艾滋病的脂質(zhì)筏結(jié)構(gòu)課件展示

（優(yōu)選）艾滋病的脂質(zhì)筏結(jié)構(gòu)課件展示當前第1頁\共有20頁\編于星期六\10點簡介：脂質(zhì)成分的艾滋病病毒膜，像洗滌劑耐藥,是明顯不同于宿主細胞膜。這個成分,為艾滋病毒脂質(zhì)體關于在活細胞存在脂質(zhì)筏提供了強有力的證據(jù)。當前第2頁\共有20頁\編于星期六\10點1、LBPA是一種圓錐形的磷脂，這已被證明。在晚期核內(nèi)體，不能被大量的分光術測定。因為它不能與其同分異構(gòu)體——磷脂酰甘油明確的區(qū)分開來。2、鞘磷脂類和膽固醇的富集是DRM的特征。DRM的另一個標志是像酰膽堿之類的飽和脂類的富集。3、飽和的酰膽堿由在細胞膜中占18%增加到在病毒中占41%.4、在SM中未觀察到飽和脂HIV肪酸鏈的增長有明顯變化。5、在HIV-1細胞中有大量的DHSM（雙氫鏈霉菌）富集。當前第3頁\共有20頁\編于星期六\10點6、在HIV-1中，我們發(fā)現(xiàn)有一種不同尋常的鞘脂類DHSM富集，和SM相反，在DHSM的鞘氨醇鏈上沒有4.5反式雙鏈。當前第4頁\共有20頁\編于星期六\10點7、在病毒和細胞膜中主要的SM和DHSM是SMd18:1/16:0和DHSMd18:0/16:0,它們都包含氫胺化合物連接的十六酰基。當前第5頁\共有20頁\編于星期六\10點SM和DHSM樣品的定量是利用靈敏+PREC184掃描進行試驗的脂質(zhì)產(chǎn)生的乙酰膽堿片段離子在相對豐度上沒有差異，這種脂質(zhì)包含鞘氨醇或鞘氨醇骨架，脅迫SM樣本因此可用來對脂質(zhì)定量。當前第6頁\共有20頁\編于星期六\10點與細胞膜相比，SM和DHSM的主要樣本都高度富含病毒。在HIV-1(0.12比0.95)中，16:0_PC的摩爾比率增加了近8倍，而DHSM16:0_PC的摩爾比率由于一個因素增加了15倍（0.028比0.41），因此，HIV-1中SM的二氫樣品平均值比SM高，而Npalmitoyl-DHSM分子單獨包含約10%HIV-1磷脂總量，我們同時確定二氫氨基化合物作為一個DHSM潛在的前體，和dihydromonohexosylceramide一樣，但由于相對片段離子產(chǎn)量低，不能進行定量。當前第7頁\共有20頁\編于星期六\10點DHSM尚未作為HIV-1的元件被報道，因此，HIV-1膜中的鞘氨醇類的數(shù)據(jù)不可用并不奇怪。至今，DHSM被描述為一個僅在人晶體抽提物中的主要連續(xù)生物細胞膜，它包含了全部磷脂的50%。DHSM的功能目前還不知道。眼晶體富含膽固醇的細胞膜中的DHSM被認為在阻遏氧化和形成膽固醇晶體中起作用。對脂質(zhì)體和?；溒ヅ銼M和DHSM比較的生物物理研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)DHSM導致在較高的溶解溫度下更多有序膜形成，這是由于它極性小的特性。基于這些結(jié)果，DHSM被認為在側(cè)方濃縮有序液體膜區(qū)域具有膜組織者的功能，例如脂筏。當前第8頁\共有20頁\編于星期六\10點所以，在SM和富含膽固醇的HIV-1膜的量高可能影響到胞外病毒膜的有序和物理穩(wěn)定，也可能對阻遏氧化起作用。可以確定的是，富含HIV-1的pl-PE，可能對這種阻礙起作用，如已經(jīng)討論了的縮醛磷脂抗氧化作用。當前第9頁\共有20頁\編于星期六\10點抑制鞘磷脂的生物合成可減小HIV-1的感染性之前的研究已經(jīng)報道了在產(chǎn)HIV-1細胞或從細胞或病毒膜的膽固醇抽提物中對膽固醇的生化合成的抑制可導致病毒復制和感染的降低。為了測試鞘磷脂是否在HIV-1形成和感染有決定性作用，我們用煙曲霉毒素B1處理感染的MT-4細胞。FB1阻斷了鞘磷脂的重新合成，(阻礙dihydroceramide的合成,它是所有鞘磷脂的前體)，還有回收途徑。FB1處理的細胞中純化的HIV-1和PC相比表現(xiàn)出明顯的減小率，和預期的抑制劑效果一致。減小了19%(Cer)，30%(SMs)和54%(HC)，不同鞘氨醇被分別觀察到。當前第10頁\共有20頁\編于星期六\10點鞘氨醇的減少（在細胞膜也觀察到了，沒有顯示數(shù)據(jù)）對病毒的釋放沒有明顯影響在HIV-1感染中一個很強的影響被觀察到，無論如何，F(xiàn)相比未處理的細胞，B1處理的細胞釋放的HIV-1感染性是可再生的4倍。當前第11頁\共有20頁\編于星期六\10點所以，HIV-1膜中鞘氨醇的濃度對維持病毒感染表現(xiàn)出重要性，但不僅僅是對病毒生長必要的。我們的結(jié)果表明生物膜的脂質(zhì)組分的改變可能不僅局限在一個狹小的范圍，因為病毒鞘氨醇的部分減小導致HIV-1感染率明顯降低。關于脂質(zhì)組分細微的改變導致明顯功能的變化的結(jié)論之前已在囊泡運輸過程研究中被提出。接下來的實驗將關注于鞘氨醇及其衍生物脂質(zhì)與HIV-1感染相關損失的特有脂質(zhì)，和決定他們機制的活動。我們的FB1結(jié)果脂質(zhì)活性藥物在膜組成上有敏感的改變作用表明有潛力成為一種抗HIV的有效治療試劑。當前第12頁\共有20頁\編于星期六\10點未處理的HIV-1膜和DRM脂質(zhì)我們對HIV-1脂質(zhì)成分的分析生成一個與先前DRM類似報道的圖。因此，我們對MT-4MT-4細胞中的HIV-1andDRM進行了直接比較。DRM使用洗滌劑TritonX-100和Brij96準備好，與他們的溶解特異蛋白和脂質(zhì)不同的能力，TritonX-100更嚴格。片段經(jīng)過等差密度梯度離心用來分析有關DRM標記的flotillin和鐵轉(zhuǎn)運蛋白受體的貢獻，與DRM沒有聯(lián)系(圖.4a)。當前第13頁\共有20頁\編于星期六\10點在TritonX-100抽提物中，F(xiàn)lotillin受到Flotillin限制。而在梯度底部找到了鐵傳遞蛋白受體(片段7–9)，因此定義片段2為DRM片段。Brij96不是特別嚴格，對flotillin和鐵傳遞蛋白受體的有一個較廣的貢獻。圖4顯示SMs_PC在DRM中TritonX-100和Brij96處理的細胞顯著增加（相比細胞中脂質(zhì)），并且和未處理HIV-1脂質(zhì)是相似的。當前第14頁\共有20頁\編于星期六\10點A圖：鞘磷脂,二氫鞘磷脂,磷脂酰膽堿（PC）在病毒膜和抗去垢劑膜是由納米電噴霧電離串聯(lián)質(zhì)光譜法而形成的蛋白質(zhì)免疫印跡。(一)抗去垢劑膜從冷萃取的hiv-1感染帶有Tritonx–100（上)或96(低)MT-4的細胞中分析得到有筏(flotillin1)和無筏(轉(zhuǎn)鐵蛋白受體)標記分布。當前第15頁\共有20頁\編于星期六\10點B圖：鞘磷脂比磷脂酰膽堿在所有細胞膜中的比率C圖：SM與dhsm比PC在hiv與drm里的比率

D圖：從感染的MT-4細胞里分離出的（1條帶），從受感染細胞分離出的DRM（2-4），純凈HIV（5-7）用蛋白質(zhì)免疫印跡分析檢測flotillin和gp41。根據(jù)細胞編號，所獲得的細胞提取的數(shù)目是正常的。當前第16頁\共有20頁\編于星期六\10點HIV-1的脂質(zhì)成分觀察報告

與脂質(zhì)微觀（筏）猜測相似在五個方面：1.PC(富含飽和脂肪)2.PS（聚苯乙烯）3.PL-PE（聚乙烯）4.SM(膽固醇)5.DHSM(鞘脂類)

支撐的假設：HIV-1的病毒芽來自細胞的微薄膜。當前第17頁\共有20頁\編于星期六\10點表格2：HIV-1病毒的脂質(zhì)成分

平均每分子脂質(zhì)含病毒粒子PC(聚碳酸酯)26,000SM（苯乙烯）37,000DHSM（雙清鏈霉素）17,000PE（聚乙烯）13,000pl-PE44,000PS（聚苯乙烯）25,000Chol（膽固醇）134,000Cer（神經(jīng)酰胺）160HC600當前第18頁\共有20頁\編于星期六\10點材料和方法FB1（纖維蛋白原）和Brij96（聚氧乙烯脂肪醇醚96）溶血神經(jīng)鞘氨脂轉(zhuǎn)移磷脂酰和SM（苯乙烯）脂肪酸和TritonX-100當前