第八章超敏反應(yīng)及其疾病

第八章超敏反應(yīng)及其疾病第一頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一提要利用免疫學(xué)原理建立的免疫學(xué)檢測技術(shù)主要應(yīng)用于對多種免疫性疾?。ǜ腥拘约膊?、免疫缺陷病、超敏反應(yīng)、自身免疫病、免疫增殖病、移植排斥反應(yīng)和腫瘤等）的診斷、療效評估、發(fā)病機制探討、以及對抗原性物質(zhì)或免疫細(xì)胞的定性、定量，對細(xì)胞因子、粘附分子及細(xì)胞受體的檢測等。第二頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一第一節(jié)抗原或抗體的檢測抗原-抗體反應(yīng)包括沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)、溶解反應(yīng)、補體結(jié)合反應(yīng)和中和反應(yīng)等?？乖?抗體反應(yīng)可用已知的特異性抗體檢測未知的抗原；也可用已知的抗原檢測未知的抗體。免疫熒光技術(shù)、免疫酶技術(shù)、同位素標(biāo)記技術(shù)、發(fā)光免疫分析等免疫標(biāo)記技術(shù)提高了抗原抗體反應(yīng)的敏感性。第三頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一抗原-抗體反應(yīng)的特點抗原-抗體的結(jié)合是特異性結(jié)合抗原抗體結(jié)合是分子表面的非共價鍵結(jié)合抗原抗體反應(yīng)可分為兩個階段特異性結(jié)合階段可見的反應(yīng)階段抗原和抗體結(jié)合是否呈現(xiàn)可見的反應(yīng)現(xiàn)象，于兩者的分子比例密切相關(guān)第四頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一抗原抗體比例對反應(yīng)現(xiàn)象的影響第五頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一抗原-抗體反應(yīng)受多種因素影響1電解質(zhì)：抗原-抗體反應(yīng)通常應(yīng)用0.85%的氯化鈉作為稀釋液，以供給適應(yīng)濃度的電解質(zhì)。2溫度：一般常使用反應(yīng)在37度水浴或孵育箱中進(jìn)行。3.酸堿度：抗原-抗體反應(yīng)適應(yīng)的酸堿度

為PH6~8?？乖?抗體反應(yīng)受多種因素影響第六頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一抗原抗體的檢測方法凝集反應(yīng)沉淀反應(yīng)補體溶血反應(yīng)和補體結(jié)合反應(yīng)中和反應(yīng)用標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)第七頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一凝集反應(yīng)

(Agglutination)細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后形成凝集現(xiàn)象，稱為凝聚反應(yīng)。1、直接凝集：將細(xì)菌或紅細(xì)胞與相應(yīng)的抗體直接反應(yīng)，出現(xiàn)細(xì)菌凝集或紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象。又分為玻片法和試管法。2、間接凝集：將可溶性抗原包被在紅細(xì)胞或乳膠顆粒表面，與相應(yīng)抗體反應(yīng)出現(xiàn)顆粒凝集現(xiàn)象。第八頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一血球凝集第九頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一

沉淀反應(yīng)

（Precipitation)血清蛋白質(zhì)、細(xì)胞裂解液或組織浸液等可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合后出現(xiàn)沉淀物，這一類反應(yīng)稱為沉淀反應(yīng)。沉淀反應(yīng)可在液體中進(jìn)行，如絮狀沉淀。大多沉淀反應(yīng)是用半固體瓊脂凝膠為介質(zhì)，進(jìn)行瓊脂擴(kuò)散故也稱免疫擴(kuò)散。第十頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一單向免疫擴(kuò)散

(SingleImmunodiffusion)是將一定量已知抗體混于瓊脂凝膠中制瓊脂板，在適當(dāng)位置打孔后將抗原加入孔中擴(kuò)散?？乖跀U(kuò)散過程中與凝膠中的抗體相遇，形成以抗原孔為中心的沉淀環(huán)，環(huán)的直徑與抗原含量成正比相關(guān)。本法常用于測定血清IgG、IgM、IgA和C3等的含量。含抗體的凝膠沉淀環(huán)第十一頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一雙向免疫擴(kuò)散

（DoubleImmunodiffusion)是將抗原與抗體分別加入瓊脂凝膠的小孔中，二者自由向周圍擴(kuò)散并相遇，在比例合適處形成沉淀線。如果反應(yīng)體系中含兩種以上的抗原抗體系統(tǒng)，則小孔間可出現(xiàn)兩條以上的沉淀線。本法常用于抗原或抗體的定性、組成和兩種抗原相關(guān)性分析的檢測。第十二頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一免疫電泳

（Immunoelectrophoresis)是先將待側(cè)血清標(biāo)本作瓊脂凝膠電泳，血清中各蛋白組分被分成不同的區(qū)帶，然后與電泳方向平行挖一小槽，加入相應(yīng)的抗血清，把分成區(qū)帶的蛋白抗原成分作雙向免疫擴(kuò)散，在各區(qū)帶相應(yīng)的位置形成沉淀弧。該法常用于血清蛋白種類分析，以觀察Ig的異常增多或缺失。第十三頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一火箭電泳（RocketElectrophoresis)

火箭電泳也稱免疫擴(kuò)散，是把單向免疫擴(kuò)散同電泳結(jié)合在一起的方法。抗原在含有定量抗體的瓊脂中泳動，兩者比例適宜時，在較短時間內(nèi)生成錐形的沉淀峰。在一定濃度范圍內(nèi)，沉淀峰的高度與抗原含量成正比。此法的特點是需時較短，故可用于快速沉淀標(biāo)本中抗原的含量。第十四頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一火箭電泳示意圖第十五頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一補體結(jié)合反應(yīng)（ComplementFixation,CFT)

敏感性和特異性均較高，但該試驗影響因素較多，現(xiàn)在已有被其它新方法取代的趨勢。第十六頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一免疫標(biāo)記技術(shù)用熒光素、同位素或酶等示蹤物質(zhì)標(biāo)記抗體（或抗原）進(jìn)行抗原-抗體反應(yīng)。標(biāo)記物質(zhì)與抗體（或抗原）的化學(xué)連接未改變抗體（或抗原）的免疫學(xué)特性，同時標(biāo)記物的性質(zhì)依然存在，因而極大的提高了反應(yīng)的靈敏度，可以對微量物質(zhì)進(jìn)行定量、定性或定位檢測。免疫標(biāo)記技術(shù)主要有三種基本類型：免疫熒光技術(shù)、免疫酶技術(shù)和同位素標(biāo)記技術(shù)。第十七頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一免疫熒光顯微技術(shù)

(ImmunofluorescenceTechnique)是用熒光素（常用的有異硫氰酸熒光素，F(xiàn)ITC)與抗體連接成熒光抗體，再與待測標(biāo)本的抗原反應(yīng)，，置熒光顯微鏡下觀察，抗原抗體復(fù)合物散發(fā)出熒光，借此對標(biāo)本中的抗原作鑒定和定位。包括直接熒光法、間接熒光法和補體法。第十八頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一直接熒光法：將熒光素直接標(biāo)記抗體作標(biāo)本染色。該法的優(yōu)點是特異性強，但其缺點是每檢測一種抗原必須制備相應(yīng)的熒光抗體。間接熒光法：用一抗與標(biāo)本中的抗原結(jié)合，再用熒光素標(biāo)記的二抗染色。該法的優(yōu)點是敏感性比直接法高，制備一種熒光素標(biāo)記的二抗可用于多種抗原的檢測，但非特異性熒光亦會增加。補體結(jié)合免疫熒光法：此法是在間接法的第一步抗原—抗體反應(yīng)時加入補體，使之與抗原——抗體復(fù)合物結(jié)合；再用熒光素標(biāo)記的抗C3抗體進(jìn)行示蹤。第十九頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一間接免疫熒光法示意圖第二十頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一免疫熒光顯微技術(shù)第二十一頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一流式細(xì)胞術(shù)（FlowCytometry,FCM)

FCM是將免疫熒光技術(shù)應(yīng)用于流式細(xì)胞儀，對單個細(xì)胞的表面標(biāo)志（抗原或受體）進(jìn)行快速、精確的分析和自動檢測，并將不同類型的細(xì)胞分選收集。FCM還可對同一細(xì)胞的多種參數(shù)（如DNA、RNA、蛋白質(zhì)和細(xì)胞體積等）進(jìn)行多信息分析，為當(dāng)代生命科學(xué)研究領(lǐng)域中廣泛使用的一項新技術(shù)。流式細(xì)胞術(shù)第二十二頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一流式細(xì)胞儀工作原理第二十三頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一酶免疫測定

(EnzymeImmunoassay,EIA)是用酶（常用的有辣根過氧化物酶，HRP和堿性磷酸酶，AP)標(biāo)記的抗體進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)。EIA將抗原抗體反應(yīng)的特異性與酶催化作用的高效性相結(jié)合，通過酶作用于底物后顯色來判定結(jié)果。常用的方法有酶聯(lián)免疫吸附試驗和酶免疫組化法，前者測定可溶性抗原或抗體，后者測定組織中或細(xì)胞表面的抗原。第二十四頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一酶聯(lián)免疫吸附試驗

(EnzymeLinkedImmunosorbentAssay,ELISA)是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體（聚苯乙烯微量反應(yīng)板）表面，使抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行。用洗滌法將液相中游離成分洗除。主要有雙抗體夾心法、間接法BAS-ELISA等。第二十五頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一ELISA檢測抗體第二十六頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一第二十七頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一放射免疫測定法

(Radioimmunoassay,RIA)是用放射性核素標(biāo)記抗原進(jìn)行的免疫學(xué)檢測技術(shù)。它將放射性核素顯示的高靈敏性和抗原抗體反應(yīng)的特異性結(jié)合，使檢測的敏感性達(dá)pg水平。常用于標(biāo)記的放射性核素有I125和I131。常用于胰島素、生長激素、藥物等微量物質(zhì)的測定。第二十八頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一

Ag*AbAg

標(biāo)記抗原特異性抗體待測抗原(Ag*-Ab)+(Ag-Ab)抗原抗體復(fù)合物分離Ag*-Ab和游離Ag*從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀知含量測定Ag*-Ab和/或游離Ag*放射性放射免疫測定法(RIA)示意圖第二十九頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一RIA法原理及標(biāo)準(zhǔn)曲線

7550301001101001000未標(biāo)記抗原濃度（ng/ml)結(jié)合/未結(jié)合的放射活性（%）第三十頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一免疫印跡法(Immunoblotting)是將凝膠電泳與固相免疫測定結(jié)合，先把電泳分區(qū)的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到固相載體，再用酶免疫、放射免疫等技術(shù)測定。該法能分離分子大小不同的蛋白質(zhì)并確定其分子量。常用于檢測多種病毒如HIV的抗體或抗原。第三十一頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一免疫印跡法示意圖第三十二頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一第二節(jié)淋巴細(xì)胞的測定

檢測各群體淋巴細(xì)胞的數(shù)量與功能是觀察機體免疫狀態(tài)的重要手段。外周血是病人主要的檢測標(biāo)本，但僅代表再循環(huán)的淋巴細(xì)胞。實驗動物還可取胸腺、脾、淋巴結(jié)等作為標(biāo)本進(jìn)行檢查。第三十三頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一(1)抗凝靜脈血(2)加等量NS(4)密度梯度離心血漿分離液RBCPBMCPMN(3)混勻后，緩慢加于分離液上第三十四頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一一、淋巴細(xì)胞類型和數(shù)目的測定1、花結(jié)試驗：E花結(jié)試驗可用于檢測T細(xì)胞數(shù)目。EA花結(jié)試驗可用于檢測B細(xì)胞數(shù)目。2、免疫熒光法：常采用間接免疫熒光法。3、流式細(xì)胞術(shù)：借助流式細(xì)胞儀（FCM)。第三十五頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一花結(jié)試驗示意圖第三十六頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一T細(xì)胞功能測定體外法：T細(xì)胞增殖試驗形態(tài)學(xué)檢查

3H-TdR摻入法

MTT法體內(nèi)法：用生物抗原或化學(xué)抗原作皮內(nèi)試驗。OT-PPD皮試SD-SK皮試

第三十七頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一培養(yǎng)液3H-TdRPHA淋巴細(xì)胞全血分層液離心過濾測量放射性淋巴細(xì)胞增殖試驗（3H-TdR摻入法）示意圖第三十八頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一靶細(xì)胞51Cr洗滌去除游離的51Cr效應(yīng)細(xì)胞測量上清液中釋放的51Cr混合培養(yǎng)4-6小時細(xì)胞毒試驗（51Cr釋放法）示意圖第三十九頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一酶聯(lián)免疫斑點法

（Enzyme-LinkedImmunospot,ELISA)是在ELISA的基礎(chǔ)上建立的檢測抗體生成細(xì)胞及細(xì)胞因子產(chǎn)生細(xì)胞的方法。第四十頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一CK抗體包被的反應(yīng)板

CK抗原包被的反應(yīng)板加入淋巴細(xì)胞加入酶標(biāo)記二抗加入底物檢測抗原特異性B細(xì)胞加入底物T細(xì)胞產(chǎn)生CK的檢測加入淋巴細(xì)胞加入酶標(biāo)的CK抗體第四十一頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗（形態(tài)學(xué)示意圖）原理：人T細(xì)胞表面有PHA或ConA受體，T細(xì)胞在體外受PHA或ConA的刺激后能轉(zhuǎn)化為體積較大、代謝旺盛、且能進(jìn)行分裂的淋巴細(xì)胞，以此測定T細(xì)胞的功能。

PHA刺激48~72小時第四十二頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一淋巴細(xì)胞增殖—3H-TdR摻入法原理：將單個核細(xì)胞中加入PHA共同培養(yǎng)，在終止培養(yǎng)前8~15小時加入氚標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷（3H-TdR),經(jīng)β-液體閃爍儀檢測淋巴細(xì)胞DNA的3H-TdR摻入量，推測淋巴細(xì)胞增殖的程度。第四十三頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一MTT(四甲基偶氮唑鹽）法原理：在細(xì)胞培養(yǎng)終止前數(shù)小時加入MTT，活細(xì)胞內(nèi)線粒體琥珀酸脫氫酶分解MTT產(chǎn)生藍(lán)色甲攢（Formazan)沉積于細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞周圍，形成甲攢的量與細(xì)胞增殖程度成正相關(guān)。第四十四頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一細(xì)胞毒試驗CTL介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗：常采用51Cr釋放法NK細(xì)胞的細(xì)胞毒試驗：常用的靶細(xì)胞為K562細(xì)胞第四十五頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一（一）傳統(tǒng)疫苗1、滅活疫苗（死疫苗）：是選用免疫原性強的病原微生物，經(jīng)人工大量培養(yǎng)后，用理化方法滅活后制成。常用的死疫苗有乙型腦炎疫苗、狂犬疫苗、霍亂疫苗等。2、減毒活疫苗：用減毒或無毒力的活病原微生物制成的稱為活疫苗，又稱為減毒活疫苗。常用的活疫苗有卡介苗、麻疹疫苗、風(fēng)疹疫苗、脊髓灰質(zhì)炎疫苗等。

第四十六頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一2、合成肽疫苗：根據(jù)有效免疫原的氨基酸序列設(shè)計合成的免疫原性多肽交聯(lián)載體疫苗。3、結(jié)合疫苗將莢膜多糖的水解物連接于白喉類毒素而制備的疫苗。目前已獲準(zhǔn)的結(jié)合疫苗有流感桿菌、腦膜炎萘瑟菌、肺炎鏈球菌疫苗等。４、重組抗原疫苗是利用DNA重組技術(shù)制備的只含保護(hù)性抗原的純化疫苗。不含活的病原體及病毒核酸。安全有效，目前獲準(zhǔn)生產(chǎn)的有乙肝疫苗、口蹄疫疫苗和萊姆病疫苗。第四十七頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一５、重組載體疫苗：將編碼病原體有效免疫原的基因插入減毒的病毒載體基因中，接種后，隨疫苗株在體內(nèi)增殖，而表達(dá)相應(yīng)抗原。６、DNA疫苗：用編碼病原體有效免疫原基因的重組體直接接種，在體內(nèi)可表達(dá)保護(hù)性抗原，從而誘導(dǎo)機體產(chǎn)生特異性免疫，此為DNA疫苗。７、轉(zhuǎn)基因植物疫苗：用轉(zhuǎn)基因方法將編碼有效免疫原的基因?qū)肟墒秤弥参锛?xì)胞的基因組中，免疫原即可在植物的可食用部分穩(wěn)定表達(dá)和積累，人和動物通過攝食達(dá)到免疫接種的目的。常用植物有番茄、馬鈴薯、香蕉等。第四十八頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一二、人工被動免疫是給機體輸入抗體，使機體獲得特異性免疫力。輸入抗體后立即獲得免疫力，但維持時間短，一般為2-3周，臨床上主要用于治療或緊急預(yù)防。1、抗毒素：

抗毒素主要用于某些細(xì)菌外毒素所致疾病的治療和緊急預(yù)防。常用的有白喉抗毒素、破傷風(fēng)抗毒素等。應(yīng)用時要做皮試，且要早期、足量才能發(fā)揮應(yīng)有效果。第四十九頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一2、人免疫球蛋白制劑

從正常人血漿或健康產(chǎn)婦胎盤血中提取制成。由于多數(shù)成人已隱性或顯性感染過麻疹、脊髓灰質(zhì)炎和甲型肝炎等傳染病，血清中含有一定量相應(yīng)的抗體。因此，這兩種丙種球蛋白可用于上述疾病的治療或緊急預(yù)防，有防止發(fā)病、減輕癥狀、縮短病程的效果。還可用于丙種球蛋白缺乏癥的治療。第五十頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一三、計劃免疫

是根據(jù)特定傳染病的疫情監(jiān)測和人群免疫狀況分析，按照規(guī)定的免疫程序有計劃地進(jìn)行人群預(yù)防接種，從而提高人君的免疫水平，達(dá)到控制以至最終消滅相應(yīng)傳染病的目的而采取的重要措施。第五十一頁，共五十八頁，編輯于2023年，星期一

我國推薦的兒童免疫程序年齡疫苗名稱出生時卡介苗、乙型肝炎疫苗11個月乙型肝炎疫苗22個月三價脊髓灰質(zhì)炎活疫苗13個月三價脊髓灰質(zhì)炎活疫苗2、百白破14個月三價脊髓灰質(zhì)炎活疫苗3、百白破25個月百白破36個月乙型肝炎疫苗38個月麻疹疫苗1.5－2歲百白破44歲