查實驗室檢

1.I區(qū)沒有離心機；做驗流程應(yīng)滿足

RNA項目的未配備冷凍離

2.安裝獨立空調(diào)；規(guī)定溫單一方向的要

心機

濕度允許范圍。1.各區(qū)設(shè)施滿足使用需求求；2.溫、濕度超出實驗規(guī)定范圍，未見糾正措施1.冰箱溫度缺允許范圍

1.根據(jù)試劑說明書要求規(guī)實驗室物品應(yīng)分區(qū)放置；基于組織的分子病理項目其病理切片和前處理在獨立區(qū)域完成定試劑儲存要求，2.冰箱溫度非檢測日不記錄2.每日實施監(jiān)控并有記錄3.冰箱溫度計缺或壞，仍在記錄不同工作區(qū)域內(nèi)物品混

各區(qū)物品貼區(qū)域標識加以用（移液器、手套、記

區(qū)分錄未按要求分區(qū)放置）環(huán)境與設(shè)施2督察內(nèi)容檢查方法存在問題整改措施實驗室檢驗流程應(yīng)

檢查實驗室檢驗

進入和使用實驗室各

安裝門禁或貼標識滿足檢驗質(zhì)量的需

流程應(yīng)滿足單一

區(qū)域未見相應(yīng)措施加

加以限制和控制；求方向的要求；以限制和控制；科研

非檢測人員進出登人員進出管理混亂檢測、科研儀器無標

每件設(shè)備均應(yīng)有唯記實驗室物品應(yīng)分區(qū)放置；識加以區(qū)分一性標簽、標記或其他識別方式，有明顯的標識表明儀器的狀態(tài)冰箱內(nèi)科研試劑和常

應(yīng)適當(dāng)分開并標識規(guī)檢測試劑混放清潔用具混用或共用；

各區(qū)專用清潔用具；指定人員；培訓(xùn)；記錄未對相關(guān)人員培訓(xùn)設(shè)備材料配置督察內(nèi)容檢查方法存在問題整改措施實驗室必須有合

使用的儀器、設(shè)適、充分、質(zhì)量

備、試劑、耗材、可靠的儀器、設(shè)

輔助品等三證齊備、試劑、耗材、

全；耗材等滿足輔助品，適用于

PCR實驗室使用的各類型、各種工

需要作量的需求，以保證檢驗質(zhì)量。實驗室所使用的儀器、商品試劑、耗材、輔助品必須符合國家相關(guān)規(guī)定。設(shè)備管理督察內(nèi)容檢查方法存在問題整改措施各類儀器設(shè)備均

查儀器設(shè)備檔

儀器設(shè)備檔案

應(yīng)保存主要設(shè)備的檔有專人保管案內(nèi)容不全案，檔案內(nèi)容應(yīng)包括：設(shè)備標識、型號、序號或其它唯一性識別、到貨日期和投入運行日期、目前放置地點、接收時的狀態(tài)、儀器使用說明書或其存放處、證實設(shè)備可以使用的設(shè)備驗證報告、校準和/或檢定報告、維護、損壞、故障或維修的記錄儀器校準1督察內(nèi)容檢查方法存在問題整改措施制定維護保養(yǎng)

各類儀器設(shè)備

缺部分儀器的

根據(jù)儀器說明書制定每臺儀器的維護保養(yǎng)計

保養(yǎng)計劃計劃，比對/的保養(yǎng)計劃，并寫入SOP中，并編入使用記錄表中。校準程序，編

劃，年度校準、制年度校準、

檢定計劃檢定計劃，并缺部分儀器的

根據(jù)儀器的實際使用要求，制檢定或校準計

定實際使用量程的檢定或校準有執(zhí)行記錄。劃計劃，并寫入SOP中注1：擴增儀校準參數(shù)至少包括：光路、背景熒光、溫度精確度、溫度均一性、升降溫速率。注2：恒溫金屬浴的校準應(yīng)覆蓋常用的檢測溫度，應(yīng)校準溫度精確度、溫度均一性。注3：移液器的校準應(yīng)覆蓋常用的測量量程，容量允許誤差和測量重復(fù)性要求應(yīng)符合國家標準JJG646-2006的要求注4：需內(nèi)部比對、校準的輔助設(shè)備，實驗室應(yīng)根據(jù)國家計量部門或生產(chǎn)廠商的規(guī)定制定內(nèi)部校準操作規(guī)程和要求。如何判斷符合不符合??？容量允許誤差±（%）容量允許誤差±（%）標稱容量

檢定點（μl）

（μl）標稱容量

檢定點（μl）

（μl）重復(fù)性≤（%）重復(fù)性≤（%）0.10.5120.020.012.020.012.012.020.012.08.010.010.06.0212.08.04.012.08.04.08.04.03.08.04.03.06.04.02.06.04.02.04.02.01.54.02.01.5201020210.2110.06.0254050102552526.00.5110.06.02040554.0112.08.06.054.0255010108.04.0容量允許誤差±（%）容量允許誤差±（%）標稱容

檢定點量（μl）

（μl）標稱容量

檢定點（μl）

（μl）重復(fù)性≤（%）重復(fù)性≤（%）10508.03.02.04.02.01.54.02.01.53.02.01.54.01.51.02.01.01.02.01.01.01.51.01.01005002.01.01.01.51.00.51.00.50.61.00.60.61.00.50.51.50.50.20.50.20.20.50.20.210001002002503001002010002501002002525005000125025005001252505025005000100050001000015030010000JJG646-2006檢定規(guī)程有允許范圍的要求，應(yīng)寫入SOP！儀器校準2-外部校準督察內(nèi)容檢查方法

存在問題整改措施定期對擴增儀、雜

檢查儀器

1.儀器投入使用前未進行校準或

1.校準SOP中制定交儀、生物安全柜、校準檢定高速冷凍離心機、

/校準、恒溫金屬浴、移液

比對報告器、溫度計、溫濕儀器校準參數(shù)、校準周期、判斷標準未定期校準或部分未校2.校準未覆蓋檢測常用量程（例2.實驗室檢測人員提出校準要求移液器、恒溫金屬?。┒扔嬤M行校準或檢定，開展分子病理項目需定期對切片機、撈片水浴槽進行校準。有合格的校準或檢定報告。3.校準不符合要求的設(shè)備仍在使3.實驗室審核校準報告用4.盡量提供原始數(shù)據(jù)，尤其是有些廠家校準或檢定的儀器。4.

校準報告中校準數(shù)據(jù)錯誤未發(fā)現(xiàn)5.未引用校準出現(xiàn)的校準因子（例溫度計、恒溫金屬浴）6.缺原始記錄（例擴增儀）恒溫金屬浴校準未覆蓋全部使用量程。不符合校準報告未經(jīng)分析，并仍在使用。移液器校準在100

μl，500

μl和1000

μl三個校準點的準確度和精確度完全一致！校準數(shù)據(jù)不真實！一個醫(yī)院兩次的校準報告！校準數(shù)據(jù)不真實！儀器校準3-內(nèi)部比對檢查方法

存在問題整改措施檢查內(nèi)部比

1.無相應(yīng)的內(nèi)部比對操作規(guī)程1.完善操作規(guī)程對操作規(guī)程和比對報告2.保留用于比對的儀器的校準報告并保證校準合格，并在比對時引入校準因子。3.用于比對的儀器應(yīng)覆蓋需要比對儀器的量程。4.內(nèi)部比對記錄信息最少應(yīng)包括：比對設(shè)備編號、

用于比對設(shè)備的校準信息（校準日期、校準有效期、校準單位）、比對時間、標準設(shè)備實測數(shù)據(jù)、比對設(shè)備實測數(shù)據(jù)、判斷標準、結(jié)論、比對人、比對日期、科室負責(zé)人。2.用于比對的儀器未校準（例移液器-無相應(yīng)校準過的天平；溫度計-無相應(yīng)校準過的溫度計）3.用于比對的器具量程不適合4.無記錄、記錄信息不全或記錄不真實(主要為移液器、溫濕度計和恒溫金屬浴)5.比對時未引入比對器具的校準因子。用于比對的溫度計量程不合適！P100記錄不真實！原始記錄比對點為1μl，5μl，10μl1.用于比對的溫度計在比對-20℃時應(yīng)該引入校準因子！2.

-40℃點未校準，不能用于低溫冰箱溫度計的比對！比對設(shè)備編號比對環(huán)境記錄詳細的比對記錄原始信息記錄比對結(jié)論比對日期、比對人員、科室負責(zé)人等試劑耗材管理督察內(nèi)容檢查方法存在問題整改措施檢驗試劑和一次性耗材有專人保管，檢查試劑及耗材的保管、存存在過期試劑根據(jù)使用數(shù)量訂購試劑應(yīng)在有效期內(nèi)使用，

放及效期并按其規(guī)定的保存要求存放實驗室應(yīng)對耗材、試劑進行驗收；對離心管應(yīng)進行暴管和抑制物檢驗；更換試劑批號時應(yīng)進行試劑批間差檢驗查離心管、Tip

未對耗材進行質(zhì)檢或

離心管爆管實驗、Tip頭驗收記錄；質(zhì)檢不完整頭濾芯密封實驗；進行耗材抑制物質(zhì)檢（除非標明不含抑制物）試劑質(zhì)檢記錄1.未對不同試劑批號

1.不同批次試劑需要質(zhì)進行質(zhì)檢

檢2.使用質(zhì)控品質(zhì)檢2.采用臨床標本質(zhì)檢3.質(zhì)檢后不知道如何

3.質(zhì)檢后應(yīng)有判斷規(guī)則判斷

進行判斷整改措施-試劑質(zhì)檢判斷可參考CNAS-CL36醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認可準則在基因擴增檢驗領(lǐng)域的應(yīng)用說明1.離心管爆管實驗：隨機抽查10個，每個裝三分之二的蒸餾水，1，3000rpm/分鐘離心10分鐘；放恒溫金屬浴100℃15分鐘，觀察是否出現(xiàn)爆管。2.Tip頭密封性：用適配加樣器配合吸取最大量程生理鹽水，觀察有無吸孔堵塞、漏氣等現(xiàn)象發(fā)生；制備一個含1～2%甘油及色素（如甲基橙）的水溶液，如果吸頭的最大體積為100μl，則將加樣器吸取體積調(diào)至110～120μl，再套上吸頭后吸取上述有色液體，觀察密封性。3.

定性試劑質(zhì)檢：選擇陰性和弱陽性的樣品進行試劑批號驗證，檢測結(jié)果符合則認為新批號試劑合格，可以應(yīng)用。4.定量試劑質(zhì)檢：應(yīng)進行新舊試劑批間的差異驗證。選取5個舊批號檢測過的樣品，覆蓋測量區(qū)間（包括陰性、臨界值、低值和高值），至少4個樣品測量結(jié)果偏倚<7.5%，其中陰性和臨界值樣品必須符合預(yù)期值。5.耗材抑制物質(zhì)檢：可參考定量試劑質(zhì)檢。標明不含抑制物的請供應(yīng)商提供證明文件，可不進行耗材抑制物質(zhì)檢！樣品采集與處理1檢查方法存在問題整改措施應(yīng)制定各類患者準

操作規(guī)程未涉及所有樣品類

細化操作規(guī)程，規(guī)定不同類型樣備、標本采集、處

型的采集、運送、儲存等的

品的要求（包括血液、分泌物、理、運送、接收要求痰液等）（或拒收）和儲存要求的具體要求和標準操作規(guī)程；應(yīng)有相應(yīng)的執(zhí)行記錄；樣品全程可跟蹤樣品儲存監(jiān)控記錄接收標本時標本狀態(tài)信息記

應(yīng)記錄收到標本的日期和時間，錄不完善（尤其是獨立實驗

同時應(yīng)記錄標本接收時的詳細狀室）分泌物標本、分子病理標本

實驗室應(yīng)確定標本是否符合檢測缺驗收記錄

要求,

拒收標本原因要明確態(tài)實驗室對標本拒收原因缺定

定期評估，制定切實可行的整改期分析及整改措施

措施，提高工作效率檢測前、后標本放置同一冰

標本分區(qū)放置，或用標識加以區(qū)箱，未見標識加以區(qū)分

分試劑盒都簡單提供樣本采集要求，但不會提到驗收和拒收的具體標準！實驗室應(yīng)根據(jù)實際情況制定標準！樣品分區(qū)放置并加以標識！樣品采集與處理2督察內(nèi)容檢查方法

存在問題整改措施標本應(yīng)正確采集并符合檢測要求。用于

查驗收、拒收

HCVRNA檢測項目未按操

應(yīng)及時吸取血RNA擴增檢驗的標本應(yīng)盡快處理，避免

的執(zhí)行記錄RNA的降解。（適合非分子病理）清放-20℃保存作規(guī)程要求運送或保存。（例HCV

RNA檢測頻次1周1次，標本在2-8℃最長存放1周

）標本檢測全過程包括核酸提取、擴增、

查原始記錄、

在操作過程中未使用唯

無論采用何種產(chǎn)物分析、保存等應(yīng)能溯源。保存的標本編號唯一性和連貫性方法保證標本的唯一編號。一編號；留存標本未使用唯一編號用于分子病理檢測的石蠟包埋組織標本

查病理標本評應(yīng)按要求及時進行切片、脫蠟等處理，

估記錄新鮮組織標本應(yīng)及時進行取材作冰凍切片或切開、固定等處理，穿刺細胞應(yīng)及時進行制備細胞蠟塊、切片等處理。組織標本如需要用顯微切割法刮取組織以保證有足量的腫瘤細胞，應(yīng)由經(jīng)驗豐富的工作人員審閱，標注出腫瘤細胞所在區(qū)域。（適合分子病理）標本號不唯一，除非有可以證明溯源性的措施！檢驗方法的確認與驗證檢查方法存在問題整改措施檢查方法學(xué)驗證操

缺操作規(guī)程作規(guī)程完善操作規(guī)程新開展項目或儀器、

1.更換儀器只做部分項

如對試劑或方法進行重要試劑、方法更新時，

目的驗證

修改，應(yīng)對所采用的試劑應(yīng)有方法學(xué)驗證的

2.驗證參數(shù)不全、標本

或方法進行性能驗證，實實驗記錄

數(shù)量不足

驗室應(yīng)獨自完成驗證試驗，3.參比方法選擇有缺陷，

并選擇有資質(zhì)的實驗室比無法比較

較。4.試劑性能更換未做驗

定量：精密度、正確度、證（如定量改為定性、

線性范圍標本類型更換）定性：精密度、符合率5.不是實驗室完成整改措施注1.性能驗證參考文件

–-美國臨床和美國國家臨床實驗室標準協(xié)會（CLSI）文件CLSI

EP5-A2《定量測量方法的精密度性能評價》CLSI

EP9-A2《用患者樣本進行方法學(xué)比對及偏倚評估》CLSI

EP15-A《用戶對精密度和準確度性能的核實指南》CLSI

EP6-A《定量測量方法的的線性評價：統(tǒng)計方法》注：性能驗證過程中所有的檢測數(shù)據(jù)均為一個獨立測試的結(jié)果，不能采用提取好的DNA或RNA進行評估注2.個體化醫(yī)學(xué)檢測性能驗證的特殊性驗證性能參數(shù)：精密度/重復(fù)性、正確度（突變型的檢測能力）、分析特異性（如正常野生型基因組與突變型之間的區(qū)分能力）、檢出限（每個反應(yīng)能檢出的最小突變拷貝數(shù)）、選擇性（突變型與野生型不同比例設(shè)定）、覆蓋標本的范圍（如不同的基因型）標本的類型（血液、尿液、新鮮/冷凍組織、石蠟包埋組織）性能驗證存在難點：患病率低或罕見病其陽性標本少、缺乏金標準實驗室根據(jù)實際使用情況選擇并進行驗證！操作規(guī)程督查要求存在問題整改措施臨床實驗室開展的

1.內(nèi)容不詳細，缺可操作性1、檢驗項目操作規(guī)每個項目均應(yīng)有操

（方法學(xué)驗證、耗材試劑質(zhì)檢、

程應(yīng)參照《臨床檢作規(guī)程且現(xiàn)行有效，

室內(nèi)質(zhì)控、分析前措施、設(shè)備

驗操作規(guī)程編寫要并嚴格按規(guī)程進行

校準參數(shù)及判斷標準等）求》和說明書編寫操作；2.操作規(guī)程不是現(xiàn)行有效2.更換試劑批號時仔細閱讀試劑說明書操作規(guī)程中應(yīng)有儀器使用、維護保養(yǎng)、校準等內(nèi)容；儀器設(shè)備和檢驗項目的簡易操作卡應(yīng)與正式操作規(guī)程保持一致。3.實驗室各區(qū)未放置操作規(guī)程4.試劑重要參數(shù)修改后未及時更新3.操作規(guī)程為操作指導(dǎo)性文件，應(yīng)具可操作性5.缺操作規(guī)程

（如內(nèi)部校準、無EQA的室間比對等）6.標本運送、保存、處理等與操作規(guī)程規(guī)定不一致4.寫、做、記一致室內(nèi)質(zhì)控1督查要求室內(nèi)質(zhì)控應(yīng)覆蓋所開

1.室內(nèi)質(zhì)控未覆蓋全部

理解室內(nèi)質(zhì)控的作用；每展的檢驗項目；

項目(尤其定性項目)

次實驗都應(yīng)做室內(nèi)質(zhì)控。存在問題整改措施對失控項目填寫失控

2.初審實驗室方法學(xué)驗

每次檢測應(yīng)設(shè)置陰性、弱分析報告，糾正失控

證時有時不做室內(nèi)質(zhì)控

陽性質(zhì)控和（或）強陽質(zhì)后才發(fā)出檢驗報告，同時評估可能出現(xiàn)的質(zhì)量偏差，并做好記錄。（如：對已測標本進行抽樣檢測），并做好記錄。控。采用提取好的DNA或RNA

盡量模擬臨床標本；以監(jiān)或試劑盒提供的質(zhì)粒作

控核酸提取、擴增、產(chǎn)物為室內(nèi)質(zhì)控，未監(jiān)控核

分析等標本檢測全過程酸提取、擴增整個過程擴增條件相同的不同檢

應(yīng)分別做室內(nèi)質(zhì)控測項目只做其中一個項目室內(nèi)質(zhì)控室內(nèi)質(zhì)控2督察要求存在問題整改措施1.未及時判斷；未及時

實驗室應(yīng)根據(jù)統(tǒng)計學(xué)質(zhì)控方法分析失控或分析流于形

建立檢測項目的控制限。并及式。時分析。2.實驗室未根據(jù)統(tǒng)計學(xué)

定量項目質(zhì)控規(guī)則至少采用13S質(zhì)控方法建立實驗室自

和22S規(guī)則。實驗室應(yīng)根據(jù)統(tǒng)計身檢測項目的控制限學(xué)質(zhì)控方法建立檢測項目的控制限。并進行累積評價。檢測項目結(jié)果有效性判斷除室內(nèi)質(zhì)控結(jié)果在控外，還應(yīng)判斷相關(guān)參數(shù)是否滿足試劑說明書的要求結(jié)果有效性判斷未關(guān)注

結(jié)果有效性判斷除室內(nèi)質(zhì)控結(jié)標準曲線的相關(guān)系數(shù)或

果在控外，還應(yīng)滿足試劑說明內(nèi)參是否滿足試劑說明

書的要求書的要求如檢測過程中對被檢基因

擴增條件相同的不同檢

應(yīng)使用各自的標準曲線判斷結(jié)組核酸（DNA和/或RNA）濃

測項目擴增時共用標準

果度有規(guī)定時，應(yīng)符合制造

曲線商規(guī)定的要求。病理實驗室原始記錄表

記錄每個標本的測定濃度并保上未記錄濃度

證符合試劑說明書的檢測要求結(jié)果有效性判斷！次數(shù)32斜率閾值相關(guān)系數(shù)

擴增效率-5.10-4.1258.9048.330.9739

57.06%0.9895

74.87%標準曲線不符合！36次數(shù)24斜率相關(guān)系數(shù)擴增效率-3.35-3.38-3.210.99890.99940.998498.84%未及時輸入軟件就不能2597.63%

及時發(fā)現(xiàn)失控！26104.89%室內(nèi)質(zhì)控失控處理及原因分析多種因素可導(dǎo)致出現(xiàn)失控，這些因素包括：操作失誤，試劑、校準物、質(zhì)控物失效、儀器維護不良以及采用不當(dāng)?shù)馁|(zhì)控規(guī)則和太小的質(zhì)控限范圍，一個分析批測定的質(zhì)控物數(shù)不當(dāng)?shù)?。尋找失控原因和處理的步驟如下：重新測定同一質(zhì)控物新開一瓶質(zhì)控物進行儀器維護或更換試劑重新校準請專家?guī)椭ⅲ喝缡钦媸Э?，在查出原因進行糾正后，應(yīng)重新檢測患者標本后發(fā)出檢測報告。弱陽性樣本常見的失控原因核酸提取中的隨機誤差。如核酸提取中的丟失、有機溶劑的去除不徹底、標本中擴增抑制物的殘留等。儀器的問題。如擴增儀孔間溫度的不均一性、孔內(nèi)溫度與所示溫度的不一致性等。試劑的問題。如Taq酶和/或逆轉(zhuǎn)錄酶的失活、探針的純度及標記效率和核酸提取試劑的效率等。陰性樣本常見的失控原因主要為擴增產(chǎn)物的“污染”和/或臨床標本的核酸提取過程中發(fā)生的標本間的交叉

“污染”。室間質(zhì)評檢查方法存在問題整改措施應(yīng)參加室間質(zhì)評；

室間質(zhì)評樣品特殊

應(yīng)與臨床標本同等室間質(zhì)評樣本應(yīng)與

對待，無法反應(yīng)實

對待臨床標本同等對待；

際情況對室間質(zhì)評不合格項目，應(yīng)查找原因，采取糾正措施。室間質(zhì)評結(jié)果原因

分析室間質(zhì)評反饋分析流于形式，缺

結(jié)果，對不合格項乏針對性目，應(yīng)及時查找原因，采取糾正措施室間質(zhì)控失控處理及原因分析收集和審核數(shù)據(jù)：書寫誤差的檢查質(zhì)控記錄，校準狀況及儀器性能的檢查如可行時，重新分析原來樣品和計算結(jié)果評價該分析物實驗室的歷史檢測性能問題分類書寫誤差方法學(xué)問題技術(shù)問題室間質(zhì)量評價樣品的問題室間質(zhì)量評價的評價問題經(jīng)調(diào)查后無法解釋的問題無室間質(zhì)評項目的替代程序1督察內(nèi)容存在問題整改措施應(yīng)定期（每年至

對暫無室間質(zhì)評的

操作規(guī)程對無室間質(zhì)評的項目應(yīng)少一次）進行實

項目未進行比對驗室間比對：比規(guī)定比對程序?qū)悠窋?shù)量至少5個，濃度包括正常和異常水平，判定標準應(yīng)有≥80%的結(jié)果滿足要求。無EQA項目應(yīng)定期（每年至少2次）1.選擇的比對實驗

進行實驗室間比對，并選擇合適室無相關(guān)資質(zhì)；的實驗室；比對樣品數(shù)量至少5份，濃度包括正常和異常水平，判定標準應(yīng)有≥80%的結(jié)果滿足要求2.比對標本濃度選擇單一使用標本為非原始

應(yīng)使用臨床標本監(jiān)測檢測全過程標本，而是提取產(chǎn)物無室間質(zhì)評項目的替代程序2督察內(nèi)容存在問題整改措施當(dāng)實驗室間比對不可行

當(dāng)實驗室間比對不可行

實驗室應(yīng)制定其他評價或不適用時，實驗室可

或不適用時，缺其它方

方法，確保檢測結(jié)果的以采用其他替代方法，

法及判斷檢測結(jié)果的可

可接受性（留樣檢測、如樣品的盲法重檢、與

接受性其他方法比較或者與臨床相關(guān)性的分析判斷檢測結(jié)果的可接受性。人員比對、方法比對、與臨床診斷的符合性等）對比對結(jié)果不一致的樣

對比對不一致的標本，

應(yīng)有措施進行結(jié)果確認品可通過其他方法進行

未見原因分析及糾正措

（其他試劑、其它方法、結(jié)果確認。施第三家實驗室等）缺實驗室負責(zé)人監(jiān)控實驗室負責(zé)人應(yīng)監(jiān)控比對或其它活動的結(jié)果檢驗結(jié)果的可比性督察內(nèi)容存在問題整改措施相同的檢驗項目在

1.未做驗證

1.同一個項目盡量固定不同的檢測系統(tǒng)上在一個檢測系統(tǒng)上；進行檢測時，實驗室應(yīng)在檢測系統(tǒng)報告患者結(jié)果前驗證不同系統(tǒng)檢測結(jié)果的一致性。2.驗證標本量

2.參考CNAS-CL36，每年不足至少2次，每次至少20個樣本。濃度覆蓋測量范圍，計算回歸方程，系統(tǒng)誤差應(yīng)小于＜±7.5%。樣品保存和處置督察內(nèi)容存在問題整改措施實驗室應(yīng)制定檢驗

1.操作規(guī)程未規(guī)定

1.操作規(guī)程應(yīng)詳細樣品的保留方式、

留樣時間；標本保

規(guī)定；標本應(yīng)按相保留時限以及處置

存時間短于規(guī)定時

關(guān)規(guī)定保存（應(yīng)結(jié)的規(guī)定。樣品的安

間全處置應(yīng)符合法規(guī)合檢測報告復(fù)核的提示時間）和有關(guān)醫(yī)療廢棄物

2.標本保存方式管理的要求。（如溫度等）無法

2.在標本保存期間確保其性狀能滿足樣品復(fù)測的要求確保其性狀穩(wěn)定3.無樣品銷毀記錄3.樣品銷毀應(yīng)記錄結(jié)果報告1督察內(nèi)容檢查方法存在問題整改措施應(yīng)制定定性檢

查復(fù)檢制度；

1.操作規(guī)程

1.完善操作規(guī)測項目臨界標

查復(fù)檢原始記本的復(fù)檢制度，

錄和報告結(jié)果復(fù)檢范圍和結(jié)果報告規(guī)則遵從試劑說明書規(guī)定的要求。程缺復(fù)