第四章細(xì)菌的分型及其檢測(cè)技術(shù)演示文稿

第四章細(xì)菌的分型及其檢測(cè)技術(shù)演示文稿1目前一頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)2（優(yōu)選）第四章細(xì)菌的分型及其檢測(cè)技術(shù)目前二頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)主要內(nèi)容第一節(jié)細(xì)菌噬菌體分型技術(shù)第二節(jié)細(xì)菌素分型技術(shù)第三節(jié)細(xì)菌的藥物敏感試驗(yàn)與分型第四節(jié)分子生物學(xué)分型技術(shù)第五節(jié)色譜和質(zhì)譜技術(shù)在細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用第六節(jié)細(xì)菌的自動(dòng)化鑒定技術(shù)目前三頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)第一節(jié)細(xì)菌噬菌體分型技術(shù)一、概述二、細(xì)菌噬菌體分型的一般原則三、噬菌體的分離、純化與增殖技術(shù)四、細(xì)菌的噬菌體分型技術(shù)五、噬菌體分型優(yōu)缺點(diǎn)（自學(xué)）目前四頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)噬菌體(bacteriophage;phage)是一類能感染細(xì)菌、放線菌、真菌、螺旋體等微生物的病毒，屬于專性細(xì)胞內(nèi)寄生的微生物。自然界分布廣泛，凡有細(xì)菌的場(chǎng)所，均可能存在相應(yīng)的噬菌體。一、概述目前五頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)噬菌體的基本形態(tài)蝌蚪形微球形（無尾）細(xì)桿形（無頭）噬菌體目前六頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)根據(jù)與宿主菌的關(guān)系分類毒性噬菌體(virulentphage):溫和噬菌體(temperatephage):目前七頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)目前八頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)液體培養(yǎng)基中固體培養(yǎng)基上噬菌體在細(xì)菌鑒定與分型方面的應(yīng)用噬菌體與宿主菌共培養(yǎng)澄清噬斑噬菌體的作用具有種特異性，一種噬菌體只能裂解一種或與該種相近的細(xì)菌；噬菌斑的形態(tài)、大小和透亮度的不同，可用于鑒定細(xì)菌的型別。

目前九頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)(1)細(xì)菌型別與分型噬菌體裂解特異性穩(wěn)定，分型結(jié)果重復(fù)性好。(2)噬菌體具有較高分型效率，能夠區(qū)分菌株間的細(xì)微差別，能滿足流行病學(xué)研究的需要。(3)操作方法簡(jiǎn)便易行，實(shí)驗(yàn)耗時(shí)短，結(jié)果記錄簡(jiǎn)明。(4)方法應(yīng)能標(biāo)準(zhǔn)化，以利結(jié)果的比較。(5)所用噬菌體應(yīng)易于獲得較高效價(jià)，能較長時(shí)間保存，噬斑清晰、大小適中，使之便于觀察和準(zhǔn)確記錄。二、細(xì)菌噬菌體分型的一般原則目前十頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)（一）噬菌體分離三、噬菌體的分離、純化與增殖技術(shù)制備菌懸液噬菌體富集培養(yǎng)制備裂解液噬菌體確證試驗(yàn)接種適量樣品，12-24h離心，上清過濾除菌，濾液無菌試驗(yàn)平板均勻涂布一層菌液，干燥后，表層布5-7點(diǎn)，滴加濾液，一點(diǎn)生理鹽水，培養(yǎng)觀察噬斑目前十一頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)（二）噬菌體純化稀釋裂解液制備噬菌體與敏感菌混合管培養(yǎng)純化10-1至10-55個(gè)稀釋度的噬菌體各0.1ml+0.2ml對(duì)數(shù)菌液，5min選取噬斑較分散的平板，挑取典型噬斑，接種至含菌體培養(yǎng)液中過夜增殖噬菌體。分離純化單斑3次，至平板噬斑形態(tài)大小一致制備底層瓊脂平板制備上層瓊脂平板各稀釋度混合管+3ml半固體培養(yǎng)基，均勻覆蓋平板表層目前十二頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)（三）噬菌體的增殖、保存1、噬菌體增殖2、去除菌體3、噬菌體的保存液體增殖法：定時(shí)加入對(duì)數(shù)期菌體固體增殖法：同時(shí)加大菌體和噬菌體的濃度細(xì)菌濾器法和三氯甲烷法冷藏保存：無需防腐劑，分裝后7d，不宜超過4w冷凍干燥：2年目前十三頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)（四）噬菌體的效價(jià)和裂解譜的測(cè)定1、噬菌體效價(jià)的測(cè)定噬菌體效價(jià)：是指1ml液體中所含的活噬菌體的數(shù)量。用噬斑形成單位（plaqueformingunit,PFU）表示。單位：PFU/ml;測(cè)定方法：雙層瓊脂平板法目前十四頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)2、常規(guī)試驗(yàn)稀釋度測(cè)定噬菌體的常規(guī)試驗(yàn)稀釋度(routinetestdilution,RTD)：是將噬菌體進(jìn)行10倍系列稀釋，各稀釋度噬菌體溶液點(diǎn)在宿主菌涂布的斑點(diǎn)上，經(jīng)培養(yǎng)后，能產(chǎn)生僅次于融合性裂解（CL）的最高稀釋度。RTD測(cè)定意義：高濃度噬菌體會(huì)對(duì)宿主菌產(chǎn)生裂解外觀，為避免噬菌體對(duì)細(xì)菌這種非特異性破壞，使分型噬菌體顯示最高的特異性，將噬菌體間的交叉反應(yīng)降到最低，建議使用RTD或稱為臨界試驗(yàn)稀釋。RTD與PFU關(guān)系，均是噬菌體效價(jià)的計(jì)量單位。受噬斑大小的影響，一般的RTD約含1X106pfu/ml目前十五頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)3、裂解譜裂解譜是指一種噬菌體的作用范圍。即確定該噬菌體在種內(nèi)或?qū)賰?nèi)的廣譜性，在種外或?qū)偻獾慕徊娣磻?yīng)性。裂解模式是指各種細(xì)菌培養(yǎng)物被幾種噬菌體作用而出現(xiàn)的特殊的反應(yīng)模式，不同的細(xì)菌，可呈現(xiàn)不同的反應(yīng)模式。裂解譜和裂解模式一般用噬菌體原液進(jìn)行試驗(yàn)，效價(jià)在103～105RTD或109～1011PFU/ml之間。分型試驗(yàn)一般用1RTD的噬菌體。目前十六頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)制備菌懸液菌液涂布平板選點(diǎn)滴加不同噬菌體不能混有雜菌直接涂布或雙層瓊脂平板斑點(diǎn)滴定的結(jié)果記錄如下:融合性溶解程度:融合性溶解(CL)、次融合性溶解(＜CL)、半融合性溶解(SCL)、次半融合性溶解(＜SCL)、融合性不透明溶解，中心混濁，菌苔厚(OL)。單個(gè)噬斑:大(L)即＞1.5mm、正常(N)約1.0mm、小(S)0.1~1.0mm、細(xì)小(m)＜

0.1mm、微小(μ)。細(xì)小和微小均僅能用放大鏡觀察。噬斑的數(shù)量:0~5(-)、6~20(±)、1~40(+)、41~60(++)、61~120(+++)、>120(++++)。四、細(xì)菌噬菌體分型技術(shù)目前十七頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)第二節(jié)細(xì)菌素分型技術(shù)細(xì)菌素(bacteriocin)是某些細(xì)菌產(chǎn)生的蛋白質(zhì)類抗菌物質(zhì)，這種物質(zhì)僅對(duì)與產(chǎn)生菌親緣關(guān)系近的細(xì)菌有抗菌作用，而對(duì)產(chǎn)生菌本身不敏感。如大腸菌素、綠膿菌素、蠟樣芽胞桿菌素等?？股乜咕厥羌?xì)菌、真菌等微生物在生長過程中為了生存競(jìng)爭(zhēng)需要而產(chǎn)生的化學(xué)物質(zhì),這種物質(zhì)可保證其自身生存,同時(shí)還可殺滅或抑制其它微生物。細(xì)菌產(chǎn)生的有多粘菌素、抗菌肽等。一、概述目前十八頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)細(xì)菌素特點(diǎn)抗菌范圍很窄，在治療上應(yīng)用價(jià)值不大，但可進(jìn)行細(xì)菌分型和流行病學(xué)調(diào)查。細(xì)菌素分型方法利用不同型別的細(xì)菌素產(chǎn)生菌測(cè)定試驗(yàn)菌的細(xì)菌素敏感模式（檢測(cè)未知菌）利用已知對(duì)不同型別細(xì)菌素敏感的菌株作為指示菌，測(cè)定試驗(yàn)菌產(chǎn)生細(xì)菌素的模式目前十九頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)（一）待測(cè)菌對(duì)細(xì)菌素敏感模式分型試驗(yàn)方法（綠膿菌素為例）綠膿菌素制備綠膿菌素敏感試驗(yàn)細(xì)菌素分型試驗(yàn)有清晰抑菌圈，圈內(nèi)無菌落者為完全抑菌;抑菌圈中尚有部分菌落為不完全抑菌;無抑菌圈表示該菌對(duì)此種綠膿菌素不敏感。二、細(xì)菌素分型方法待測(cè)菌鋪滿平板，干燥后加細(xì)菌素標(biāo)準(zhǔn)品，觀察抑菌圈。目前二十頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)（二）平板交叉劃線分型法適用于細(xì)菌素產(chǎn)生量不多的細(xì)菌已知細(xì)菌素產(chǎn)生菌劃線接種培養(yǎng)基，培養(yǎng)24-48h無菌水沖洗掉菌苔，放置2cm*2cm濾紙片，滴加三氯甲烷，滅菌多種待測(cè)菌株與原產(chǎn)細(xì)菌素菌株成垂直交叉劃線接種，培養(yǎng)24-48h，觀察交叉點(diǎn)上是否有菌生長，判定待測(cè)菌菌型。目前二十一頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)（三）待檢菌產(chǎn)生細(xì)菌素對(duì)指示菌敏感模式分型方法方法同平板交叉劃線分型法已知細(xì)菌素產(chǎn)生菌劃線接種培養(yǎng)基，培養(yǎng)24-48h無菌水沖洗掉菌苔，三氯甲烷熏蒸滅菌多種細(xì)菌素敏感的指示菌依次垂直交叉劃線接種，培養(yǎng)24-48h，觀察交叉點(diǎn)菌生長情況，判定產(chǎn)生細(xì)菌素試驗(yàn)菌菌型。目前二十二頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)一、概述二、紙片擴(kuò)散法三、稀釋法四、結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn)第三節(jié)細(xì)菌的藥物敏感試驗(yàn)與分型目前二十三頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)細(xì)菌的藥物敏感試驗(yàn)(drugsusceptibilitytest)是指在體外測(cè)定抗菌藥物抑制或殺死細(xì)菌能力的試驗(yàn)，簡(jiǎn)稱藥敏試驗(yàn)。藥敏試驗(yàn)方法紙片擴(kuò)散法、稀釋法、抗生素濃度梯度法（E-試驗(yàn)法）、聯(lián)合藥敏試驗(yàn)、自動(dòng)化檢測(cè)法、分子生物學(xué)方法等。一、概述目前二十四頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)（一）基本原理：將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種待檢菌的瓊脂平板上，紙片中所含的藥物吸取瓊脂中的水分溶解后會(huì)不斷地向紙片周圍區(qū)域擴(kuò)散，形成遞減的濃度梯度，在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)待檢菌的生長被抑制，從而產(chǎn)生透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映檢測(cè)菌對(duì)測(cè)定藥物的敏感程度，并與該藥對(duì)待檢菌的最低抑菌濃度（MIC）呈負(fù)相關(guān)，即抑菌圈愈大，MIC愈小。二、紙片擴(kuò)散法（K-B法）目前二十五頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)(二)培養(yǎng)基和抗菌藥物紙片1．抗菌藥物紙片：商品化，選擇直徑為6.35mm，吸水量為20μl的專用藥敏紙片，用逐片加樣或浸泡方法使每片含藥量達(dá)規(guī)定要求。含藥紙片密封貯存于超低溫冰箱。2．培養(yǎng)基：水解酪蛋白（M-H）培養(yǎng)基是兼性厭氧菌和需氧菌藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基，4℃保存。目前二十六頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)1.在瓊脂平板上挑取形態(tài)相同的菌落4～5個(gè)，接種于3～5mLM-H肉湯中，36℃培養(yǎng)4～8h，與標(biāo)準(zhǔn)比濁管比較，可用肉湯或生理鹽水稀釋至與0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)比濁管濁度相同2.在15min內(nèi)，用無菌棉簽蘸取菌液，并在管壁上擠去多余的菌液后涂布于M-H瓊脂平板上（注意：涂布要均勻、致密），待干3.鑷子滅菌冷卻后，夾取不同藥敏紙片，按一定間隔貼在平板的不同區(qū)域，即兩紙片間距不小于24mm，紙片距平板邊緣不小于15mm。36℃溫箱培養(yǎng)16～18h觀察結(jié)果。（三）試驗(yàn)步驟目前二十七頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)目前二十八頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)（四）結(jié)果判斷和報(bào)告

用精確度為1mm的游標(biāo)卡尺量取抑菌圈直徑。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)，作出“敏感”、“耐藥”或“中介”的判斷。幾種抗生素抑菌環(huán)解釋標(biāo)準(zhǔn)及相應(yīng)的最低抑菌濃度≤4≥8≥1513～14≤1210IU慶大霉素GEN≤0.5≥8≥2314～22≤1315IU紅霉素ERY≤0.1≥2921～28≤2010IU青霉素GP-G敏感耐藥敏感中介耐藥相應(yīng)的MIC（μg/ml）抑菌環(huán)直徑（mm）紙片含藥量抗生素代號(hào)目前二十九頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)“敏感”（sensitive，S）：表示測(cè)試菌可被測(cè)定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達(dá)到的血藥濃度所抑制；“耐藥”（resistant，R）：表示測(cè)試菌不能被在體內(nèi)感染部位可能達(dá)到的抗菌藥物濃度所抑制，臨床治療無效?！爸薪椤保╥ntermediate，I）：表示測(cè)試菌對(duì)常規(guī)用藥體液或組織中的藥物濃度的反應(yīng)率低于敏感株，使用高于正常給藥量有療效。目前三十頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)（五）質(zhì)量控制采用質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株和測(cè)試菌在同一條件下做藥敏試驗(yàn)，質(zhì)控菌株的抑菌圈在允許范圍內(nèi)，結(jié)果可信。目的：檢查試驗(yàn)條件（如培養(yǎng)基、含藥紙片和接種菌量）、操作技術(shù)等是否合格質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)菌株：大腸桿菌ATCC25922、糞腸球菌ATCC29212、金黃色葡萄球菌ATCC25923等目前三十一頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)稀釋法是體外定量測(cè)定抗菌藥物抑制細(xì)菌生長活性的方法，所獲結(jié)果比較準(zhǔn)確，常被用作校正其他方法的標(biāo)準(zhǔn)。原理是用一系列不同濃度的藥物與等量細(xì)菌作用，找出能抑制細(xì)菌生長的最低濃度或殺滅細(xì)菌的最低濃度，其結(jié)果用最小抑菌濃度(MIC)

或最小殺菌濃度(MBC)表示P101。分為肉湯稀釋法和瓊脂稀釋法。三、稀釋法目前三十二頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)肉湯稀釋法1234567891011目前三十三頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)1234567891011目前三十四頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)1234567891011目前三十五頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)特殊性：結(jié)核分枝桿菌生長緩慢，在細(xì)菌生長之前藥物已擴(kuò)散而無法影響細(xì)菌的生長。方法：絕對(duì)濃度法、比例法、放射測(cè)量法等。絕對(duì)濃度法:是我國實(shí)驗(yàn)室普遍使用方法。將濃度遞減的藥物與等量培養(yǎng)基混合制成含藥培養(yǎng)基，不含藥培養(yǎng)基為對(duì)照，分別接種待測(cè)菌和標(biāo)準(zhǔn)菌，培養(yǎng)4w，菌落數(shù)多于20個(gè)為陽性（據(jù)此判定MIC）。受試菌與標(biāo)準(zhǔn)菌MIC的菌落數(shù)比值≤2判為敏感，≥8為耐藥。比例法：WHO、國際防癆和肺病聯(lián)合會(huì)推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法。將不同稀釋度的待測(cè)菌接種于相同濃度的含藥培養(yǎng)基，檢測(cè)耐藥性。四、結(jié)核分枝桿菌藥敏試驗(yàn)?zāi)壳叭揬總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)一、核糖體分型二、脈沖場(chǎng)凝膠電泳分型三、序列分型四、多位點(diǎn)序列分型技術(shù)第四節(jié)分子生物學(xué)分型技術(shù)目前三十七頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)實(shí)質(zhì)：核酸探針雜交分型技術(shù)。核糖體RNA（rRNA）基因最為保守，在基因組上存在多個(gè)拷貝，以rRNA基因片段為探針，檢出含有rRNA基因的DNA片段，通過分型雜交后的rRNA指紋圖，進(jìn)行菌種分型和近源菌株的鑒定。原理：樣本DNA經(jīng)酶切消化，凝膠電泳分離片段，轉(zhuǎn)印到膜上進(jìn)行Southern印跡雜交分析。以rRNA基因片段為探針，雜交產(chǎn)生菌株特異性的DNA指紋圖，與平行樣本或數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對(duì)達(dá)到分型目的。一、核糖體分型目前三十八頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)目前三十九頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)實(shí)驗(yàn)過程探針的設(shè)計(jì)：一般以16SrRNA和23SrRNA作為探針，現(xiàn)已商品化菌體的分離培養(yǎng)與DNA提取菌體DNA酶切及電泳Southern印跡雜交全自動(dòng)微生物核糖體基因分型系統(tǒng)。優(yōu)點(diǎn)是高效簡(jiǎn)便、快速、以標(biāo)準(zhǔn)化；缺點(diǎn)是費(fèi)用高。目前四十頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)脈沖場(chǎng)凝膠電泳（PFGE）技術(shù)是細(xì)菌分型較靈敏的方法，通過檢測(cè)染色體上所有酶切位點(diǎn)的變化，反映全部基因的相關(guān)性，提供可靠的基因分型依據(jù)。優(yōu)點(diǎn)：重復(fù)性好，分辨力強(qiáng)，是基因分型的“金標(biāo)準(zhǔn)”，在識(shí)別和追蹤醫(yī)院感染暴發(fā)和流行上具有實(shí)用價(jià)值。與普通凝膠電泳區(qū)別：普通電泳分離DNA分子的上限是50Kb，而PFGE能分離10-800kb的DNA片段。二、脈沖場(chǎng)凝膠電泳分型目前四十一頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)PFGE分型原理是將細(xì)菌包埋于凝膠塊中，用溶菌酶和蛋白酶K消化菌體和蛋白質(zhì)，釋放完整的染色體DNA，采用稀有切點(diǎn)酶酶切DNA，產(chǎn)生有限數(shù)目的高分子量限制性片段。在特定的電泳系統(tǒng)中，定時(shí)改變電場(chǎng)方向，反復(fù)循環(huán)，使DNA在凝膠網(wǎng)孔中呈曲線泳動(dòng)而得到分離，形成特定的電泳條帶圖譜。不同菌株的電泳圖譜具有高度特異性，染色后目測(cè)形成的片段條帶，而識(shí)別特異的菌株。目前四十二頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)目前四十三頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)操作步驟細(xì)菌菌株的培養(yǎng)結(jié)果處理凝膠塊制備菌體裂解膠塊洗滌脈沖式電泳酶切目前四十四頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)目前四十五頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)目前四十六頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)原理：通對(duì)待測(cè)菌的全基因序列進(jìn)行分析，與GENEBANK中的已知序列進(jìn)行比較，實(shí)現(xiàn)分型。方法：Sanger雙脫氧鏈終止法、化學(xué)修飾法、自動(dòng)測(cè)序技術(shù)三、序列分型目前四十七頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)定義：是高通量測(cè)序技術(shù)和群體遺傳學(xué)結(jié)合的產(chǎn)物，通過測(cè)序技術(shù)揭示保守基因的等位基因突變，實(shí)現(xiàn)對(duì)病原菌的分型與鑒定。特點(diǎn)：簡(jiǎn)便易行，重復(fù)性好，且可通過網(wǎng)絡(luò)實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室間數(shù)據(jù)共享和比較。多位點(diǎn)序列分型技術(shù)（MLST）目前四十八頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)原理目前四十九頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)分析方法目前五十頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)步驟目前五十一頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)MLST和PFGE分型技術(shù)比較目前五十二頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)色譜法或稱層析法是一種物理或物理化學(xué)的分離分析方法，是多組分混合物分離分析的最重要分析方法。在所有色譜體系中都包含兩大部分，即流動(dòng)相和固定相，以液體為流動(dòng)相者稱為液相色譜(LC)

，以氣體為流動(dòng)相者稱為氣相色譜(GC)

。色譜和質(zhì)譜通過對(duì)細(xì)菌代謝組和蛋白質(zhì)組分析，進(jìn)行細(xì)菌鑒定。第五節(jié)色譜和質(zhì)譜技術(shù)在細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用目前五十三頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)氣相色譜法可分為氣-液色譜(GLC)和氣-固色譜(GSC)

。前者是分配色譜，后者是吸附色譜。特點(diǎn)：高分離效能（短時(shí)間同時(shí)分離測(cè)定復(fù)雜組分混合物）高選擇性（能分離分析性能極為相似的物質(zhì)）高靈敏度（痕量分析10-11-10-13g，甚至一個(gè)細(xì)菌代謝物）高分離速度（一個(gè)分析周期幾分鐘至十幾分鐘）定量結(jié)果準(zhǔn)確易于自動(dòng)化應(yīng)用范圍廣一、氣相色譜法在細(xì)菌學(xué)研究中的應(yīng)用目前五十四頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)氣相色譜法與傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)方法區(qū)別：不需細(xì)菌分離培養(yǎng)過程，通過對(duì)細(xì)菌組成成分和分解代謝產(chǎn)物分析，鑒定細(xì)菌科、屬、種、株。鑒定時(shí)不需活菌。目前五十五頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)氣相色譜法鑒定細(xì)菌的途徑：分析細(xì)菌細(xì)胞裂解產(chǎn)物分析細(xì)菌細(xì)胞的酸性或堿性條件下的水解物分析培養(yǎng)物中的揮發(fā)性產(chǎn)物，如氣體、酸、醇分析培養(yǎng)物中的代謝產(chǎn)物分析細(xì)菌培養(yǎng)基質(zhì)降解代謝產(chǎn)物分析細(xì)菌在血清、臨床標(biāo)本或生物制品中的活力目前五十六頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)氣相色譜法在細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)中的應(yīng)用：分析細(xì)菌細(xì)胞成分（如分析菌體脂肪酸，鑒定菌體親緣關(guān)系）分析細(xì)菌在體外培養(yǎng)物中的代謝產(chǎn)物（如厭氧菌產(chǎn)生的短鏈脂肪酸色譜圖、需氧菌的有機(jī)酸色譜圖等）臨床標(biāo)本中檢出和鑒定細(xì)菌（如檢測(cè)腦脊液中的乳酸，對(duì)細(xì)菌性腦膜炎做出明確診斷等）熱裂解氣相色譜法鑒定細(xì)菌（將樣品干燥高溫裂解，碎片色譜圖鑒定微生物，如沙門菌屬十種血清型鑒別）高分辨氣相色譜法分析冷凍條件下細(xì)菌的揮發(fā)性有機(jī)產(chǎn)物（鑒定引起冷凍品腐敗的微生物）目前五十七頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)液相色譜法基于混合物中各組分對(duì)固定相和流動(dòng)相親和力的差異分離組分的。二、液相色譜法在細(xì)菌學(xué)研究中的應(yīng)用目前五十八頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)目前五十九頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)分類1、按吸附力分為吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜、凝膠滲透色譜和離子色譜等2、按固定相分液固色譜、液液色譜和鍵合相色譜（正常相色譜法和反相液相色譜）。目前六十頁\總數(shù)六十五頁\編于十八點(diǎn)反相高效色譜法根據(jù)菌種間某