飲用水微生物檢測詳解演示文稿

飲用水微生物檢測詳解演示文稿當前第1頁\共有32頁\編于星期四\14點優(yōu)選飲用水微生物檢測演示文稿當前第2頁\共有32頁\編于星期四\14點微生物指標常規(guī)檢驗流程水樣總大腸菌群菌落總數(shù)報告報告陰耐熱大腸菌群或大腸埃希氏菌陽報告當前第3頁\共有32頁\編于星期四\14點實驗前準備1、滅菌吸管

10mL、1mL刻度吸管分別包好，160℃干烤2h滅菌2、9mL滅菌生理鹽水3、相應(yīng)的滅菌培養(yǎng)基4、檢驗前，無菌室用紫外線燈照射30min當前第4頁\共有32頁\編于星期四\14點菌落總數(shù)定義：是指水樣在營養(yǎng)瓊脂上有氧條件下37℃培養(yǎng)48h后，所得1mL水樣所含菌落的總數(shù)。培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂設(shè)備：放大鏡/菌落計數(shù)器當前第5頁\共有32頁\編于星期四\14點菌落總數(shù)平板計數(shù)法當前第6頁\共有32頁\編于星期四\14點總大腸菌群檢測方法多管發(fā)酵法濾膜法酶底物法當前第7頁\共有32頁\編于星期四\14點多管發(fā)酵法定義：總大腸菌群指一群在37℃培養(yǎng)24h能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽孢桿菌。培養(yǎng)基：乳糖蛋白胨培養(yǎng)液二倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液伊紅美藍培養(yǎng)基設(shè)備：顯微鏡當前第8頁\共有32頁\編于星期四\14點15管法檢測步驟在36℃下培養(yǎng)24h10ml水樣1ml水樣0.1ml水樣10ml雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液10ml單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液10ml單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液都不產(chǎn)酸產(chǎn)氣判陰性產(chǎn)酸產(chǎn)氣管EMB染色鏡檢乳糖蛋白胨培養(yǎng)液革蘭氏陰性無芽孢桿菌產(chǎn)酸產(chǎn)氣判總大腸菌群存在典型特征菌落在36℃下培養(yǎng)24h10ml雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液10ml單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液10ml單料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液都不產(chǎn)酸產(chǎn)氣產(chǎn)酸產(chǎn)氣管EMB染色鏡檢革蘭氏陰性無芽孢桿菌產(chǎn)酸產(chǎn)氣典型特征菌落當前第9頁\共有32頁\編于星期四\14點多管發(fā)酵法結(jié)果大腸菌群在伊紅美藍培養(yǎng)基上的典型菌落特征大腸菌群革蘭氏染色顯微鏡下的形態(tài)當前第10頁\共有32頁\編于星期四\14點當前第11頁\共有32頁\編于星期四\14點濾膜法定義：是指用孔徑為0.45μｍ的微孔濾膜過濾水樣，將濾膜貼在選擇性品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上37℃培養(yǎng)24h，能形成紫紅或紅色有金屬光澤的需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞桿菌。培養(yǎng)基品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基乳糖蛋白胨培養(yǎng)液設(shè)備：顯微鏡，過濾設(shè)備當前第12頁\共有32頁\編于星期四\14點檢測步驟過濾水樣：過濾設(shè)備顯色培養(yǎng)，染色鏡檢：24h復發(fā)酵：陽性接種，24h當前第13頁\共有32頁\編于星期四\14點當前第14頁\共有32頁\編于星期四\14點酶底物法

EnzymeSubstrateTest當前第15頁\共有32頁\編于星期四\14點常用的色原和熒光底物色原（熒光）糖苷結(jié)合物糖苷酶色原（熒光）氨基酸結(jié)合物氨基肽酶常用呈色的色原有：α、β萘酚，鄰位或?qū)ξ幌趸?，對硝基苯胺，酚酞?-氨4-硝基苯等，如ONPG(鄰硝基酚-B-D半乳糖苷)

常用的熒光物有：4-甲基傘形酮（4MU），7氨基4甲基傘形酮香豆素如MUG(四甲基傘形酮-B-D-葡萄糖苷)當前第16頁\共有32頁\編于星期四\14點總大腸菌群酶底物法定義：

在選擇性培養(yǎng)基上能產(chǎn)生β-半乳糖苷酶（β-D-galactosidase）分解ONPG（Ortho-nitrophenyl-β-D-galactopyranoside）使培養(yǎng)基呈黃色的細菌群組。培養(yǎng)基：

MMO-MUG培養(yǎng)基

設(shè)備：壓膜機當前第17頁\共有32頁\編于星期四\14點檢測步驟加樣：干粉培養(yǎng)基加入到100mL水樣中壓膜：專用壓膜機分裝培養(yǎng)：36±1℃的培養(yǎng)24h結(jié)果判讀：24h培養(yǎng)后顏色變成黃色判斷為陽性反應(yīng)；培養(yǎng)24h后判讀，為可疑陽性，可延長培養(yǎng)到28h判讀，超過28h之后出現(xiàn)的顏色反應(yīng)不作為陽性結(jié)果。當前第18頁\共有32頁\編于星期四\14點當前第19頁\共有32頁\編于星期四\14點總大腸菌群酶底物法檢測示意圖當前第20頁\共有32頁\編于星期四\14點耐熱大腸菌群檢測方法多管發(fā)酵法濾膜法當前第21頁\共有32頁\編于星期四\14點多管發(fā)酵法定義：用提高培養(yǎng)溫度的方法將自然環(huán)境中的大腸菌群與糞便中的大腸菌群區(qū)分開，在44.5℃仍能生長的大腸菌群，稱為耐熱大腸菌群。培養(yǎng)基：

EC培養(yǎng)基伊紅美藍瓊脂設(shè)備：無特殊設(shè)備當前第22頁\共有32頁\編于星期四\14點檢測步驟初發(fā)酵（同總大腸菌群），24h耐熱培養(yǎng)：陽性管接種，24h顯色培養(yǎng)：陽性管接種，24h當前第23頁\共有32頁\編于星期四\14點當前第24頁\共有32頁\編于星期四\14點濾膜法定義：

用孔徑為0.45μｍ的濾膜過濾水樣，細菌被阻留在膜上，將濾膜貼在MFC培養(yǎng)基上，44.5℃培養(yǎng)24h能形成藍色菌落的細菌為耐熱大腸菌群。培養(yǎng)基：MFC培養(yǎng)基EC培養(yǎng)基設(shè)備：過濾設(shè)備當前第25頁\共有32頁\編于星期四\14點當前第26頁\共有32頁\編于星期四\14點當前第27頁\共有32頁\編于星期四\14點大腸埃希氏菌檢測方法多管發(fā)酵法濾膜法酶底物法當前第28頁\共有32頁\編于星期四\14點多管發(fā)酵法定義：指多管發(fā)酵法總大腸菌群陽性，在EC-MUG培養(yǎng)基上44.5℃培養(yǎng)24±2h產(chǎn)生β-葡萄糖醛酸酶（β-glucuronidase），分解MUG（4-methyl-umbelliferyl-β-D-glucuronide）并產(chǎn)生熒光產(chǎn)物，使培養(yǎng)基在波長366nm紫外光下產(chǎn)生藍色熒光的細菌。

培養(yǎng)基：EC-MUG培養(yǎng)基設(shè)備：紫外燈：波長366nm當前第29頁\共有32頁\