動物細胞工程知識梳理

動物細胞工程知識梳理第一頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五主要內(nèi)容動物細胞與組織培養(yǎng)

動物細胞核移植技術(shù)

動物細胞融合單克隆抗體制備

4123動物細胞工程常用技術(shù)手段包括第二頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五一、動物細胞與組織培養(yǎng)學(xué)習(xí)目標：1、簡述動物細胞培養(yǎng)的過程、條件及應(yīng)用2、對比說出動物細胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)原理、條件、結(jié)果、培養(yǎng)目的請自主完成導(dǎo)學(xué)案課前預(yù)習(xí)部分第三頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五一、動物細胞與組織培養(yǎng)1．概念：（1）材料：取自動物

或

動物的器官或組織。（2）場所：在

模擬動物

。（3）目的：使動物細胞或組織繼續(xù)

、

并維持原有的

和

。第四頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五一、動物細胞與組織培養(yǎng)2．過程：（1）動物細胞培養(yǎng)：取動物組織塊剪碎，用

處理，形成分散的

，此稱細胞懸液，然后接種到

中培養(yǎng)，待細胞分裂形成一層細胞，轉(zhuǎn)移到新培養(yǎng)液中繼續(xù)培養(yǎng)。（2）動物組織培養(yǎng)：剪取動物組織塊，用

沖洗，將組織塊移入

，使組織塊

在培養(yǎng)瓶的瓶壁上，稱貼壁培養(yǎng)。第五頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五一、動物細胞與組織培養(yǎng)3．培養(yǎng)的條件：（1）環(huán)境條件：包括

、

、

和

等。①溫度：哺乳動物多以

℃為宜；②PH值：多數(shù)細胞生存的最適pH為

；③氣體：細胞培養(yǎng)所需氣體主要有

和

，

是細胞代謝所必需的，CO2的主要作用是維持培養(yǎng)液的

；④營養(yǎng)成分：有

等。第六頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五一、動物細胞與組織培養(yǎng)（2）培養(yǎng)基：①天然培養(yǎng)基：取自

、

和

等；其特點是

、

。②合成培養(yǎng)基：人工配制，仍需加入

；其特點是成分

、便于實驗條件的控制。第七頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五一、動物細胞與組織培養(yǎng)4．培養(yǎng)類型：（1）原代培養(yǎng)：①概念：從機體取出組織或細胞的

，一般培養(yǎng)10代左右；②特點：細胞的

未發(fā)生很大改變；③應(yīng)用：藥物測試、

等試驗。（2）傳代培養(yǎng)：由于

的限制和

的消耗，導(dǎo)致細胞生長和增殖減緩，需要將原代細胞培養(yǎng)的細胞

，轉(zhuǎn)移到

中繼續(xù)培養(yǎng)，一般可繼續(xù)培養(yǎng)

代左右。第八頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五一、動物細胞與組織培養(yǎng)5．技術(shù)的應(yīng)用：用于

、

和

等領(lǐng)域。補充概念：細胞株：原代細胞一般傳至10代左右細胞生長停滯，大部分細胞衰老死亡，少數(shù)細胞存活到40~50代，這種傳代細胞為細胞株。細胞系：細胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細胞生長停滯狀態(tài)，只有部分細胞由于遺傳物質(zhì)的改變，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細胞為細胞系。細胞株和細胞系的區(qū)別：細胞系的遺傳物質(zhì)改變，具有癌細胞的特點，失去接觸抑制，容易傳代培養(yǎng)。第九頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五動物胚胎或幼齡動物的組織、器官（取材）細胞懸液10代細胞50代細胞傳代培養(yǎng)無限傳代單個細胞加培養(yǎng)液（分解細胞間的蛋白）原代培養(yǎng)胰蛋白酶或膠原蛋白酶剪碎過程：細胞株細胞系動物組織細胞間隙中含有一定量蛋白質(zhì)遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變第十頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五一、動物細胞與組織培養(yǎng)補充概念：細胞貼壁：在培養(yǎng)瓶中，懸液中分散的細胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細胞貼壁。接觸抑制：當(dāng)貼壁細胞分裂生長到表面接觸時，細胞就會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象叫做接觸抑制。第十一頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五細胞貼壁過程那么什么是接觸抑制？第十二頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五接觸抑制：細胞在貼壁生長過程中，隨著細胞分裂，數(shù)量不斷增加，最后形成一個單層，此時細胞間相互接觸，細胞分裂和生長停止，數(shù)量不再增加。50代以后失去接觸抑制接觸抑制部分細胞突變，獲得不死性，向癌細胞方向發(fā)展，糖蛋白減少。第十三頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五一、動物細胞與組織培養(yǎng)探究》》1、在動物細胞培養(yǎng)過程中，為什么選擇胚胎期或幼齡動物的器官和組織？

2、為什么要用胰蛋白酶對取出的動物組織進行處理？胃蛋白酶不行嗎？3、動物細胞培養(yǎng)與植物細胞培養(yǎng)相同嗎？動物細胞培養(yǎng)能否像綠色植物組織培養(yǎng)那樣最終培養(yǎng)成新個體？第十四頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)的比較比較項目植物組織培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)原理細胞的全能性細胞增殖培養(yǎng)基狀態(tài)固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基培養(yǎng)基特有成分蔗糖植物激素葡萄糖動物血清培養(yǎng)結(jié)果植物體細胞株、細胞系培養(yǎng)目的快速繁殖、培育無病毒植株獲得細胞或細胞分泌蛋白第十五頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五二、細胞核移植與動物體細胞克隆1．克?。褐高z傳上完全相同的

、

或來自同一祖先的生物個體的

。2．動物體細胞克?。簩⒐w體細胞的

與受體去核卵細胞的

進行人工組合，借助于卵細胞的發(fā)育能力，經(jīng)過培養(yǎng)發(fā)育成

進而形成新個體的技術(shù)，其關(guān)鍵是

技術(shù)，利用的是動物細胞核的

性。3．細胞核移植：利用

技術(shù)等將某種動物細胞的

移入同種或者異種動物的

的技術(shù)。第十六頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五二、細胞核移植與動物體細胞克隆4．大致過程如下：（動物克?。┑谑唔摚踩?，編輯于2023年，星期五二、細胞核移植與動物體細胞克隆卵細胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細胞細胞質(zhì)細胞核細胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植融合后的卵細胞第十八頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五二、細胞核移植與動物體細胞克隆5．克隆技術(shù)應(yīng)用：在克服動物

雜交繁殖障礙、創(chuàng)造

等方面具有重要意義和潛在經(jīng)濟價值；在醫(yī)藥衛(wèi)生領(lǐng)域，人的核移植胚胎干細胞經(jīng)過誘導(dǎo)分化形成相應(yīng)的組織、器官，可用于組織器官的

（治療性克隆）；此外，還能利用克隆技術(shù)保護和挽救

。但是目前克隆技術(shù)并不成熟，仍存在某些問題，有待進一步完善。第十九頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五二、細胞核移植與動物體細胞克隆討論》》1、動物核移植技術(shù)選擇的受體細胞為什么是卵細胞？2、你認為用體細胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動物，是對體細胞供體動物進行了100%的復(fù)制嗎？為什么？3、閱讀課本56頁積極思維，從社會倫理道德方面思考生殖性克隆會引發(fā)哪些社會問題？4、分析圖2-12的技術(shù)路線，找出生殖性克隆與治療性克隆的區(qū)別，以及應(yīng)該阻斷哪一步來阻止生殖性克隆？5、討論克隆技術(shù)的應(yīng)用和前景。第二十頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五第二十一頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五三、動物細胞融合與單克隆抗體（一）動物細胞融合1．概念：是指

或

結(jié)合形成一個細胞的過程。2．誘導(dǎo)動物細胞融合的方法：物理法：

、常見的誘導(dǎo)因素有化學(xué)法：

、生物法：

等。3．應(yīng)用：制造

。第二十二頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五三、動物細胞融合與單克隆抗體（二）單克隆抗體1．制備過程：（1）能產(chǎn)生抗體的細胞是：

；能夠無線增殖的細胞：

；（2）利用

融合，檢驗和篩選雜交細胞。（3）

該雜交細胞，并篩選能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞。雜交瘤細胞的特點是：。（4）在

或者

中培養(yǎng)雜交細胞，獲取單克隆抗體。單克隆抗體的優(yōu)點：

________、_________、_________。第二十三頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五第二十四頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五三、動物細胞融合與單克隆抗體2．單克隆抗體的應(yīng)用：單克隆抗體具有_______、_______、_______、_______和

優(yōu)點，主要用于治療疾病和運載藥物，如治療_______、________等。第二十五頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五準確、高效、簡易、快速單克隆抗體最主要的優(yōu)點：特異性強，靈敏度高，并能大量制備。診斷試劑——最廣泛應(yīng)用第二十六頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五“生物導(dǎo)彈”＝單克隆抗體＋藥物單抗導(dǎo)向，藥物為彈頭治療疾病和運載藥物主要用于治療癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運載抗癌藥物，形成“生物導(dǎo)彈”，準確殺傷癌變細胞。第二十七頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五三、動物細胞融合與單克隆抗體探究》》1、比較植物體細胞雜交和動物細胞融合（完成表格）細胞融合的原理細胞融合的方法誘導(dǎo)手段用途植物體細胞雜交

、

去除細胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合離心、電刺激、振動、聚乙二醇克服遠源雜交不親和，獲得

。動物細胞融合用

使細胞分散后誘導(dǎo)細胞融合除應(yīng)用植物細胞雜交手段外，還有

。獲得

細胞、制備

。第二十八頁，共三十頁，編輯于2023年，星期五三、動物細胞融合與單克隆抗體2、制備單克隆抗體時，為什么要選用B