真菌檢驗(yàn)技術(shù)

真菌檢驗(yàn)技術(shù)第一頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日第二頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日第十四章

真菌檢驗(yàn)技術(shù)返回總目錄第三頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日本章內(nèi)容第一節(jié)真菌形態(tài)檢驗(yàn)技術(shù)

1第二節(jié)真菌培養(yǎng)技術(shù)2第三節(jié)真菌的鑒定方法3第四節(jié)真菌藥物敏感試驗(yàn)4第四頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日學(xué)習(xí)目標(biāo)及重點(diǎn)學(xué)習(xí)目標(biāo)：掌握真菌的檢驗(yàn)方法熟悉真菌標(biāo)本采集及注意事項(xiàng)；真菌的鑒定程序；真菌藥物

敏感試驗(yàn)方法了解常用抗真菌藥物本章重點(diǎn)：

★臨床真菌標(biāo)本的采集和處理★真菌的形態(tài)學(xué)檢查、培養(yǎng)技術(shù)和鑒定試驗(yàn)★真菌藥物敏感試驗(yàn)第五頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日第一節(jié)

真菌形態(tài)檢驗(yàn)技術(shù)一、標(biāo)本的采集和處理

1.標(biāo)本的采集——根據(jù)真菌感染部位采集不同的標(biāo)本取毛發(fā)、皮屑、指（趾）甲等標(biāo)本取痰液、膿汁、血液、腦脊液等標(biāo)本深部真菌感染淺部真菌感染第六頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日標(biāo)本來源要適宜用藥前采集標(biāo)本嚴(yán)格無菌操作標(biāo)本量要充足立即送檢2.標(biāo)本采集注意事項(xiàng)第一節(jié)

真菌形態(tài)檢驗(yàn)技術(shù)第七頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日臨床標(biāo)本分離培養(yǎng)直接檢查免疫學(xué)檢查觀察菌落生化反應(yīng)染色鏡檢直接鏡檢3.檢驗(yàn)程序核酸檢測其他鑒定試驗(yàn)形態(tài)學(xué)檢查病理組織標(biāo)本動物實(shí)驗(yàn)鏡檢PASHE第一節(jié)

真菌形態(tài)檢驗(yàn)技術(shù)第八頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日二、直接鏡檢

標(biāo)本處理液：（1）KOH溶液適于檢查致密的難以透明的材料（2）生理鹽水用于觀察真菌的出芽現(xiàn)象（3）水合氯醛-石炭酸-乳酸封固液透明力較強(qiáng)，只限于不透明的標(biāo)本鏡檢（加溫）毛發(fā)或皮屑等注意真菌與其他混雜物的鑒別標(biāo)本+標(biāo)本處理液第一節(jié)

真菌形態(tài)檢驗(yàn)技術(shù)第九頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日三、染色鏡檢革蘭染色：各種真菌均為革蘭陽性（圖1）乳酸酚棉藍(lán)染色：染成藍(lán)色（圖2）墨汁染色：背景染成黑色，菌體不著色（圖3）熒光染色：熒光顯微鏡下發(fā)出熒光糖原染色：多糖成分呈紅色，核為藍(lán)色，背景為淡綠色返回章內(nèi)容（圖1）（圖3）（圖2）第一節(jié)

真菌形態(tài)檢驗(yàn)技術(shù)第十頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日第二節(jié)真菌培養(yǎng)技術(shù)一、基本條件1.常用工具平皿、試管、接種針、接種環(huán)、接種鉤、培養(yǎng)箱等第十一頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日一、基本條件2.培養(yǎng)基真菌營養(yǎng)要求不高，最適pH4.0～6.0常用的培養(yǎng)基:培養(yǎng)基名稱培養(yǎng)基用途沙氏培養(yǎng)基真菌的常規(guī)培養(yǎng)放線菌酮-氯霉素瓊脂真菌的常規(guī)培養(yǎng)玉米粉吐溫-80瓊脂觀察白假絲酵母菌的厚膜孢子馬鈴薯葡萄糖瓊脂

觀察真菌菌落色素，用于鑒別尿素瓊脂生化反應(yīng)鑒別培養(yǎng)（紅色癬菌和石膏樣癬菌）心腦浸液葡萄糖血瓊脂顯色鑒定培養(yǎng)基深部真菌培養(yǎng)真菌的培養(yǎng)與鑒定第二節(jié)真菌培養(yǎng)技術(shù)第十二頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日顯色鑒定培養(yǎng)基真菌特異性酶的底物（無色）產(chǎn)色基團(tuán)代謝基質(zhì)產(chǎn)色基團(tuán)游離（顯色）真菌的酶分解代謝基質(zhì)原理第二節(jié)真菌培養(yǎng)技術(shù)第十三頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日白色念珠菌：熱帶念珠菌：克柔念珠菌：光滑念珠菌：近平滑念珠菌：藍(lán)綠色藍(lán)灰色、鐵藍(lán)色粉紅色紫色白色

第二節(jié)真菌培養(yǎng)技術(shù)第十四頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日二、培養(yǎng)方法僅用于培養(yǎng)生長繁殖較快的真菌觀察真菌結(jié)構(gòu)及生長發(fā)育過程多用于菌種傳代接種與保存試管培養(yǎng)法大培養(yǎng)法小培養(yǎng)法玻璃棒載玻片培養(yǎng)基蓋玻片無菌蒸餾水第二節(jié)真菌培養(yǎng)技術(shù)第十五頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日三、生長現(xiàn)象

類酵母型菌落絲狀菌落觀察菌落生長速度、菌落大小、表面形態(tài)、性質(zhì)、顏色、邊緣、底部等酵母型菌落返回章內(nèi)容第二節(jié)真菌培養(yǎng)技術(shù)第十六頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日檢測真菌對單糖、多糖、醇類等發(fā)酵情況糖（醇）類發(fā)酵試驗(yàn)檢測真菌對糖類中的碳源利用能力的試驗(yàn)，主要用于鑒定酵母菌同化碳源試驗(yàn)檢測真菌對氮源利用能力的試驗(yàn)，主要用于鑒定酵母菌同化氮源試驗(yàn)?zāi)承┱婢哂忻髂z酶，可分解明膠蛋白，使其失去凝膠性質(zhì)而不能凝固明膠液化試驗(yàn)?zāi)承┱婢哂心蛩孛?，可分解尿素尿素分解試?yàn)一、常用生化試驗(yàn)第三節(jié)真菌的鑒定方法第十七頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日二、免疫學(xué)檢查提取真菌抗原，進(jìn)行皮內(nèi)注射或斑貼試驗(yàn)，觀察注射或試驗(yàn)部位有無紅腫硬結(jié)出現(xiàn)皮膚試驗(yàn)檢測真菌的抗原或抗體，例如：膠乳凝集試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、免疫熒光技術(shù)、放射免疫分析等血清學(xué)檢測第三節(jié)真菌的鑒定方法第十八頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日三、其它鑒定診斷方法l.厚膜孢子形成試驗(yàn)接種玉米粉吐溫-80瓊脂

25℃孵育1～3天待測菌每天于顯微鏡下觀察應(yīng)用：白假絲酵母菌的鑒定方法：結(jié)果：白假絲酵母菌在72小時(shí)內(nèi)可觀察到豐富的假菌絲，假菌絲頂端見1～2個厚膜孢子厚膜孢子假菌絲第三節(jié)真菌的鑒定方法第十九頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日2.芽管形成試驗(yàn)

方法：待測菌+0.5～1ml血清37℃水浴2～3小時(shí)鏡檢應(yīng)用：白假絲酵母菌的鑒定三、其它鑒定診斷方法結(jié)果：絕大部分白假絲酵母菌可形成典型的放大鏡柄狀芽管芽管第三節(jié)真菌的鑒定方法第二十頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日三、其它鑒定診斷方法

3.動物接種4.病理組織檢查5.核酸檢測6.真菌毒素的檢測用于分離病原性真菌、確定真菌的致病性、研究抗真菌藥物用于深部真菌感染的診斷用于真菌的分型鑒定有ELISA、生物學(xué)方法、薄層層析法、高效液相色譜法等多種方法7.G試驗(yàn)用于念珠菌、曲霉菌等深部真菌感染的早期診斷返回章內(nèi)容第三節(jié)真菌的鑒定方法第二十一頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日第四節(jié)真菌藥物敏感試驗(yàn)指導(dǎo)臨床用藥監(jiān)控耐藥菌株的發(fā)生和耐藥性變化預(yù)期研究新藥的潛在療效藥敏試驗(yàn)?zāi)康牡诙?，共二十六頁，編輯?023年，星期日一、臨床常用抗真菌藥物多烯類：如兩性霉素B、制霉菌素等吡咯類：如酮康唑、伊曲康唑等其他：如氟胞嘧啶據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)分類作用于真菌細(xì)胞膜：如兩性霉素B等作用于真菌細(xì)胞壁：如尼可霉素Z等干擾真菌DNA合成：如5-氟胞嘧啶等其他：如大蒜新素及冰醋酸等據(jù)作用機(jī)制分類第四節(jié)真菌藥物敏感試驗(yàn)第二十三頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日二、酵母菌藥敏試驗(yàn)方法——微量稀釋法1．試驗(yàn)前準(zhǔn)備RPMI1640培養(yǎng)基（含L-谷氨酰胺、酚紅，不含碳酸氫鈉）培養(yǎng)基以培養(yǎng)基依次作10倍稀釋，濃度范圍：原液～10倍于試驗(yàn)終濃度藥液稀釋配成最高試驗(yàn)濃度的10倍（水溶性藥物）或100倍（脂溶性藥物）藥物原液配制用培養(yǎng)基稀釋成1×103～5×103CFU/ml待檢菌液制備第四節(jié)真菌藥物敏感試驗(yàn)第二十四頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日2．方法35℃孵育48h（假絲酵母菌）或72h（新型隱球菌），觀察結(jié)果各孔接種0.1ml工作濃度的菌液將藥液加至無菌96孔微量板稀釋藥物第四節(jié)真菌藥物敏感試驗(yàn)第二十五頁，共二十六頁，編輯于2023年，星期日3．結(jié)果判斷