第十四章維生素

第十四章維生素類藥物的分析

TheAnalysisofVitamins＊維生素（vitamins）是維持人類機(jī)體正常代謝功能所必須的一類活性物質(zhì)，主要用于機(jī)體的能量轉(zhuǎn)移和代謝調(diào)節(jié)，體內(nèi)不能自行合成，須從食物中攝取。脂溶性維生素（fatsolublevitamins）：A、D、E、K等水溶性維生素（watersolublevitamins）:B族（B1、B2）、C、煙酸、泛酸和葉酸第一節(jié)維生素A的分析維生素A包括維生素A1（視黃醇），A2（去氫維生素A）和A3（去水維生素A）Ch.p：VA是指VA醋酸酯結(jié)晶加精制植物油制成的油溶液。-HVA醇-COCH3VA醋酸酯-COC15H31VA棕櫚酸酯R:一．結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

（一）結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：（1）環(huán)己烯+共軛多烯側(cè)鏈；（2）天然VA側(cè)鏈為全反式；（3）天然來源主要是魚肝油，為醋酸酯，棕櫚酸酯等，目前多由人工合成。（二）性質(zhì)

1.溶解性＊不溶于水＊溶于乙醚，氯仿，環(huán)己烷，石油醚。

2.不穩(wěn)定性＊△或有金屬離子存在時(shí)氧化↑環(huán)氧化物VA醛VA酸3.紫外吸收特性＊具有共軛多烯側(cè)鏈—紫外吸收。＊λmax在325~328nm，隨VA存在狀態(tài)以及所用的溶劑，λmax不同。4.與SbCl3呈色

在CHCl3中與SbCl3作用產(chǎn)生藍(lán)色，用于鑒別、含量測定（一）

三氯化銻反應(yīng)

二.鑒別試驗(yàn)CHCl3條件：無水、無醇藍(lán)色紫紅Ch.P（2010）：VA及其制劑的鑒別λmax為326nmλmax為350～390nm(二)UV法去水VitA（VitA3）↓VitAVitAVitA3USP顯色劑磷鉬酸規(guī)定斑點(diǎn)顏色和Rf值BP

對照品法顯色劑三氯化銻（三）TLC法

VA2、VA3

氧化降解產(chǎn)物光照下產(chǎn)生聚合物：鯨醇異構(gòu)體及合成中間體（一）UV法三、含量測定1.三點(diǎn)校正法的建立VA在325～328nm有最大吸收，雜質(zhì)在310～

340nm有吸收環(huán)氧化物、VA醛、VA酸三點(diǎn)校正法AnmVitAsamplepureVAacetateimpurities2.原理（依據(jù)）物質(zhì)對光的吸收具有加和性；雜質(zhì)的吸收在310~340nm波長范圍內(nèi)呈一條直線，且隨波長的增大吸光度減小。3.波長的選擇（1）1

VA的max（2）23

分別在1的兩側(cè)各選一點(diǎn)測定對象純度高的VA醋酸酯第一法直接測定法（等波長差法）=12nm第二法皂化法（等吸收比法）1=325nm,2=310nm,3=334nm測定對象VA醇1）方法：第一法直接測定法

純度高的VA酯λmax在326～

329nm4.測定方法計(jì)算Ai/A3282）計(jì)算①求%cm1ELCA%cm1·=E②求效價(jià)（IU/g）1900效價(jià)（IU/g）·=%cm1E效價(jià)：每g供試品中所含VA的國際單位數(shù)A328A328(校正)③求標(biāo)示量％標(biāo)示量·1900·平均丸重·100%C·LA==A×D×1900×WW×100×L×標(biāo)示量×100%①

規(guī)定值差值3）A值的選擇

判斷差值是否超過規(guī)定值的有一個(gè)以上超過無超過計(jì)算A328（校正），

f值

用A328計(jì)算03%－15%－3%第二法第二法4）換算因子E（IU/g）%cm1效價(jià)換算因子＝

U

I629070000.344μg/g101g/IU=m×=）效價(jià)（定義為：純（IU/g）%cm1=效價(jià)換算因子＝純（IU/g）%cm1=效價(jià)換算因子＝3330000300.0g101g/IU6=IU/mgm×=）效價(jià)（KOH/乙醇S稀釋至9～15IU/ml異丙醇皂化液乙醚提取??濃縮于300、310、325、334nm處測Ai第二法皂化法VA醇1）方法第一法無法消除雜質(zhì)干擾時(shí)用此法

判斷max是否在323～327nm之間取未皂化樣品采用色譜法純化后再測定

計(jì)算是否2）A值的選擇判斷A300/A325是否≤0.73是否取未皂化樣品采用色譜法純化后再測定

計(jì)算A325(校正)03%－3%3）計(jì)算①求%cm1ELCA%cm1·=E②求效價(jià)（IU/g）1830效價(jià)（IU/g）·=%cm1E=A×D×1830×WW×100×L×標(biāo)示量×100%③標(biāo)示量%VA酯的吸收度校正公式是用直線方程式法（即代數(shù)法）推導(dǎo)而來；VA醇的是用相似三角形法（幾何法或稱6/7定位法）推導(dǎo)而來。在測定前務(wù)必要校正波長。測定在半暗室中盡快進(jìn)行。Ch.p中VA、VA軟膠囊、VAD軟膠囊中VA采用本法測定。討論

維生素AD膠丸中VA的含量測定

精密稱取維生素AD膠丸裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物0.1287g（平均裝量0.07985g/丸，標(biāo)示量每丸含VA10000單位），置10ml燒杯中，加環(huán)己烷溶解并定量轉(zhuǎn)移至50ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻；精密量取2.0ml，置另一50ml量瓶中，用環(huán)己烷稀釋至刻度，搖勻。以環(huán)己烷為空白，測定最大吸收波長為328nm，并在下列波長處測得吸收度為A300：0.374A316：0.592A328：0.663A340：0.553A360：0.228求本品中維生素A占標(biāo)示量的百分含量？A300/A328：0.564A316/A328：0.893A328/A328：1.000A340/A328：0.834A360/A328：0.3440.5550.9071.0000.8110.299

+0.009－0.0140+0.023+0.045

－－－－－=====第一步：選擇A

（A328或A328(校正)）A328(校正)=3.52(2A328-A316-A340)=3.52(2×0.663–0.592–0.553)=0.637A328(校正)–A328A328×100=0.637–0.6630.663×100=-3.92E1%1cm(328nm)=A328(校正)100ms/D=0.637100×0.1287/1250=61.87第二步：求供試品中維生素A效價(jià)=E1%1cm(328nm)×1900=61.87×1900=117553（IU/g）標(biāo)示量%=VA效價(jià)(IU/g)×每丸內(nèi)容物平均裝量(g/丸)標(biāo)示量(IU/丸)×100%=117553×0.0798510000×100%=93.9%第三步：求效價(jià)第四步：求標(biāo)示量%（二）HPLC法Ch.P（2010）UV：325nm；固定相：硅膠流動(dòng)相：正己烷-異丙醇（997︰3）外標(biāo)法計(jì)算λmax618nm～620nm標(biāo)準(zhǔn)曲線法注意呈色不穩(wěn)定（5~10s內(nèi)）水分干擾與標(biāo)準(zhǔn)曲線溫差≤1℃專屬性差三氯化銻有腐蝕性藍(lán)色+3SbCl

VA(三)三氯化銻比色法（食品或飼料中VA測定）練習(xí)

VA醋酸酯膠丸的含量測定：取內(nèi)容物39.1mg，加環(huán)己烷溶解并稀釋至100ml，在規(guī)定波長處測得的吸收度如下：nm300316328340360A0.3900.6070.6710.5500.224已知膠丸內(nèi)容物平均重量為0.08736g，每丸標(biāo)示量為3000IU。計(jì)算占標(biāo)示量的百分含量。氨基嘧啶環(huán)－CH2－噻唑環(huán)(季銨堿)第二節(jié)維生素B1的分析Cl-·HCl一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)1.溶解性（1）易溶于水（2）水溶液呈酸性2.UVPH=2時(shí)，λmax=246nm與生物堿↓→↓3.硫色素反應(yīng)嘧啶環(huán)——噻唑環(huán)——

5.氯化物的特性

VB1為鹽酸鹽，呈氯化物的反應(yīng)（鑒別）4.與生物堿沉淀劑的反應(yīng)VB1特有的專屬性反應(yīng)二、鑒別試驗(yàn)（一）硫色素反應(yīng)（異丁醇）H+H+H+（二）與生物沉淀劑反應(yīng)1PbSNaSVitBPb(NO3)2NaOH（三）與Pb2+反應(yīng)——S元素反應(yīng)（四）氯化物反應(yīng)（五）IR非水溶液滴定法(Non-aqueousTitrimetry)紫外分光光度法(UV)硫色素?zé)晒夥?Thiochrone

Fluoremetry)三、含量測定電位法指示終點(diǎn)（一）非水溶液滴定法伯胺、季銨基團(tuán)，反應(yīng)比例1：2。VB1分子量為337.27，所以HClO4滴定液（0.1mol/L）的滴定度（T）為16.86mg/mlChP

原料藥m:滴定液摩爾濃度（mol/L）M:被測藥物的分子量a：被測藥物摩爾數(shù)b：滴定液摩爾數(shù)滴定度——每1ml規(guī)定濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y藥物的質(zhì)量（mg）。Ch.P

片劑、注射劑=421標(biāo)示量%=規(guī)格g/片gWEA%cmD10011××%100標(biāo)示量平均片重××(二)

UV法0.1M鹽酸λmax=246nm片劑標(biāo)示量%=規(guī)格mg/mlmlV100%103標(biāo)示量稀釋倍數(shù)EA%cm10011××××注射劑（三）硫色素?zé)晒夥ǎ║SP）1.原理藍(lán)色熒光硫色素異丁醇鐵氰化鉀1VBNaOHλex365nm

λem435nm

硫色素反應(yīng)為VB1的專屬性反應(yīng)，在一定條件下形成的硫色素與VB1濃度成正比，可用于VB1及其制劑的含量測定。不受氧化破壞產(chǎn)物的干擾，測定結(jié)果較為準(zhǔn)確。

HgCl2和CNBr也可作為氧化劑。3.討論L－抗壞血酸一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)第三節(jié)維生素C的分析**內(nèi)酯結(jié)構(gòu)烯二醇結(jié)構(gòu)易溶于水，水溶液呈酸性1.溶解性2.酸性C3－OH的pKa=4.17C2－OH的pKa=11.57一元酸L(+)－抗壞血酸活性最強(qiáng)3.旋光性**4.還原性烯二醇結(jié)構(gòu)烯二醇結(jié)構(gòu)二酮基結(jié)構(gòu)有活性L-去氫抗壞血酸有活性L-二酮古洛糖無活性-2H+2HOH-(H+)H2O與堿反應(yīng)5.水解性Na2CO3△糖類的顯色反應(yīng)50℃結(jié)構(gòu)與糖類相似6.具糖的性質(zhì)7.UV

λmax243nm(稀HCl)，E1cm560，在中性或堿性條件下，紅移至265nm.1%（一）與AgNO3反應(yīng)二、鑒別試驗(yàn)（二）與2，6-二氯靛酚反應(yīng)氧化型玫瑰紅色

H+還原型藍(lán)色OH-

（玫瑰紅色）（無色）亞甲藍(lán)或高錳酸鉀試劑褪色

堿性酒石酸銅磚紅色沉淀

磷鉬酸鉬藍(lán)（四）糖類的反應(yīng)（三）其他氧化劑反應(yīng)（戊糖）(糠醛)-H2O50℃(吡咯)（藍(lán)色）H+（五）UV法0.01mol/LHClBP三、雜質(zhì)檢查（一）溶液顏色與澄清度檢查

分光光度法

1.原料：取VC3.0g，加水15ml，溶液應(yīng)澄清無色；如顯色，經(jīng)4號(hào)垂熔玻璃漏斗過濾，取濾液，測定A值，λ420nm，A≤0.03

2.片劑：λ440nm，A≤0.07

3.注射劑：λ420nm，A≤0.06（二）鐵、銅離子的檢查原料藥

原子吸收分光光度法1.鐵供試液B:VC5.0g+0.1mol/LHNO3→25ml供試液A:VC5.0g+1.0ml標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液＋0.1mol/LHNO3→25ml在248.3nm處測定吸光度，要求b＜（a－b）供試液B:VC2.0g+0.1mol/LHNO3→25ml供試液A:VC2.0g+1.0ml標(biāo)準(zhǔn)銅溶液＋0.1mol/LHNO3→25ml在324.8nm處測定吸光度，要求b＜（a－b）2.銅（三）草酸的檢查易與Ca2+作用形成沉淀比濁法指示劑淀粉指示液1.原理（一）碘量法四、含量測定H+

取本品約0.2g，精密稱定，加新沸過的冷水100ml與稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液顯藍(lán)色，在30秒內(nèi)不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于8.806mg的C6H8O62.方法（1）酸性環(huán)境（2）新沸冷H2O減慢VC被O2氧化速度（3）立即滴定

趕走水中O2減少O2的干擾3.注意事項(xiàng)（4）本法用于VC原料、片劑、泡騰片和注射劑的含量測定。（二）2，6-二氯靛酚滴定法1.原理酚亞胺2，6-二氯靛酚VC自身指示終點(diǎn)法2.方法（2）快速滴定（1）酸性環(huán)境HPO3-HAc

穩(wěn)定VitC

防止其他還原性物質(zhì)干擾（3）剩余比色測定

（定量過量）（測剩余染料）3.注意事項(xiàng)（4）不穩(wěn)定臨用前配制并標(biāo)定維生素D2123456789101112131415161718192021222324252627維生素D3第四節(jié)維生素D的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

開環(huán)的甾體：具有甾類化合物的顯色反應(yīng)，可用于鑒別。手性碳原子：具有旋光性，可用于鑒別。

多烯：可進(jìn)行紫外檢測。

1.性狀無色針狀結(jié)晶或白色結(jié)晶性粉末，遇光或空氣易變質(zhì)。2.溶解性易溶于三氯甲烷、乙醇、丙酮、乙醚等有機(jī)溶劑，不溶于水。3.不穩(wěn)定性多烯，易氧化變質(zhì)，對酸不穩(wěn)定。性質(zhì)4.旋光性

D26個(gè)手性碳，D35個(gè)手性碳5.顯色反應(yīng)三氯甲烷溶液與醋酐-硫酸反應(yīng)6.UV

無水乙醇溶液，λmax265nm

二、鑒別試驗(yàn)

1.顯色反應(yīng)醋酐--硫酸反應(yīng)D2

黃紅紫綠

D3

黃紅紫、藍(lán)綠綠三氯化銻反應(yīng)橙紅色漸變粉紅三氯化鐵反應(yīng)橙黃色二氯丙醇和乙酰氯反應(yīng)綠色2.比旋度鑒別維生素D2維生素D3溶劑

濃度比旋度值無水乙醇無水乙醇40mg/ml5mg/ml+102.5°～+107.5°+105°～+112°注意事項(xiàng)：應(yīng)于容器開啟30分鐘內(nèi)取樣，在溶液配制后30分鐘內(nèi)測定。

3.區(qū)別反應(yīng)：

以96%乙醇為溶劑，加乙醇和85%硫酸，D2顯紅色，在570nm處有最大吸收，D3顯黃色，在495nm處有最大吸收。4.其他方法

TLC、HPLC、制備衍生物測熔點(diǎn)苯并－二氫吡喃醇第五節(jié)維生素E的分析一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)名稱R1R2相對活性αβγδCH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1CH3COdl－α－生育酚醋酸酯2.水解性]O[醌型化合物△生育酚緘緘緘-+orOHHVitE雜質(zhì),需檢查性質(zhì)溶解性不溶于水，易溶于無水乙醇、丙酮、乙醚、石油醚等有機(jī)溶劑。乙?；姆恿u基4.UV

無水乙醇液λmax=284nm3.氧化性對氧敏感，易氧化氧化產(chǎn)物：α-生育醌、α-生育酚二聚體41.0-41.5（一）硝酸反應(yīng)橙紅色二、鑒別試驗(yàn)]O[生育紅75℃15′HNO3VitE生育酚HNO3（二）三氯化鐵反應(yīng)生育酚對-生育醌[O]血紅色取本品約10mg，加乙醇制KOH試液2ml，煮沸5min，放冷，加水4ml與乙醚10ml，振搖，靜置使分層；取乙醚液2ml，加2,2’-聯(lián)吡啶的乙醇溶液數(shù)滴和FeCl3的乙醇液數(shù)滴，應(yīng)顯血紅色。λmax=284nmλmin=

254nm0.01%無水乙醇中（三）UV法薄層板硅膠G展開劑環(huán)己烷-乙醚（4：1）顯色劑硫酸（105℃5′）VitE

Rf

=0.7-生育酚Rf

=0.5-生育醌Rf

=0.9（四）TLC法（五）其他方法

IR、GC（二）生育酚

三、雜