糖的組織化學(xué)

糖的組織化學(xué)第一頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三糖的組織化學(xué)第二頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三糖的分類單糖和雙糖多糖：淀粉、纖維素、糖原粘液物質(zhì)（粘多糖）中性粘多糖酸性粘多糖糖蛋白粘蛋白氨基己糖>4%

糖蛋白氨基己糖<4%5.糖脂含有半乳糖,脂肪酸,神經(jīng)氨基醇第三頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三糖原第四頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三一.糖原的概念由多糖衍化而來，是天然存在于動(dòng)物組織內(nèi)的多糖分布：胞漿內(nèi)肝、心肌、骨骼肌同種葡萄糖的聚合物作為糖原染色的切片，必須冰凍或經(jīng)特殊固定液固定后進(jìn)行切片第五頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三二.固定劑的選用Carnoy（冷4℃）無水乙醇60ml防止糖原溶于水氯仿30ml增加滲透力冰醋酸10ml抵消乙醇對(duì)組織的收縮、硬脆作用*優(yōu)點(diǎn)：固定迅速，保存肝糖原

第六頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三2.Gendre（冷4℃）苦味酸無水乙醇飽和液80ml

甲醛15ml

冰醋酸5ml臨用前混合配制第七頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三3.Lillie固定液（AAF）無水乙醇85ml

冰醋酸5ml

甲醛10ml

固定液預(yù)冷4℃，固定24h后，95%乙醇脫水，包埋第八頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三三.固定中注意事項(xiàng)1.盡可能取小塊新鮮組織及時(shí)固定，不用水溶性固定液2.應(yīng)用含酒精的溶液作為固定液，但最好不單獨(dú)使用乙醇固定，以乙醇為溶劑的混合固定液固定為佳3.固定原理：使糖原與固定液之間相結(jié)合的蛋白質(zhì)凝固，糖原被周圍凝固的蛋白質(zhì)膜保護(hù)起來，第九頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三四.顯示糖原的方法1.碘染色

2.胭脂紅染色*3.過碘酸-Schiff反應(yīng)

4.銀浸染法第十頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三過碘酸-Schiff反應(yīng)Periodicacid-Schiff,PAS第十一頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三(一）染色原理過碘酸是一種強(qiáng)氧化劑，能氧化糖分子，使相鄰二個(gè)碳原子上的羥基（-OH）變?yōu)槿┗?COOH）第十二頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三Schiff氏試劑是付品紅（堿性品紅）經(jīng)SO2作用后，形成的無色溶液付品紅Schiff試劑第十三頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三當(dāng)Schiff氏試劑與醛基作用后，形成含有發(fā)色基團(tuán)的化合物，呈現(xiàn)紫紅色沉淀第十四頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三*PAS反應(yīng)的基本原理

1.通過過碘酸的氧化作用，將糖分子中的碳鍵打斷，游離出醛基

2.醛基與Schiff試劑反應(yīng)顯出紅色沉淀第十五頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三(二)染色步驟1.切片脫蠟至水2.1%過碘酸溶液內(nèi)氧化5-10min3.流水洗5min,再用蒸餾水洗4.用Schiff試劑處理10-20min5.流水洗10min6.復(fù)染(可用Mayer明礬蘇木素或甲基綠襯染細(xì)胞核)7.脫水、透明、封片第十六頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三切片經(jīng)二甲苯和各級(jí)酒精復(fù)水后，入0.5%的過碘酸溶液中作用15分鐘，取出后水洗。第十七頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三切片充分洗凈后入Schiff‘s試劑中進(jìn)行顯色。作用15分鐘左右，將切片取出水洗，為洗去非特異性著色，將切處理品入三級(jí)新配制的亞硫酸中進(jìn)行沖洗，取出后水洗，鏡檢。第十八頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三

肝糖原-PAS染色X200第十九頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三肝糖原-PAS+蘇木素復(fù)染X200第二十頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三【結(jié)果】

胞漿內(nèi)PAS陽性物質(zhì)呈紫紅色，顆粒狀或均質(zhì)團(tuán)塊狀，胞核呈藍(lán)色或綠色紅色深淺反應(yīng)含糖原量的多少【對(duì)照】

采用淀粉酶或唾液酶消化切片對(duì)照片PAS（-），未處理片（+）第二十一頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三PAS反應(yīng)陽性物質(zhì)物質(zhì)類別舉例染色強(qiáng)度多糖糖原強(qiáng)中性粘液物質(zhì)結(jié)腸杯狀細(xì)胞強(qiáng)某些酸性粘液物質(zhì)酸性非硫酸性含唾液粘多糖中基底膜腎小球基底膜中色素脂褐素中脂質(zhì)腦苷脂中淀粉樣物淀粉樣物弱軟骨軟骨弱真菌曲菌強(qiáng)腦垂體粘液樣細(xì)胞強(qiáng)第二十二頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三ThisnormalglomerulusisstainedwithPAStohighlightbasementmembranes.Thecapillaryloopsoftheglomerulusarewell-definedandthin.

第二十三頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三A888kidney11-PAS第二十四頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三A888kidney14-PAS第二十五頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三（三）PAS反應(yīng)的應(yīng)用證明與鑒別細(xì)胞內(nèi)空泡樣變性（水變性、脂肪變性、糖原）心肌病變及其它心血管疾病的診斷和研究糖原累積病的診斷及研究糖尿病的診斷及研究某些腫瘤的診斷與鑒別第二十六頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三肝細(xì)胞水變性第二十七頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三肝脂肪變性(石蠟切片)第二十八頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三肝脂肪變性(冰凍切片)脂肪特染：蘇丹III第二十九頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三糖原累積癥第三十頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三PAS（+）PAS（-）肝細(xì)胞癌膽管癌橫紋肌瘤顆粒細(xì)胞肌母細(xì)胞瘤

Ewing肉瘤骨的網(wǎng)織細(xì)胞肉瘤第三十一頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三（四）注意事項(xiàng)1.過碘酸溶液與Schiff試劑均可反復(fù)使用多次，用后密封放入冰箱4℃保存2.新鮮配成的溶液與應(yīng)用過的作用時(shí)間不同，剛配成的作用時(shí)間短，以后逐漸延長(zhǎng)3.過碘酸溶液在作用前應(yīng)與室溫接近，溫度太低，造成氧化不全，影響效果4.Schiff試劑如呈淡紅色，則應(yīng)棄去重配第三十二頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三5.Schiff試劑配法很多，區(qū)別不大，可以隨意選用6.Schiff試劑作用時(shí)，染色缸必須加蓋，不然Schiff試劑將因SO2消失而失效第三十三頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三Schiff試劑

堿性復(fù)紅1g1N鹽酸20ml

偏重亞硫酸鈉1g

重蒸餾水200ml第三十四頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三粘液物質(zhì)

(粘多糖)第三十五頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三

人體的各種腺體及其他許多組織、細(xì)胞，如結(jié)締組織、纖維母細(xì)胞、軟骨基質(zhì)等都能合成和分泌粘液物質(zhì)，統(tǒng)稱為粘多糖或粘液第三十六頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三分類中性粘多糖酸性粘多糖

1.硫酸化粘液物質(zhì)結(jié)締組織（強(qiáng)）上皮（弱）

2.非硫酸化粘液物質(zhì)含己糖醛酸的結(jié)締組織粘液物質(zhì)含唾液酸的上皮粘液物質(zhì)第三十七頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三粘液物質(zhì)染色在診斷中的應(yīng)用用于一般粘液性病變的觀察腫瘤的診斷與研究：用顯示粘液的染色方法進(jìn)行觀察和鑒別第三十八頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三胃粘膜上皮分泌中性粘液，而胃腸上皮化生或腸型胃癌細(xì)胞分泌酸性粘液

--AB-PAS染色區(qū)分中性與酸性粘多糖酸性粘多糖含有硫酸基團(tuán)和羧基。用陽離子染料與酸性基團(tuán)結(jié)合形成鹽鍵而顯色。利用染液不同的PH值及不同的電解質(zhì)濃度，可以區(qū)別酸性粘多糖的二種基團(tuán)

--HID-AB法第三十九頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三不同PH的競(jìng)爭(zhēng)性抑制

PH2.5時(shí)，二種酸性粘多糖均被奧藍(lán)著色

PH1.0時(shí)，僅硫酸粘多糖著色第四十頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三2.電解質(zhì)濃度與粘液物質(zhì)著色的關(guān)系MgCl2濃度顯示物

0.06M羧酸和硫酸化粘液

0.3M弱和強(qiáng)硫酸化粘液

0.5M強(qiáng)硫酸化粘液

0.7M強(qiáng)硫酸化結(jié)締組織粘液

0.9M硫酸角質(zhì)第四十一頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三顯示糖分子和酸性基團(tuán)的

組化方法第四十二頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三1.奧藍(lán)-過碘酸Schiff氏法（AB-PAS）【目的】鑒別胃粘液（中性粘多糖）和腸粘液（酸性粘多糖）；對(duì)鑒定腸上皮化生有一定意義第四十三頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三【染色原理】

奧藍(lán)是一種水溶性氰化亞鈦銅鹽，帶有陽電荷，與組織中的酸根結(jié)合形成鹽鍵。

AB-PAS法：首先酸性粘多糖為奧藍(lán)染色，不再與PAS發(fā)生反應(yīng)；僅中性粘多糖為PAS陽性第四十四頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三【染色步驟】1.石蠟切片脫蠟至水，蒸餾水洗2.1%奧藍(lán)的醋酸（3%）液染30分鐘（PH約2.5）3.蒸餾水洗4.1%過碘酸液氧化5-10min5.蒸餾水洗6.Schiff試劑作用10-30min7.流水洗10min8.脫水，透明，封片第四十五頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三Alcinblue染色液：奧藍(lán)1g，蒸餾水97ml，冰醋酸3ml

臨用前過濾使用，調(diào)節(jié)PH2.5-3之間【結(jié)果】

中性粘多糖（胃粘液）呈紅色，酸性粘多糖（腸粘液）呈藍(lán)色，酸性和中性混合粘液呈紫紅色第四十六頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三

AB-PASX100第四十七頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三AB-PASX200第四十八頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三2.高鐵雙胺-奧藍(lán)法（HID-AB）法【目的】

主要用于鑒別硫酸化粘多糖和唾液酸粘多糖，對(duì)確定腸化生類型有一定價(jià)值正常胃粘膜上皮，十二指腸腺——中性粘液小腸——氮乙酰化唾液酸粘液大腸——氧乙?；僖核嵴骋汉土蛩嵴骋旱谒氖彭?，共五十五頁，編輯于2023年，星期三腸型胃癌唾液酸粘液

硫酸粘液

彌漫型胃癌中性粘液

高分化腺癌硫酸粘液

中低分化腺癌唾液酸粘液

大腸型化生硫酸粘液

小腸型化生不含硫酸粘液第五十頁，共五十五頁，編輯于2023年，星期三高鐵雙胺染液N，N-二甲基-間-苯二胺二鹽酸鹽