2019年微生物檢驗第八章非發(fā)酵陰桿課件

第十七章

非發(fā)酵革蘭陰性桿菌

?

是指一大群不發(fā)酵葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖的需氧，無芽胞的革蘭陰性桿菌。

?

特別提示：并非分類概念

只為認識方便

?

生物習性相似

已經(jīng)形成習慣

革蘭陰性桿菌

OX+葡萄糖O/F葡萄糖O/F不動桿菌屬

窄食單胞菌屬

不利用

洛非不動桿菌

FO腸桿菌科

假單胞菌屬

無色桿菌屬

金色桿菌屬

不利用

產(chǎn)堿桿菌

布魯菌屬

產(chǎn)堿假單胞

無色桿菌

FO氣單胞

鄰單胞

弧菌屬

－

共有的幾個特點

非發(fā)酵菌大多數(shù)為條件致病菌

主要引起抵抗力低下病人的機會感染，如敗血癥、呼吸道感染、尿路感染、傷口感染等?，F(xiàn)已成為引起醫(yī)院內(nèi)感染的主要病原菌。

對抗生素有天然的抗藥性

非發(fā)酵菌對抗生素常呈現(xiàn)多重耐藥現(xiàn)象。如銅綠假單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌、鮑曼不動桿菌、黃桿菌等對絕大多數(shù)抗生素耐藥，銅綠假單胞菌對氨芐青霉素耐藥率達100%，甚至對第三代頭子孢菌素也呈現(xiàn)耐藥，而且耐藥率在逐年增加。

不發(fā)酵革蘭陰性桿菌分類

?假單胞菌屬

(Pseudomonas)?產(chǎn)堿桿菌屬

(Alcaligenes)?不動桿菌屬

(Acinetobacter)?莫拉菌屬

(Moraxella)?無色桿菌屬

(Achromobacter)?金氏桿菌屬

(Kingella)?黃桿菌屬

(Flavobacterium)?艾肯菌屬

(Eikenella)?土壤桿菌屬

(Agrobacterium)?黃單胞菌屬

(Xanthomonas)?叢毛單胞菌屬

(Comamonas)

常見非發(fā)酵革蘭陰性桿菌的初步分群鑒定

試驗

假單胞菌屬

無色桿菌屬

黃桿菌屬

不動桿菌屬

產(chǎn)堿桿菌屬

叢毛菌屬

莫拉菌屬

氧化酶

+++/--+++/-O/F試驗

O/-OOO/----動力

+/-+/-

+/-

-++-注：+：90%以上陽性；-10%以下的陽性；+/-：約70%為陽性；O：為氧化。

非發(fā)酵菌

嗜麥芽窄食單胞菌

葡萄糖產(chǎn)酸

無色桿菌屬

土壤桿菌屬

假單胞菌屬

動力

+OXOX－

不動桿菌屬

+葡萄糖產(chǎn)酸

黃色素

莫拉氏菌屬

黃桿菌屬

－

－

－

++端鞭毛

－

+－

++產(chǎn)堿桿菌屬

尿素

－

+常見非發(fā)酵菌的鑒定雙岐索引

?假單菌屬按rRNA同源性分為5群及未確定rRNA同源群有關(guān)的種。

?一群需氧、不發(fā)酵葡萄糖、無芽胞，有鞭毛、氧化酶陽性的革蘭陰性桿菌。

?多為條件致病菌。

第一節(jié)

假單胞菌屬

臨床常見假單胞菌分群

rRNA11.熒光假單胞菌DNA同源群

銅綠假單胞菌

熒光假單胞菌

惡臭假單胞菌

2.斯氏假單胞菌DNA同源群

斯氏假單胞菌

曼多辛假單胞菌

3.產(chǎn)堿假單胞菌DNA同源群

產(chǎn)堿假單胞菌

假產(chǎn)堿假單胞菌

2.臨床意義

?分布廣泛：水、土壤、空氣

。

?人類感染的非發(fā)酵菌中，假單胞菌屬占70%-80%，銅綠假單胞菌占55%-65%。

?常見的有嗜麥芽窄食單胞菌、熒光假單胞菌、惡臭假單胞菌、產(chǎn)堿假單胞菌等。

?這些細菌在醫(yī)院內(nèi)感染中亦常見。

3.微生物特性

?革蘭陰性、無芽胞、專性需氧

?有端鞭毛或叢鞭毛

?生長溫度范圍廣，最適生長溫度為35℃

?產(chǎn)生各種水溶性色素：綠膿素、膿紅素、熒光素、膿褐素。

?對理化因素耐受性較強，對多種抗生素耐藥。

藥敏試驗藥物選擇

按CLSI(NCCLS)推薦，分為4組：

A組:頭孢他啶，慶大霉素，美洛西林，替卡西林，哌拉西林。

B組:頭孢吡肟，頭孢哌酮，氨曲南，亞胺培南，阿米卡星，妥布霉素，環(huán)丙沙星。

C組:頭孢噻肟，頭孢曲松，氯霉素

D組或U組：羧芐西林，頭孢唑肟，四環(huán)素，諾氟沙星，氧氟沙星，磺胺甲基異惡唑。

?在自然界分布較為廣泛，適應(yīng)能力強。

?常引起感染：皮膚、呼吸道、泌尿道、燒傷感染等。慢性肺部感染極為常見。

?菌血癥、心內(nèi)膜炎、肺囊性纖維變。

?眼部感染導致角膜穿孔而失明。

二、銅綠假單胞菌

銅綠假單胞菌的毒力因子

粘附素：粘附

結(jié)構(gòu)成分

多糖似莢膜物質(zhì)

毒素

內(nèi)毒素：LPS

毒力因子

外毒素：A阻止真核細胞蛋白質(zhì)合成

S干擾吞噬殺菌作用

綠膿素：具有氧化還原活性，催化超氧化物和

過氧化氫產(chǎn)生有毒基團

酶類

彈性蛋白酶:絲氨酸蛋白酶（Las-A）

降解彈性鋅金屬蛋白酶（Las-B）蛋白

磷脂酶C:分解脂質(zhì)和卵磷脂，損傷組織細胞

2.生物學特性

形態(tài)與染色

為無芽胞細長的革蘭氏陰性桿菌，菌體長短不一，短的呈球桿狀，長的為絲狀。成對排列或形成短鏈。無莢膜，在菌體一端有1根鞭毛，運動活潑。革蘭氏染色陰性，無抗酸性。

培養(yǎng)特性

?專性需氧菌。生長溫度范圍為20-42℃;最適溫度為35℃

，致病性菌可在42℃

生長，但在4℃

不生長，這可與熒光假單胞菌等進行鑒別。

?本菌對營養(yǎng)無特殊要求，在普通培養(yǎng)基上生長良好，在選擇培養(yǎng)基和麥康凱瓊脂、SS瓊脂培養(yǎng)基上也能生長。

?在普通瓊脂平板上經(jīng)18-24小時培養(yǎng)，可形成圓形、邊緣不整齊、扁平稍隆起、光滑溫潤且常呈融合狀態(tài)的菌落。瓊脂被染成藍綠色或黃綠色。

?在血瓊脂平板上經(jīng)35℃

培養(yǎng)18-24小時，可形成大而扁平、濕潤、有金屬光澤、有特殊氣味之灰綠色、藍綠色的菌落，并形成透明溶血環(huán)。

生化特性

?氧化酶陽性，能氧化分解葡萄糖、木糖產(chǎn)酸，不產(chǎn)氣，但產(chǎn)生紅膿素或黑膿素的菌株，以及粘液型菌落的菌株可能不分解糖類。

?本菌能液化明膠，分解尿素，能利用枸櫞酸鹽，不產(chǎn)生吲哚，能還原硝酸鹽為亞硝鹽酸，或產(chǎn)生氮氣。

（1）分離培養(yǎng)與鑒定：

標本可接種于血瓊脂平板培養(yǎng)基和選擇性培養(yǎng)基。鑒定根據(jù)鏡下特征、菌落形態(tài)、生化反應(yīng)等。

3.微生物檢驗（檢驗程序）

?血平板上毛玻璃樣，金屬光澤，生姜味

?可產(chǎn)生多種色素：

熒光素與綠膿素

（2）抗原檢測：血清學分型、噬菌體分型。

（3）核酸檢測：DNA內(nèi)切酶分析、質(zhì)粒指紋圖譜分析、PCR指紋圖譜分析、脈沖場凝膠電泳分析（PFGE）、基因芯片、PCR技術(shù)、16SrDNA鑒定技術(shù)等。

檢驗結(jié)果報告與分析

?診斷要與臨床表現(xiàn)、標本來源相結(jié)合。

?初代敏感的菌株在治療3~4天后可能發(fā)生耐藥。因此治療過程中，3~4天后重復藥敏測試。

?粒細胞減少的的病人銅綠假單胞菌感染，要用最大劑量的抗菌藥物。

?產(chǎn)粘液型銅綠假單胞菌所致感染治療十分困難，應(yīng)特別提示臨床。

?產(chǎn)酶：金屬酶，OXA酶。

?外膜蛋白的改變（為主要機制）：膜孔蛋白突變，阻止藥物由外膜進入胞內(nèi)。

?主動外排泵機制：對碳青霉烯類、喹諾酮類。

銅綠假單胞菌耐藥機制

?兩菌均人獸共患病原菌。

（馬、驢、騾、貓、狗等）

?人類感染是經(jīng)傷口、粘膜、呼吸道。

?急性患者可有高熱、衰竭等全身癥狀。

?肺鼻疽病

、皮膚鼻疽病、內(nèi)臟膿腫、菌血癥、膿毒血癥

。

臨床意義

生物學特性

?革蘭陰性桿菌

?無芽胞、無莢膜

?偽馬勒鼻伯克霍爾德菌一端有叢鞭毛(1~4

根)，4℃不能生長

?馬勒鼻伯克霍爾德菌無鞭毛無動力，42℃

不生長

?不產(chǎn)生綠膿素、熒光素。

微生物檢驗

?分離培養(yǎng)與鑒定

?需氧菌

?生長溫度35℃

?普通培養(yǎng)基、血瓊脂、麥康凱

?生化鑒定

?熒光直接法染色鏡檢，可快速診斷

?可存在于正常人皮膚、呼吸道、泌尿道。自然界分布廣泛水、土壤、灰塵等。

?重要的條件致病菌。

?在非發(fā)酵菌的感染中，鮑曼不動桿菌僅次于銅綠假單胞菌，位列第二。

?近年呈明顯上升趨勢，尤其是泛耐藥菌株的出現(xiàn)。第二節(jié)

不動桿菌屬

生物學特性

?革蘭陰性桿菌，多為球桿狀或球狀，常見成對排列染成陽性或陰陽不定，誤認為球菌。

?無芽胞，無鞭毛。

?專性需氧菌。生長溫度為35℃

?普通培養(yǎng)基，麥康凱、血平板均生長。

?氧化酶陰性，動力陰性，硝酸鹽試驗陰性。

微生物檢驗（檢驗程序）

血平板：菌落圓形、灰白色、光滑、邊緣整齊、直徑2~3mm，而洛菲不動桿菌菌落小，直徑為1~1.5mm。

單憑生化反應(yīng)鑒定十分困難，簡易方法根據(jù)分解糖與否分為兩大類。

能氧化分解葡萄糖、不溶血：鮑曼不動桿菌。

不氧化分解葡萄糖：

溶血：溶血不動桿菌。

不溶血：洛菲不動桿菌。

臨床絕大多數(shù)是鮑曼不動桿菌，其余少見。

藥物敏感試驗及結(jié)果解釋

?根據(jù)CLSI規(guī)定不動桿菌可以用Kirby-Bauer法做藥敏試驗。

?不動桿菌耐藥性強。對全部氨基青霉素、一、二代頭孢菌素和一代喹諾酮類抗生素天然耐藥。

?可選用：SXT、TZP、CIP、LEV、DO、CT、MNO等。

?亞胺培南敏感性好，但容易快速形成耐藥。

?替加環(huán)素（老虎素）

?嗜麥芽窄食單胞菌是重要的條件致病菌。

?呼吸道、泌尿道、傷口等部位感染，菌血癥及心內(nèi)膜炎。

?很常見：在不發(fā)酵菌引起的感染中，僅次于銅綠假單胞菌和鮑曼不動桿菌，居臨床分離陽性率的第三位。

第三節(jié)

嗜麥芽窄食單胞菌

生物學特性

?革蘭陰性，端鞭毛，(1~8)根

?有動力、無芽胞、無莢膜

?生長溫度為35℃，4℃不生長

?營養(yǎng)要求低，在血瓊脂、普通培養(yǎng)基生長良好。

?菌落中等大小、圓形、光滑、濕潤、產(chǎn)生不溶血的黃色色素或草綠色。有淡淡的氨味。

在血平板上孵育48小時以上，菌落中心有變透明的趨勢，稱之為“貓眼”現(xiàn)象

生化鑒定：

氧化酶陰性

有動力

液化明膠

水解七葉苷

賴氨酸脫羧酶陽性

氧化分解麥芽糖

氧化分解葡萄糖

氧化酶試驗陰性、有動力的非發(fā)酵菌的生物學特性

菌

屬

麥芽糖

賴氨酸

甘露醇

膽汁七葉苷

嗜麥芽窄食單胞菌

++－

－

洋蔥伯克霍爾德

++++/－

唐菖蒲伯克霍爾德菌

－

－

+－

棲稻黃色單胞菌

+－

+－

淺黃金色單胞菌

+－

++少動鞘氨醇單胞菌

+

－

－

+藥物敏感試驗及結(jié)果解釋

?治療首選磺胺類：TMP/SMZ；喹諾酮類：環(huán)丙

氟派酸；替卡西林/棒酸

?亞胺培南(泰能)天然耐藥。

?藥敏試驗紙片法僅有三種抗生素：左氧氟沙星、米諾環(huán)素、復方磺胺有折點。其他藥敏試驗應(yīng)選用肉湯、瓊脂稀釋法作MIC，或采用E-TEST的方法。

軍團菌屬(Legionella)屬于軍團菌科，常見的與人類疾病有關(guān)的軍團菌：

?嗜肺軍團菌（Legionellapneumophila）

?米克戴德軍團菌（L.micdadei）

?長灘軍團菌（L.longbeachae）

?杜莫夫軍團菌（L.dumoffii）

?波茲曼軍團菌（L.bozemanii）

第四節(jié)

軍團菌屬

臨床意義

?供水系統(tǒng)、中央空調(diào)、溶洞、霧化吸入等引起肺炎型和非肺炎型感染。

?肺炎型（重癥）：嗜肺軍團菌（LP），LP1、LP6所致。呼吸道癥狀、多臟器損害、頭痛、畏寒、發(fā)熱、消化道神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，致死率高。

?非肺炎型：病情較輕的自限性疾病。

?醫(yī)院感染可高達23%

。

?慢性心、肺、腎病變、艾滋病或接受免疫抑制劑者

易發(fā)本病，且死亡率高達45%。

生物學特性

?革蘭陰性桿菌

?菌體呈線狀

?無芽胞，無莢膜，有端

鞭毛或側(cè)鞭毛

?嚴格需氧

?觸酶陽性

?可液化明膠

?不分解糖類

?部份菌株氧化酶陽性

微生物檢驗

?臨床標本：痰、氣管分泌物、胸水和血液為主。

?病理組織標本：必須制成懸液，再進行涂片和分離培養(yǎng)。

?環(huán)境污染標本：應(yīng)先濃縮再接種。

微生物檢驗

分離培養(yǎng)：

?營養(yǎng)要求苛刻，生長緩慢

?生長溫度為35℃

?最適pH6.7~7.0?初次分離必須采用(BCYE)?3~5天可形成1~2mm直徑的光澤菌落

軍團菌感染診斷試驗比較

試驗

敏感性(%)特異性(%)評注

培養(yǎng)

70100參考方法

直接免疫熒光

25～70>95不推薦常規(guī)應(yīng)用

間接免疫熒光

70～90>99只用于嗜肺軍團菌血清群1

酶標記免疫

70～90>99乳膠凝集

55～9085～99血清學（間接免疫熒光）

70～80>95輔助培養(yǎng)