第三章蛋白質5周五

上節(jié)內容蛋白質的結構與幾種蛋白質的結構與轉運蛋轉運蛋收縮與免疫球蛋白質兩性膠沉兩性膠沉變性與折紫外本章主要內二．氨基重點)四．蛋白質的結構（重點五．蛋白質結構與功能（重點六．蛋白質的性質（重點七．蛋白質的分離純化與鑒定（重點七、Protein1.Salting鹽析（saltingout）原理：破壞蛋白質疏水區(qū)表面的水化層導致蛋白質沉淀。最先的是那些表面Differentproteinsprecipitatedatdifferentsaltconcentrations(飽和或半飽和濃度).Itisoneofthemostcommonlyusedforprotein鹽溶（Saltingin）稀鹽濃度范圍內，增加蛋白質SaltingAmmoniumsulfate,(NH4)2SO4,isthemostcommonlyusedreagentforsaltingoutThepHmaybeadjustedtoapproximatethepIofthedesiredprotein.Asignificantconcentration（濃縮）oflargetiesofproteinSalting分分級增加鹽濃度，控制pH,沉淀目標蛋白（白色）Ionexchange原理：電荷差異，參看aminoAnion陰離子DEAE:Cation陽離子exchangersCM:carboxymethylMatrixcelluloseandagarose-basedresins樹脂IonexchangeIsoelectric等電聚焦（IEF）原理：電荷不可用于蛋白質等電點的測定，分辨率（pI<GelfiltrationMolecularsieve分子篩MolecularareseparatedaccordingtotheirsizeandshapeStationaryphase固定相gelbeadscontainingporesthatspanarelativelynarrowsizerangeSephadex（葡聚糖凝膠Bio-gelP（聚丙烯酰胺凝膠Gelfiltration七、ProteinSDSsodiumdodecylsulfate十二烷基磺酸鈉PAGEpolyacrylamidegelelectrophoresis非常有純度檢測；亞基組成分析；分子量測1.4gSDS/1g兩個氨基酸結合一個 結果所有肽鏈覆蓋上相同密度的負電荷可看成若存在鏈間二硫鍵，如何進行分SDS裝置及電泳SDS測定蛋白質的Two-dimensionalPermitstheresolutionofcomplexmixturesofproteinsAmoresensitive yticalmethodthaneitherelectrophoreticmethodalone.SeparatesproteinsofidenticalmolecularweightthatdifferinpI,orproteinswithsimilarpIvaluesbutdifferentmolecularTwo-dimensional②①>60000應用：最常用方法：(densitygradient常用的密度梯度：DensityGradient（密度梯度離心Dialysisand半透膜：玻璃紙、火棉紙、改性纖維素將蛋白質與其他小分子物濃縮和脫粗分Ultrafiltration(超過濾Affinity（親和色譜Principle:Manyproteinscanbindspecificmolecules(ligand)tightly.Ligandiscovalentlyattachedtoaninertmatrix.Asignificantpurificationchromatography(免疫親和色譜)ligand=antibodyHis-tag（組氨 其他用途增加蛋白可溶性提高蛋白穩(wěn)定性漿狀動(植)機械破漿狀動(植)

低速離蛋白(除膜等雜蛋白蛋白蛋白

蛋蛋白層析電泳檢蛋白蛋白

純純稀透（除鹽

電泳檢

－80℃蛋白質含量雙縮Folin－酚試劑法（Lowry法Bradford法（考馬斯亮 蛋白質純度HP