傳染病的實(shí)驗(yàn)室檢查課件

傳染病的實(shí)驗(yàn)室檢查葉

英我國法定傳染病的種類分為甲類（2）、乙類(25)、丙類(10)乙類傳染病原有23種，新增2種傳染性非典型肺炎、人感染高致病性禽流感傳染病的診斷具備三要素:①

流行病學(xué)資料②

臨床資料③

實(shí)驗(yàn)室資料：對傳染病診斷具有特殊意義疑似病例，確診病例有病原學(xué)方面資料可明確診斷實(shí)驗(yàn)室檢查⒈

一般檢查：三大常規(guī)、生化檢查⒉

病原學(xué)方面資料：①病原體的檢出：直接檢出，分離培養(yǎng)②分子生物學(xué)檢測特異核酸：分子雜交

、聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）實(shí)驗(yàn)室檢查③免疫學(xué)檢測：特異性抗體檢測特異性抗原檢測細(xì)胞免疫功能檢查免疫球蛋白測定3.其他：內(nèi)鏡檢查、影像檢查、活檢1.一般檢查：(4項(xiàng))①

血常規(guī)WBC↑：流腦、猩紅熱等細(xì)菌性傳染病出血熱、乙腦WBC↓：病毒感染、原蟲感染傷寒、布氏桿菌病嗜酸粒細(xì)胞↑：蠕蟲感染嗜酸粒細(xì)胞↓：傷寒、流腦異型淋巴細(xì)胞：見于出血熱、傳單1.一般檢查：(4項(xiàng))②

尿常規(guī)蛋白尿、RBC、管型、少量WBC：鉤體病蛋白尿、膜狀物、管型、RBC、融合細(xì)胞：出血熱③

大便常規(guī)RBC+WBC:菌痢、腸阿米巴?。ㄉ倭縒BC）水樣便，粘液便：病毒性或大多數(shù)細(xì)菌性腸道感染④

生化病毒性肝炎等2.病原學(xué)檢查①病原體直接檢出

血液、骨髓涂片：檢瘧原蟲（顯微鏡、肉眼）

大便涂片：寄生蟲卵、阿米巴等②病原體分離培養(yǎng)檢材：血、尿、腦脊液、骨髓、皮疹吸取液等注意采集標(biāo)本注意病程階段、是否應(yīng)用抗生素點(diǎn)

本保存與運(yùn)送標(biāo)時(shí)間方法人工培養(yǎng)基分離培養(yǎng)：細(xì)菌、螺旋體、真菌動(dòng)物接種、組織培養(yǎng)：立克次體、病毒3.分子生物學(xué)檢測①分子雜交：利用探針檢出特異性病毒核酸②聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）:可將DNA擴(kuò)增100萬倍以上逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）：檢測RNA病毒核酸③原位聚合酶鏈反應(yīng)：用于組織細(xì)胞中原位檢出低拷貝DNA、RNA序列。4.免疫學(xué)檢查用已知Ag/Ab檢測血清或體液中的相應(yīng)Ag/Ab①特異性抗體檢測急性期、恢復(fù)期雙份血清4倍以上升高意義

4倍以下升高提示回憶反應(yīng)近期感染：IgM型抗體陽性凝集反應(yīng)（肥達(dá)氏反應(yīng)）方法補(bǔ)體結(jié)合：病毒感染免疫熒光：快速診斷酶鏈免疫吸附測定：靈敏度高，操作簡便②特異性抗原檢測診斷意義較抗體可靠；方法多樣。③細(xì)胞免疫功能T細(xì)胞亞群檢測:CD4,CD8等：艾滋?、苊庖咔虻鞍诇y定降低者見于先天性免疫缺損升高者見于慢性肝炎、黑熱病、艾滋病等5.其它檢查①

內(nèi)鏡

:纖維支氣管鏡：艾滋病肺孢子蟲病結(jié)腸鏡：菌痢、阿米巴②

影像學(xué)檢查：X光、超聲、CT、MRI③

活檢病毒性肝炎病毒性肝炎在我國危害極大病毒性肝炎在我國各類傳染病中發(fā)病率最高我國乙肝病毒感染者逾1.3億

10%乙型肝炎患者近3千萬HAV感染率約80%HCV感染率約7％HDV感染率在HBV感染者中約10％HEV感染率約18％每年近30萬人死于肝炎或肝癌能引起肝功能損害的病毒有很多：它?

黃熱病毒（YFV）?

EB病毒（EBV）們均非嗜肝病毒?

巨細(xì)胞病毒（CMV）?

單純皰疹病毒（HSV）?

風(fēng)疹病毒(RV)可通過特異的Ag/Ab來檢測病毒性肝炎特指由嗜肝病毒感染所引起的肝臟炎癥和壞死病變的一組傳染病。目前已知的嗜肝病毒有五種：HAV（甲）、HBV（乙）、HCV(丙）、HDV（?。?、HEV（戊）庚型肝炎病毒（HGV/GBV-C）輸血傳播病毒（TTV）SenV5種嗜肝病毒的病原學(xué)特點(diǎn)一、甲型病毒性肝炎甲

肝●

HAV為單股正鏈RNA病毒●病毒分型和抗原抗體系統(tǒng)：HAV僅有一個(gè)血清型和一個(gè)抗原抗體系統(tǒng)抗HAV-IgM：急性感染指標(biāo)，一般持續(xù)8-12周，少數(shù)6月抗HAV-IgG：是保護(hù)性抗體，可長期存在二、乙型病毒性肝炎l

HBV屬嗜肝DNA病毒科1.HBV形態(tài)結(jié)構(gòu)乙

肝A:大球形顆粒（Dane顆粒）B:絲狀顆粒C:小球形顆粒Dane顆粒-病毒復(fù)制的主體HBsAg（外膜蛋白）HBcAgHBVDNADNAP乙

肝2.HBV基因組結(jié)構(gòu)編碼pre-S1pre-S1蛋白pre-S2蛋白HBsAgpre-S2Spre-CHBeAgCPHBcAgCDNAPXHBxAgHBsAgpre-S2pre-S1乙

肝3.HBV血清標(biāo)志物及其臨床意義（1）HBsAg

曾用名：HAA、澳大利亞抗原●出現(xiàn)時(shí)間：HBV感染后1周～12周●持續(xù)時(shí)間：急性肝炎：1-6周，6個(gè)月內(nèi)可消失慢性肝炎或HBsAg攜帶者：可持續(xù)陽性乙

肝●

HBsAg有抗原性而無傳染性HBsAgHBV整合肝細(xì)胞DNAS基因持續(xù)表達(dá)adradwayr●HBsAg

的亞型長江以北長江以南新疆、西藏、內(nèi)蒙等ayw乙

肝（2）抗-HBs●

出現(xiàn)時(shí)間：急性感染后期或HBsAg消失后窗口期：

HBsAg已消失，抗-HBs未出現(xiàn)，只檢出抗HBc和抗HBe●

抗-HBs為保護(hù)性抗體其出現(xiàn)標(biāo)志著HBV感染進(jìn)入恢復(fù)期●

抗-HBs對相同HBsAg亞型的HBV再感染有免疫力，但對不同亞型的HBV保護(hù)力不完全。（3）HBeAg乙

肝從前C基因開始編碼的蛋白質(zhì)經(jīng)加工分泌到細(xì)胞外即為HBeAgHBVC基因C區(qū)表

達(dá)前C區(qū)前C/

C蛋白切割、加工HBcAgHBeAg分泌到細(xì)胞外HBeAg只存在于血清中乙

肝●

HBeAg是病毒復(fù)制和傳染性的標(biāo)志●

在慢性乙肝中HBeAg是重要的免疫耐受因子l

血清HBeAg陽性者中，HBV-DNA陽性率為92%左右乙

肝（4）抗-HBe●

出現(xiàn)時(shí)間：

HBeAg消失后，常伴DNA陰轉(zhuǎn)，ALT正?！窨?HBe的出現(xiàn)標(biāo)志著病毒復(fù)制減少、傳染性降低在部分抗-HBe陽性者中，DNA仍陽性，ALT異常，HBeAg陰性

---

前C基因變異(G1896A)易加重病情、易演變?yōu)楦斡不?干擾素療效差HBeAg陰性的慢乙肝乙

肝（5）HBcAg一般血清學(xué)方法檢測不到HBcAg肝組織免疫組化技術(shù):

可檢查肝細(xì)胞內(nèi)HBcAg（6）抗-HBc抗HBc-IgM：是HBV急性或慢性感染者病毒活動(dòng)標(biāo)志抗HBc-IgG：凡“有過”HBV感染者均可陽性，高滴度亦提示病毒活動(dòng)可終身陽性乙

肝（6）HBVDNA是病毒復(fù)制和傳染性的最直接證據(jù)檢測方法：斑點(diǎn)雜交法、PCR法（7）DNAP（DNA多聚酶）：是逆轉(zhuǎn)錄酶是直接反應(yīng)病毒復(fù)制的指標(biāo)之一（8）HBxAg：HBxAg具有反向激活作用，可調(diào)控病毒基因轉(zhuǎn)錄水平，并對宿主癌基因可能有激活作用。乙

肝●介紹三個(gè)概念：①

“兩對半”②

血清轉(zhuǎn)換：HBeAg消失，出現(xiàn)HBeAbHBsAg消失，出現(xiàn)HBsAb③

“轉(zhuǎn)陰”常用指標(biāo)：HBsAg血清轉(zhuǎn)換----金牌HBeAg血清轉(zhuǎn)換----銀牌HBVDNA陰轉(zhuǎn)------銅牌丙

肝三、丙型病毒性肝炎丙肝是經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)國家病毒性肝炎的主要類型1.

HCV形態(tài)HCV為單股正鏈RNA病毒，1991年歸為黃病毒科丙型肝炎病毒屬2.HCV基因組結(jié)構(gòu)

HCVRNA全長約10kbC

E1

E2/NS1

NS2

NS3

NS4

Ns55’NC3’NC兩側(cè)為5’和3’非編碼區(qū)，中間為ORF。ORF依次為：C（核心蛋白區(qū)，高度保守）-E1-E2∕NS1（包膜蛋白區(qū)，極易變異）-NS2-NS3-NS4-NS5（非結(jié)構(gòu)蛋白區(qū)）l

NS3蛋白具有強(qiáng)免疫原性，可刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體l

HCV基因型：>10個(gè)，我國以1b型為主丙

肝3.HCV的抗原抗體系統(tǒng)l

血清中HCVAg含量低，目前尚無法檢測。l

抗-HCV為非保護(hù)性抗體，陽性為病毒感染標(biāo)志l

HCV-RNA：是病毒復(fù)制及傳染的直接標(biāo)志，但體內(nèi)病毒含量較低，需反復(fù)檢測丁

肝四、丁型病毒性肝炎HDV為缺陷病毒，必須依賴HBV的輔助才能復(fù)制。1.

HDV形態(tài)：l又稱δ因子，為單股負(fù)鏈RNA病毒。l在細(xì)胞核內(nèi)HDVRNA無需HBV輔助而能自行復(fù)制，在血液中表面包裹HBsAg丁

肝2.

HDAg和抗-HDVl

HDV僅有一個(gè)血清型和一個(gè)抗原抗體系統(tǒng)l

HDAg最早出現(xiàn)，是HDV感染的直接標(biāo)志l

HDV-Ab不是保護(hù)性抗體抗HDV-IgM：早期感染標(biāo)志抗HDV-IgG：既往感染的標(biāo)志l

HDVRNA是診斷HDV感染最直接依據(jù)戊

肝五、戊型病毒性肝炎●

HEV為單股正鏈

RNA病毒,有2個(gè)以上的基因型。l

HEVAg主要定位于細(xì)胞漿，血清中檢測不到。●

抗-HEV：抗HEV-IgM：是近期內(nèi)HEV感染的標(biāo)志，有早期診斷價(jià)值抗HEV-IgG：HEV感染后可長期存在，可用于流行病學(xué)調(diào)查l

HEVRNA是HEV感染最直接依據(jù),但持續(xù)時(shí)間不長病毒性肝炎的實(shí)驗(yàn)室檢查一、血象急性肝炎：WBC正?；蛏缘?，淋巴細(xì)胞相對

慢性肝炎、肝硬化：WBC和BPC↓二、血清生化檢查1.血清酶測定（1）丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT/GPT）●分布：肝>腎>心>肌肉●意義：反映肝功能的最常用指標(biāo)●血清ALT升高程度與肝損傷程度不平行（2）門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST/GOT）●

AST明顯升高者提示肝細(xì)胞損傷較嚴(yán)重ALT胞漿內(nèi)AST

線粒體（80%）和胞漿（20%）內(nèi)（3）γ-GT和ALP(AKP)●

兩者均是反應(yīng)膽汁淤積的指標(biāo)γ-GT

肝炎活動(dòng)期，梗阻性黃疸時(shí)可顯著升高ALP同上，兒童亦可明顯升高。腫瘤時(shí)兩者亦可出現(xiàn)顯著升高2.血清膽紅素測定●血清總膽紅素升高水平可反應(yīng)肝細(xì)胞損傷程度●直接膽紅素占總膽紅素的比例對判斷黃疸性質(zhì)有一定幫助：肝細(xì)胞性黃疸：DB與IB同比例升高梗阻性黃疸或膽汁淤積時(shí)：DB

60%TB3.甲胎蛋白（AFP）●

慢性肝炎及肝硬化：可升高●

重型肝炎：可升高，病情好轉(zhuǎn)后降低●

診斷PHC：>500ng/ml，4周以上200～500ng/ml，8周以上4.白蛋白、球蛋白●

白蛋白下降多見于肝硬化和重型肝炎●

球蛋白升高多見于慢性肝炎病毒的感染5.凝血酶原時(shí)間（PT）和凝血酶原活動(dòng)度（PTA）★PT和PTA可以敏感地反應(yīng)肝臟損害的嚴(yán)重程度VitK依賴性凝血因子：Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ主要由肝臟合成的凝血因子：Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ、ⅩⅦ因子半衰期最短淤膽PT主要檢測外源性凝血系統(tǒng)中Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ等活性●正常值：PT

12～16秒維生素K糾正試驗(yàn)303PTA＝×100%（80%～100%）PT—8.7PTA<20%時(shí)可自發(fā)性出血，<10%時(shí)預(yù)后惡劣與肝細(xì)胞壞死嚴(yán)重性相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)●血清膽紅素:升高程度與肝細(xì)胞壞死程度正相關(guān)●PTA:

降低程度與肝細(xì)胞壞死程度正相關(guān)●血清白蛋白:降低程度與壞死程度正相關(guān)慢性肝炎實(shí)驗(yàn)室檢查異常程度參考指標(biāo)項(xiàng)

目輕

度中

度重

度ALT或/或AST(IU/L)≤正常3倍

＞正常3倍

＞正常3倍膽紅素(Bil)(μmol/L)

≤34.2

34.3-85.5

＞85.5白蛋白(A)(g/L)A/G電泳r球蛋白(rEP)(%)

≤21凝血酶原活動(dòng)度(PTA)(%)＞71≥35≥1.4＜35-＞32

≤32＜1.4-1.0

≤1.0＞21-＜26

≥26＜71-＞60

60-40*膽堿酯酶(CHE)(U/L〗

＞5400

≤5400-＞4500≤4500注：*有條件開展CHE檢測的單位，可參考本項(xiàng)指標(biāo)。★三、病毒感染血清標(biāo)志物的臨床檢測及意義（一）甲

肝●抗HAV-IgM是診斷急性甲肝最可靠方法?！窨笻AV-IgG檢測：主要用于人群感染率的調(diào)查（二）乙

肝1.乙肝五項(xiàng)意義判定“兩對半”分析舉例HBsAg

抗-HBs

HBeAg

抗-HBe

抗-HBc＋＋＋＋＋＋大三陽小三陽＋＋＋＋＋＋＋＋＋“兩對半”分析舉例HBsAg

抗-HBs

HBeAg

抗-HBe

抗-HBc＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋急性肝炎早期，傳染性強(qiáng)“兩對半”分析舉例HBsAg

抗-HBs

HBeAg

抗-HBe

抗-HBc“大三陽”＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋傳

急染

性性

或強(qiáng)

慢性＋＋＋現(xiàn)癥＋＋感染“兩對半”分析舉例HBsAg

抗-HBs

HBeAg

抗-HBe

抗-HBc＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋有無傳染性應(yīng)結(jié)合HBVDNA檢測結(jié)果“小三陽”“兩對半”分析舉例HBsAg

抗-HBs

HBeAg

抗-HBe

抗-HBc＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋有過HBV感染，目前有無傳染性應(yīng)結(jié)合HBVDAN結(jié)果“兩對半”分析舉例HBsAg

抗-HBs

HBeAg

抗-HBe

抗-HBc＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋HBV感染的恢復(fù)期，有免疫力，無傳染性“兩對半”分析舉例HBsAg

抗-HBs

HBeAg

抗-HBe

抗-HBc＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋①注射疫苗后；②遙遠(yuǎn)的過去有過HBV感染“兩對半”分析舉例HBsAg

抗-HBs

HBeAg

抗-HBe

抗-HBc＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋①窗口期，抗-HBs即將出現(xiàn)；②HBV感染已過乙肝血清標(biāo)志物小結(jié)●

唯一的保護(hù)性抗體：

抗HBs●

HBsAg代表現(xiàn)癥感染，不代表傳染性●

空窗期及空窗期標(biāo)志物（抗HBc/抗HBe）●

抗HBe的臨床意義(康復(fù)/前C變異/HBV-DNA整合）●

HBV感染的血清復(fù)制指標(biāo)HBVDNA;

HBVDNAPHBeAg;

HBcAg(肝細(xì)胞或Dane顆粒內(nèi)）高滴度IgG抗HBc；IgM抗HBc（三）丙

肝●

抗-HCV：不是保護(hù)性抗體，是感染標(biāo)志●

HCV-RNA是HCV感染和治療的直接證據(jù)（四）丁

肝●

HDAg和HDV-RNA均是HDV感染的直接證據(jù)●抗HDV-IgM：既可用于早期診斷，也是診斷慢性HDV感染的敏感指標(biāo)。（五）戊

肝●抗HEV-I