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文檔簡介
關(guān)于核酸的結(jié)構(gòu)和功能第1頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月核酸(nucleicacid)P60是以核苷酸為基本組成單位的生物大分子,攜帶和傳遞遺傳信息。第2頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月核酸的分類及分布90%以上分布于細(xì)胞核,其余分布于核外如線粒體,葉綠體,質(zhì)粒等。90%分布胞液,10%分布胞核(deoxyribonucleicacid,DNA)(ribonucleicacid,RNA)脫氧核糖核酸
核糖核酸攜帶遺傳信息,決定細(xì)胞和個(gè)體的基因型(genotype)。參與細(xì)胞內(nèi)DNA遺傳信息的表達(dá)。某些病毒RNA也可作為遺傳信息的載體。注:生物細(xì)胞都含有DNA和RNA;病毒中只含DNA或只含RNA。第3頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月第一節(jié)核酸的分子組成TheChemicalComponent第4頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月核酸的化學(xué)組成P60主要元素:C、H、O、N、P與蛋白質(zhì)比較,核酸一般不含S,而P的含量較為穩(wěn)定,占9—11%實(shí)驗(yàn)室中用定磷法進(jìn)行核酸的定量分析。(DNA9.2%、RNA9.0%)第5頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月核酸的基本組成單位是核苷酸
(nucleotide)。堿基戊糖磷酸核苷酸核苷核酸DNA的基本組成單位是脫氧核糖核苷酸。RNA的基本組成單位是核糖核苷酸。第6頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月嘌呤
嘧啶
堿基腺嘌呤(A)鳥嘌呤(G)胞嘧啶(C)胸腺嘧啶(T)尿嘧啶(U)DNA、RNA均有DNA有RNA有一、核苷酸的結(jié)構(gòu)每種核酸都含有四種堿基。第7頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月嘌呤(purine)腺嘌呤(adenine,A)鳥嘌呤(guanine,G)堿基第8頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月嘧啶(pyrimidine)胞嘧啶(cytosine,C)尿嘧啶(uracil,U)胸腺嘧啶(thymine,T)第9頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月
核酸中也存在一些不常見的稀有堿基。稀有堿基的種類很多,大部分是上述堿基的甲基化產(chǎn)物。二氫尿嘧啶(DHU)第10頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月修飾堿基的簡寫符號(hào)
(為1時(shí)可以不寫)第11頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月
五種堿基都能形成酮式-烯醇式或氨基-亞氨基的互變異構(gòu)。這兩種異構(gòu)體的平衡關(guān)系受介質(zhì)酸堿環(huán)境的影響。在生理pH下,在生物體內(nèi),堿基多以酮式存在。
第12頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月戊糖(構(gòu)成RNA)核糖(ribose)(構(gòu)成DNA)脫氧核糖(deoxyribose)第13頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月堿基和核糖(或脫氧核糖)通過糖苷鍵連接形成核苷(nucleoside)
(或脫氧核苷)。第14頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月修飾核苷/稀有核苷修飾核苷包括三種情況:
(1)由修飾堿基和糖組成的核苷(2)由非修飾堿基和2'-O-甲基核糖組成的核苷
(3)由堿基與糖連接方式特殊的核苷
第15頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月(1)(2)二氫尿嘧啶核苷
(Am)第16頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月(3)(ψ)尿嘧啶(uracil,U)第17頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月取代基用下列小寫英文字母表示:甲基m乙?;鵤c氨基n甲硫基ms羥基o或h硫基s異戊烯基i羧基c第18頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月核苷酸:AMP,GMP,UMP,CMP脫氧核苷酸:dAMP,dGMP,dTMP,dCMP
核苷(脫氧核苷)和磷酸以酯鍵連接形成核苷酸(脫氧核苷酸)。
第19頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月
多磷酸核苷酸:P63NMP,NDP,NTP第20頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月
a.環(huán)化核苷酸:
核糖3’-,5’-成環(huán)。
cAMP,cGMP體內(nèi)重要的游離核苷酸及其衍生物功能:
第二信使,激素、一些藥物、神經(jīng)遞質(zhì)通過其發(fā)揮生理作用。第21頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月b.多磷酸核苷酸:
指含兩個(gè)以上磷酸基的核苷酸,如ADP、ATP、GDP、GTP、UDP和UTP等.
ATP在細(xì)胞能量代謝上起著極其重要的作用。
UTP參與糖原合成作用以供給能量,
UDP有攜帶轉(zhuǎn)運(yùn)葡萄糖的作用。
GDP和GTP為蛋白質(zhì)生物合成的起始和延伸提供能量。AMPADPATP第22頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月c.含核苷酸的生物活性物質(zhì):
NAD+、NADP+、CoA-SH、FAD等都含有AMP;NAD+及FAD是生物氧化體系的重要組成成分,在傳遞氫原子或電子中有著重要作用。CoA作為有些酶的輔酶成分,參與糖有氧氧化及脂肪酸氧化過程。
NADP+NAD+第23頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)DNA的空間結(jié)構(gòu)與功能DimensionalStructureandFunctionofDNA第24頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月一、核酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)P64定義核酸中核苷酸的排列順序。由于核苷酸間的差異主要是堿基不同,所以也稱為堿基序列。第25頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月5′端3′端核苷酸之間以3,5-磷酸二酯鍵連接形成多核苷酸鏈,即核酸。CGA
通常把長度小于50個(gè)核苷酸構(gòu)成的核苷酸鏈稱為寡核苷酸,更長的則稱為多聚核苷酸。第26頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月書寫方法第27頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月
核苷酸鏈具有方向性,當(dāng)表示一個(gè)核苷酸鏈時(shí),必須注明它的方向是5′→3′
。若兩鏈反向平行,則需注明每條鏈的走向。如:
5’A-T-G-C-C-T-G-A3’
3’T-A-C-G-G-A-C-T5’一、核苷酸讀向第28頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月
DNA與RNA的區(qū)別核酸堿基戊糖DNAA、G、C、T脫氧核糖RNAA、G、C、U核糖第29頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月二、DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)——雙螺旋結(jié)構(gòu)第30頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月Chargaff定則
(1950s,E.Chargaff發(fā)現(xiàn))p64DNA堿基組成符合:A=T;G=C;
A+G=T+C。物種不同,DNA堿基組成不同;物種親緣愈接近,堿基組成也愈接近,該比率越相近似。Ⅲ.同一生物體的不同組織的DNA的堿基組成相同;沒有器官和組織的特異性,年齡、營養(yǎng)狀況、環(huán)境的改變不影響DNA的堿基組成。提出DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型的根據(jù)
第31頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月(一)DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的研究背景
堿基組成分析Chargaff規(guī)則:[A]=[T][G]=[C]
堿基的理化數(shù)據(jù)分析A-T、G-C以氫鍵配對(duì)較合理DNA纖維的X-線衍射圖譜分析第32頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月已知的核酸化學(xué)數(shù)據(jù)p661個(gè)堿基對(duì)
(bp)第33頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月(二)DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型要點(diǎn)1.兩條鏈反向平行,圍繞同一中心軸構(gòu)成右手雙螺旋(doublehelix)。螺旋直徑2nm,表面有大溝和小溝。2.磷酸-脫氧核糖骨架位于螺旋外側(cè)(骨架),堿基垂直于螺旋軸而伸入內(nèi)側(cè)(側(cè)鏈)。每圈螺旋含10個(gè)堿基對(duì)
(bp),螺距為3.4nm。第34頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月堿基平面與縱軸垂直,糖環(huán)平面與縱軸平行第35頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月3.兩條鏈通過堿基間的氫鍵相連,A對(duì)T有兩個(gè)氫鍵,C對(duì)G有三個(gè)氫鍵,這種A-T、C-G配對(duì)的規(guī)律,稱為堿基互補(bǔ)規(guī)則。4.維持雙螺旋穩(wěn)定的因素:橫向?yàn)闅滏I,縱向?yàn)閴A基間的堆積力。第36頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月堿基互補(bǔ)配對(duì)TAGC第37頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月(三)DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)的多樣性Z型DNAB型DNAA型DNA體外脫水CG間隔排列區(qū)段正常生理?xiàng)l件下第38頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月H-DNA:三條鏈局部螺旋第39頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月三、DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)及其在染色質(zhì)中的組裝(一)DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)P68超螺旋結(jié)構(gòu)(superhelix或supercoil)DNA雙螺旋鏈再盤繞即形成超螺旋結(jié)構(gòu)。正超螺旋(positivesupercoil)盤繞方向與DNA雙螺旋方同相同
負(fù)超螺旋(negativesupercoil)盤繞方向與DNA雙螺旋方向相反
第40頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月意義DNA超螺旋結(jié)構(gòu)整體或局部的拓?fù)鋵W(xué)變化及其調(diào)控對(duì)于DNA復(fù)制和RNA轉(zhuǎn)錄過程具有關(guān)鍵作用。(如負(fù)超螺旋分子所受張力會(huì)引起互補(bǔ)鏈分開導(dǎo)致局部變性,利于復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。)第41頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月第42頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月(三)DNA在真核生物細(xì)胞核內(nèi)的組裝真核生物染色體由DNA和蛋白質(zhì)構(gòu)成,其基本單位是核小體(nucleosome)。P69核小體的組成DNA:約200bp組蛋白:H1H2A,H2BH3H4第43頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月串珠狀核小體結(jié)構(gòu)第44頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月串珠狀核小體DNA雙螺旋片段染色質(zhì)纖維伸展形染色質(zhì)片段密集形染色質(zhì)片段整個(gè)染色體第45頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月核小體螺線管真核生物染色體DNA組裝第46頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月三、DNA的功能DNA的基本功能是以基因的形式荷載遺傳信息,并作為基因復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的模板。它是生命遺傳的物質(zhì)基礎(chǔ),也是個(gè)體生命活動(dòng)的信息基礎(chǔ)?;驈慕Y(jié)構(gòu)上定義,是指DNA分子中的特定區(qū)段,其中的核苷酸排列順序決定了基因的功能。第47頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月肺炎雙球菌的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)OswaldAvery(1944)第48頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月
實(shí)驗(yàn)二,噬菌體的標(biāo)記實(shí)驗(yàn)第49頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月
第50頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月
第51頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月
第52頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)
RNA的結(jié)構(gòu)與功能StructureandFunctionofRNA第53頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月RNA的結(jié)構(gòu)與功能組成:4種核苷酸(AUGC),有稀有堿基;連接:3,5-磷酸二酯鍵形成:一般以DNA為模板合成,有例外。結(jié)構(gòu):RNA主要是單鏈結(jié)構(gòu),局部可卷曲形成雙鏈螺旋結(jié)構(gòu),或稱發(fā)夾結(jié)構(gòu)。堿基氫鍵配對(duì)A=U,G≡C。
DNARNA糖脫氧核糖核糖堿基AGCTAGCU
不含稀有堿基含稀有堿基雙鏈單鏈,局部雙鏈RNA與DNA的差異第54頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)主要RNA的種類及功能第55頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月一、信使RNA的結(jié)構(gòu)與功能hnRNA內(nèi)含子(intron)mRNA*mRNA成熟過程
外顯子(exon)第56頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月*mRNA結(jié)構(gòu)特點(diǎn)1.大多數(shù)真核mRNA的5′末端均在轉(zhuǎn)錄后加上一個(gè)7-甲基鳥苷,同時(shí)第一個(gè)核苷酸的C′2也是甲基化,形成帽子結(jié)構(gòu):m7GpppNm-。2.大多數(shù)真核mRNA的3′末端有一個(gè)多聚腺苷酸(polyA)結(jié)構(gòu),稱為多聚A尾。第57頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月帽子結(jié)構(gòu)第58頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月加速翻譯起始的調(diào)控mRNA的穩(wěn)定性維系mRNA核內(nèi)向胞質(zhì)的轉(zhuǎn)位帽子結(jié)構(gòu)和多聚A尾的功能mRNA的功能:作為蛋白質(zhì)合成的模板。第59頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月特點(diǎn):含量少:占細(xì)胞內(nèi)RNA的2%-5%種類多:可達(dá)105種。不同的基因表達(dá)不同的mRNA.壽命短:半衰期1.5分鐘大小差異大第60頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月*
tRNA的一級(jí)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)含稀有堿基較多
3′末端為—CCA-OH5′末端大多數(shù)為G
由73~93個(gè)核苷酸組成二、轉(zhuǎn)運(yùn)RNA的結(jié)構(gòu)與功能第61頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月
稀有堿基第62頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月*tRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)——三葉草形氨基酸臂額外環(huán)第63頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月第64頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月*tRNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)——倒L形*tRNA的功能活化、搬運(yùn)氨基酸到核糖體,參與蛋白質(zhì)的翻譯。第65頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月*rRNA的結(jié)構(gòu)三、核蛋白體RNA的結(jié)構(gòu)與功能*rRNA的功能參與組成核蛋白體,作為蛋白質(zhì)生物合成的場(chǎng)所。
約占全部RNA的80%,含量最多。與多種蛋白質(zhì)結(jié)合成核糖體。第66頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月核糖體的組成原核生物真核生物小亞基30S40SrRNA16S18S蛋白質(zhì)21種33種大亞基50S60SrRNA23S5S28S5.8S5S蛋白質(zhì)33種49種核糖體70S80S第67頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月特點(diǎn):含量多:占細(xì)胞內(nèi)RNA的80%-85%種類少:壽命短:更新慢、壽命長第68頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月四、其他小分子RNA及RNA組學(xué)除了上述三種RNA外,細(xì)胞的不同部位存在的許多其他種類的小分子RNA,統(tǒng)稱為非mRNA小RNA(smallnon-messengerRNAs,snmRNAs)。
snmRNAs第69頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月snmRNAs的種類核內(nèi)小RNA(snRNA)核仁小RNA(snoRNA)胞質(zhì)小RNA(scRNA)催化性小RNA小片段干擾RNA(siRNA)snmRNAs的功能參與hnRNA和rRNA的轉(zhuǎn)錄后加工和轉(zhuǎn)運(yùn)以及基因表達(dá)過程的調(diào)控等。第70頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月是研究細(xì)胞中snmRNAs的種類、結(jié)構(gòu)和功能的科學(xué)。同一生物體內(nèi)不同種類的細(xì)胞、同一細(xì)胞在不同時(shí)間、不同狀態(tài)下snmRNAs的表達(dá)具有時(shí)間和空間特異性。RNA組學(xué)(RNomics)第71頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月核酸的理化性質(zhì)ThePhysicalandChemicalCharactersofNucleicAcid第四節(jié)第72頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月一、核酸的一般理化性質(zhì)核酸為多元酸,具有較強(qiáng)的酸性;DNA是線性高分子,粘度極大;在260nm波長有最大吸收峰,是由堿基的共軛雙鍵決定的。這一特性常用作核酸的定性、定量分析。第73頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月一般理化性質(zhì)兩性電解質(zhì)核酸含酸性的磷酸基團(tuán),又含弱堿性的堿基,為兩性電解質(zhì),可發(fā)生兩性解離;溶解性DNA白色纖維狀固體,RNA白色粉末狀固體,都微溶于水,不溶于一般有機(jī)試劑(乙醇沉淀核酸),鈉鹽易溶于水。粘度高一般DNA比RNA粘度高。水解性可被酸、堿或酶水解,DNA比RNA對(duì)稀堿穩(wěn)定。RNA的等電點(diǎn)比DNA低的原因,RNA分子中核糖基2′-OH通過氫鍵促進(jìn)了磷酸基上質(zhì)子的解離,DNA沒有這種作用第74頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月第75頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月1.DNA或RNA的定量OD260=1.0相當(dāng)于50g/ml雙鏈DNA40g/ml單鏈DNA(或RNA)20g/ml寡核苷酸2.判斷核酸樣品的純度DNA純品:OD260/OD280=1.8RNA純品:OD260/OD280=2.0OD260的應(yīng)用第76頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月二、DNA的變性(denaturation)定義:在某些理化因素作用下,DNA雙鏈解開成兩條單鏈的過程。變性因素:過量酸,堿,加熱等。變性后理化性質(zhì)的主要改變:OD260增高 粘度下降第77頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月DNA變性的本質(zhì)是雙鏈間氫鍵的斷裂第78頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月DNA的紫外吸收光譜增色效應(yīng):DNA變性時(shí)其溶液OD260增高的現(xiàn)象。第79頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月
Tm:使雙鏈DNA解鏈度達(dá)到50%時(shí)所需的溫度稱為DNA的解鏈溫度,又稱融解溫度(meltingtemperature,Tm)。P73其大小與G+C含量成正比。第80頁,課件共89頁,創(chuàng)作于2023年2月三、DNA的復(fù)性與分子雜交
DNA復(fù)性(renaturation)的定義P73在適當(dāng)條件下,變性DNA的兩條互補(bǔ)鏈可恢復(fù)天然的雙螺旋構(gòu)象,這一現(xiàn)象稱為復(fù)性。減色效應(yīng)DNA復(fù)性時(shí),其溶液OD260降低。熱變性的
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