邴飛虹抗炎免疫藥物的研究進展課件

既往觀點認為,炎癥與免疫是疾病過程中兩個獨立的過程,我國學者近年提出,炎癥與免疫是疾病的兩個側面,相互重疊不可分割

由此提出抗炎免疫藥理學的新觀點。根據(jù)這一觀點把抗炎免疫藥物重新劃分為:非甾體類抗炎免疫藥(Non-steroidalanti-inflammatoryimmunitydrugs,NSAIDs)、甾體類抗炎免疫藥(Steroidalanti-inflammatoryimmunitydrugs,SAIDs)和疾病調修藥(Diseasemodifyingdrugs,DMDs)1NSAIDs的研究進展

NSAIDs的臨床應用非常廣泛。它能有效減輕炎癥性疾病的癥狀與體征。迄今為止仍是全球使用最多的藥物之一。傳統(tǒng)的此類藥物包括水楊酸類、丙酸類、乙酸類、滅酸類、喜康類和吡唑酮類等。作用機制為抑制前列腺素(PG)合成。因為PG具有擴張血管、促進炎性介質滲出、產(chǎn)生或增敏痛覺等作用

PG在慢性炎癥反應中有致炎與抗炎的雙重作用。生理條件下的PG能保護胃黏膜、擴張腎血管。因此NSAIDs在應用中難免出現(xiàn)治標不治本,不良反應多的弊端。目前研究的NSAIDs以不抑制PG合成,而主要影響PG致炎作用為目標。PG還是環(huán)氧酶(COX)的主要代謝產(chǎn)物

當COX途徑受到抑制后,脂氧酶活性相應增加,導致其代謝產(chǎn)物白三烯增加,而后者也是一類重要的炎癥介質,與PG有協(xié)同作用。理想的NSAIDs應該對PG和白三烯的致炎作用有雙重拮抗作用。現(xiàn)已進入臨床試驗階段的此類藥物有替尼達喜(tenidap),苯惡洛酚等

鑒于療效相近的NSAIDs常常具有不同的副作用,而對乙酰氨基酚有解熱鎮(zhèn)痛作用,卻無抗炎作用。經(jīng)過基礎與臨床的大量實驗,最終發(fā)現(xiàn)COX的重要亞型COX-2在藥物作用的特性及炎癥產(chǎn)生過程中起著重要作用

COX-2一般很少在正常組織表達,這是因為內源性皮質激素對其發(fā)揮著抑制效應。當炎癥發(fā)生時,COX-2在炎癥組織中高度表達,而且表達水平與炎癥程度密切相關,有學者提出COX-2屬于誘導性表達,因此也稱誘生性環(huán)氧酶。大量COX-2選擇性抑制劑由此不斷推出(如二芳香吡唑類、二芳香咪唑類、庚烯類、環(huán)戊烯類等)COX1和COX2的特性比較COX1COX2生成

存在于正常組織經(jīng)細胞誘導，存在于受損傷組織

功能催化合成PGE2、PGI2有穩(wěn)定和保護細胞的作用催化合成PGE2、PGI2是原炎性，具有強烈的致炎、致痛作用

FDA批準的第一個COX-2特異性抑制劑是三環(huán)類化合物塞來昔布(celecoxib),該藥于1998年上市。隨之而來的是羅非昔布等“昔布類”(coxibs)藥物的不斷涌現(xiàn)。但臨床應用實踐證明該類藥物療效并不比傳統(tǒng)NSAIDs樂觀,同時仍具許多不良反應(ADR)

普遍認為COX-2特異性抑制劑比萘普生、雙氯酚酸好,但不比尼美舒利和布洛芬等傳統(tǒng)NSAIDs好。COX-2特異抑制劑的利與弊提示體內參與炎癥與免疫反應的COX系列還可能存在更多亞型。另一類NSAIDs是一氧化氮釋放型NSAIDs。這類藥物是基于一氧化氮(NO)藥理學研究的基礎,根據(jù)拼合原理發(fā)展起來

硝酸酯類、亞硝酸鹽類、S巰基谷胱甘肽都是NO適宜的供體,與阿司匹林等傳統(tǒng)NSAIDs結合,進入體內后釋放出NO和NSAIDs。其中NSAIDs可在體內通過抑制COX活性發(fā)揮抗炎作用,而NO通過抑制噬中性粒細胞聚集、增加黏膜血流量促進黏液分泌,減少自由基產(chǎn)生等,在胃腸道起到PG相同的胃腸黏膜保護作用,從而減少傳統(tǒng)NSAIDs的胃腸道ADR

例如:NO-雙氯滅痛、NO-Asprin等都顯示良好的抗炎作用。無論小劑量短期給藥還是連續(xù)給藥,這些NO釋放型衍生物都能有效降低胃腸道副作用,甚至對用藥前已存在的潰瘍也有一定愈合作用

研究表明,NSAIDs的臨床應用也在拓展。除具有良好抗炎、解熱和鎮(zhèn)痛作用,用于各種炎性疾病如類風濕性關節(jié)炎、軟組織風濕癥、骨關節(jié)炎以外,還發(fā)現(xiàn)該類藥物對腫瘤、阿爾茨海默病、血栓性疾病等療效顯著。隨著研究的不斷深入,COX-2特異性抑制劑和NO釋放型NSAIDs是未來NSAIDs類的主要代表藥物2SAIDsSAIDs具有強大的抗炎作用和一定的免疫抑制作用。它能阻止炎癥細胞向炎癥部位集中、抑制炎性因子釋放,抑制淋巴細胞的增殖與分化。由于SAIDs嚴重的不良反應,臨床一般不用于輕癥的炎癥免疫性疾病的常規(guī)治療,但是治療嚴重的炎癥免疫性疾病(如多發(fā)性肌炎、皮肌炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、危重感染、病情急劇惡化、急癥危象)的首選藥物

近年國內外學者對采用低劑量糖皮質激素治療風濕性關節(jié)炎(RA)的安全性給予重新評價,發(fā)現(xiàn)低劑量糖皮質激素治療RA時很少引起嚴重ADR(如骨質疏松),而SARS治療中,大劑量超常規(guī)劑量使用糖皮質激素可能會帶來較嚴重ADR的事實,均說明適量應用SAIDs對降低ADR的積極意義既往觀點認為,炎癥與免疫是疾病過程中兩個獨立的過程,我國學者近年提出,炎癥與免疫是疾病的兩個側面,相互重疊不可分割因為PG具有擴張血管、促進炎性介質滲出、產(chǎn)生或增敏痛覺等作用(1)鼠白血病病毒模型MULV/MAIDs系統(tǒng)只能用于評價那些作用于反轉錄病毒共同基因的藥物。其主要原因是炎癥免疫調節(jié)網(wǎng)絡的復雜性,現(xiàn)行的抗炎免疫藥理方法尚難以確切地評價其療效MS是一中樞神經(jīng)系統(tǒng)的自身免疫性疾病,是體內CD4細胞對自身抗原一種免疫反應,主要的自身抗原包括MBP或MBP的多肽片段、含脂蛋白(proteinlipidprotein,PLP)等在動物小鼠、大鼠及豚鼠均能誘發(fā)成功隨著我國器官移植外科學的發(fā)展,器官移植手術在我國較大醫(yī)院已相當普及。5%Pcl的橄欖油溶液肝穿刺攻擊,18h后模型組血清轉氨酶顯著上升,肝組織壞死,炎性細胞浸潤,甚至浸及整個肝臟近年來,有關艾滋病動物模型的研究取得了一些進展。PG在慢性炎癥反應中有致炎與抗炎的雙重作用。1NSAIDs的研究進展此種動物模型的發(fā)病機理、臨床體征及組織病理與人類格林巴利綜合征(GBS)相似,因此,EAN作為GBS的動物模型已被國際所公認并廣為應用抗炎免疫藥理學是藥理學一門新的分支學科,其主要研究的目的是探討抗炎免疫藥物的作用,作用機制及作用的規(guī)律性,尋找防治炎癥免疫功能紊亂性疾病的有效藥物,從而有助于揭示炎癥免疫功能紊亂性疾病的病因和病理機制BXSB小鼠是(C57BL/6JXSB/bLe)F1,其H-2單倍型為H-2b,可出現(xiàn)T、B細胞異常增生,胸腺萎縮,亦可產(chǎn)生大量自身抗體及免疫復合性腎炎,后期可并發(fā)嚴重關節(jié)炎。5%Pcl的橄欖油溶液肝穿刺攻擊,18h后模型組血清轉氨酶顯著上升,肝組織壞死,炎性細胞浸潤,甚至浸及整個肝臟粘膜耐受(MT)是指粘膜通過口服或鼻腔吸入等途徑接觸蛋白質抗原后,再用此種蛋白進行粘膜外免疫,引起的一種系統(tǒng)低反應狀態(tài)。通過口服Ⅱ型膠原可以明顯抑制由Ⅱ型膠原誘導的大鼠或小鼠的關節(jié)炎;口服MBP可以對MBP誘導Lewis大鼠和SJL小鼠的EAE發(fā)揮明顯治療作用,通過口服耐受治療其他免疫功能紊亂性疾病的研究正在國內外許多實驗室進行,而且走在逐步應用臨床。理想的NSAIDs應該對PG和白三烯的致炎作用有雙重拮抗作用。當今抗炎免疫藥理學的研究在生物醫(yī)學領域里,既是熱點所在,亦面臨著巨大的戰(zhàn),相信在未來的發(fā)展中將會有新的突破除具有良好抗炎、解熱和鎮(zhèn)痛作用,用于各種炎性疾病如類風濕性關節(jié)炎、軟組織風濕癥、骨關節(jié)炎以外,還發(fā)現(xiàn)該類藥物對腫瘤、阿爾茨海默病、血栓性疾病等療效顯著。

近有采用糖皮質激素“脈沖”療法(pulsedcorticostereids)治療RA患者,雖療效不盡統(tǒng)一,但無明顯藥物ADR,對骨代謝只有短暫的抑制,不會引起骨質疏松。所以有學者建議這種“脈沖”療法可用于嚴重RA病情加劇或新的SAIDs應用之前（用小劑量脈沖療法，即每周1次，第一周2．5—5毫克，以后每周增加2．5毫克，至每周10—15毫克。）

小劑量SAIDs不僅具有免疫抑制作用,還有免疫調節(jié)作用。臨床上聯(lián)合應用生理劑量SAIDs和其他藥物,可以提高內源性防御機制,既能發(fā)揮抗炎作用,還能抵抗細胞自身免疫反應,這是治療RA的一種切實可行的方法

SAIDs治療RA的適應證可能有:①抗炎:若應用NSAID不能緩解RA的疼痛、晨僵、疲勞等癥狀,或患者對NSAID不能耐受,可以考慮應用低劑量SAIDs(如潑尼松);②介導疾病調修藥作用:開始治療RA時采用短期大劑量SAIDs,減量后配合應用DMDs;③特殊適應證:SAIDs是孕期和哺乳期RA最安全的抗炎藥。有輕度腎衰、老年人、胃腸病患者,使用小劑量SAIDs比NSAIDs好;④RA的特殊類型,如風濕性關節(jié)炎/風濕性肌痛重疊綜合征

一些用于治療炎癥免疫性疾病的外用劑型相繼被開發(fā)。如潑尼松尼酸酯局部外用治療類風濕炎療效較好,且ADR很少發(fā)生。局部用藥無或少有全身用藥的嚴重ADR,因此開發(fā)外用劑型仍是今后SAIDs發(fā)展的方向之一3DMDs研究進展疾病調修藥(DMDs)包括免疫抑制藥、免疫增強藥和免疫調節(jié)藥三種。環(huán)孢素A的發(fā)現(xiàn)使得免疫抑制藥進入了新階段。早期免疫抑制藥臨床多用于抗腫瘤,主要是利用此類藥物能夠抑制生長旺盛的細胞,也包括免疫細胞。選擇性不高

環(huán)孢素A對T淋巴細胞依賴性免疫反應有選擇性抑制作用,可用于抑制器官移植后的排斥反應,同時也能用于炎癥免疫性疾病如RA,原發(fā)性腎小球疾病和支氣管哮喘。另一種從鏈霉菌發(fā)酵物提取出來的活性成分他羅利姆(FK506),其免疫抑制作用強度是環(huán)孢素A的10~100倍

與FK506結構相似的雷帕霉素在體內外均具有抗免疫活性。最近發(fā)現(xiàn)某些廣譜抗生素,如四環(huán)素和小諾霉素也有抗炎和免疫調節(jié)作用,對類風濕有一定療效,可能會有新的應用前景

免疫增強藥可通過不同途徑增強機體免疫功能。如胞肽(romuride)是一種比胞壁酰二肽具有更強免疫活性的免疫增強藥?？梢约せ罹奘杉毎T導單核因子,刺激造血活性,使外周血白細胞和血小板增高,還能刺激補體生成,發(fā)揮非特異性抗感染作用

臨床用于恢復一種結構類似左旋咪唑的tilomisole,能促進淋巴細胞恢復和增殖,提高IL-2,INF的產(chǎn)生,可適用于治療RA

免疫調節(jié)藥具有抗炎和雙向免疫調節(jié)作用。除一些已上市的免疫球蛋白外,值得注意的是許多中草藥具有抗炎和免疫調節(jié)作用。這些藥物的主要成分包括多糖、苷類和生物堿等。多糖類藥物如黃芪多糖、人參多糖、枸杞多糖、靈芝多糖、銀耳多糖、香菇多糖、豬苓多糖和云芝多糖等,均有良好的免疫調節(jié)作用PG在慢性炎癥反應中有致炎與抗炎的雙重作用?，F(xiàn)已進入臨床試驗階段的此類藥物有替尼達喜(tenidap),苯惡洛酚等但臨床應用實踐證明該類藥物療效并不比傳統(tǒng)NSAIDs樂觀,同時仍具許多不良反應(ADR)自六十年代起,國內外學者逐漸建立一系列SLE病理模型,包括自發(fā)性和實驗性兩類粘膜耐受的機制較為復雜。上述模型的建立,為肝損傷的機制及藥效評價開辟了新的途徑,但仍與病毒性肝炎免疫損傷所致的纖維化模型有相當大的差異。多糖類藥物如黃芪多糖、人參多糖、枸杞多糖、靈芝多糖、銀耳多糖、香菇多糖、豬苓多糖和云芝多糖等,均有良好的免疫調節(jié)作用通過口服Ⅱ型膠原可以明顯抑制由Ⅱ型膠原誘導的大鼠或小鼠的關節(jié)炎;口服MBP可以對MBP誘導Lewis大鼠和SJL小鼠的EAE發(fā)揮明顯治療作用,通過口服耐受治療其他免疫功能紊亂性疾病的研究正在國內外許多實驗室進行,而且走在逐步應用臨床。PG在慢性炎癥反應中有致炎與抗炎的雙重作用。因為PG具有擴張血管、促進炎性介質滲出、產(chǎn)生或增敏痛覺等作用主要動物為Lewis大鼠或兔。環(huán)孢素A的發(fā)現(xiàn)使得免疫抑制藥進入了新階段。一般可在嚙齒類動物和靈長類動物中產(chǎn)生。如潑尼松尼酸酯局部外用治療類風濕炎療效較好,且ADR很少發(fā)生。Ⅱ型膠原關節(jié)炎(collagentypeⅡinducedarthritis,CⅡA)是Trentham等1977年首次建立的實驗性關節(jié)炎模型。近年來,先后建立了用異種血清,包括豬、牛、馬血清,異體蛋白,包括豬白蛋白、血清球蛋白、人丙種球蛋白、人血白蛋白,卡介苗BCG+LPS注射制作免疫肝纖維化病理模型近年來,有關艾滋病動物模型的研究取得了一些進展。COX1COX2生理條件下的PG能保護胃黏膜、擴張腎血管。CⅡA與AA有許多相似之處,但在免疫指標上也有不同

與化療藥物配合使用可增加抗腫瘤效果,并能部分對抗化療藥物對正常淋巴細胞增殖的抑制作用,因此可用于一些免疫功能低下或腫瘤的輔助治療。苷類藥物如白芍總苷、人參總苷、黃芪甲苷、雷公藤多苷、三七總皂苷,也能發(fā)揮抗炎和免疫調節(jié)作用,特別是白芍總苷對RA有顯著療效,已獲國家新藥證書并進入臨床使用

生物堿類藥物包括苦豆堿川烏總堿槐果堿雷公藤新堿,表現(xiàn)抗炎和免疫抑制作用。雖目前上市品種較少,但進入臨床研究的為數(shù)不少,相信會是一類有前途的植物來源DMDs抗炎免疫藥理實驗方法學的某些進展

抗炎免疫藥理學是藥理學一門新的分支學科,其主要研究的目的是探討抗炎免疫藥物的作用,作用機制及作用的規(guī)律性,尋找防治炎癥免疫功能紊亂性疾病的有效藥物,從而有助于揭示炎癥免疫功能紊亂性疾病的病因和病理機制

隨著免疫學、分子生物學、病理學等相關學科的迅速發(fā)展,抗炎免疫藥理學領域的研究十分活躍,涉及面很廣,研究內容越來越豐富,而多學科的相互滲透,使抗炎免疫藥理實驗方法學有了較大的進展,這無疑對抗炎免疫藥理學的發(fā)展起了積極的推動作用

從整體動物模型和細胞分子水平兩個方面,就近年來該領域的實驗方法學中的某些主要進展1關節(jié)炎動物模型大鼠佐劑性關節(jié)炎(adjuvantarthritis)模型是一種T細胞介導的自身免疫性疾病模型,是研究抗炎免疫藥物及治療人類風濕性關節(jié)炎藥物的理想的動物模型,已普遍受到人們的重視

實驗提示,AA免疫反應高峰期脊髓背角及背根神經(jīng)節(jié)P物質(substanceP,SP)含量增多,耗竭脊髓背角SP,細胞免疫功能更為亢進,AA病情加重,人為增加脊髓背角SP含量,AA大鼠免疫水平降低。推測AA大鼠免疫反應的同時也刺激了含SP的感覺神經(jīng)末梢,使脊髓背角SP含量增多,通過未知通路向高級中樞神經(jīng)傳遞信息,整合后產(chǎn)生某種反饋抑制,作用于免疫系統(tǒng),使之不致于反應過強,而起到一定的自身保護作用

提示免疫調節(jié)肽SP,特別是脊髓背角SP參與AA鼠免疫系統(tǒng)的調節(jié)。為從神經(jīng)免疫調節(jié)探討AA以及多種自身免疫性疾病的發(fā)病機理,開發(fā)新型抗炎免疫藥物提供了新思路Ⅱ型膠原關節(jié)炎(collagentypeⅡinducedarthritis,CⅡA)是Trentham等1977年首次建立的實驗性關節(jié)炎模型。1980年代至90年代初期,國外大量重復,并在臨床表現(xiàn)、病理組織學和免疫學等方面進行了廣泛深入的研究使其不斷成熟和完善抗炎免疫藥理學主要研究藥物對炎癥和免疫功能的作用及其機制,為炎癥免疫性疾病的藥物治療提供理論基礎近年來,有關艾滋病動物模型的研究取得了一些進展。粘膜耐受(MT)是指粘膜通過口服或鼻腔吸入等途徑接觸蛋白質抗原后,再用此種蛋白進行粘膜外免疫,引起的一種系統(tǒng)低反應狀態(tài)。相對來說,移植免疫的動物模型研究相對滯后,研究開發(fā)免疫抑制藥物對移植免疫動物模型的影響相對較少此種動物模型的發(fā)病機理、臨床體征及組織病理與人類格林巴利綜合征(GBS)相似,因此,EAN作為GBS的動物模型已被國際所公認并廣為應用NSAIDs的臨床應用非常廣泛?？梢约せ罹奘杉毎T導單核因子,刺激造血活性,使外周血白細胞和血小板增高,還能刺激補體生成,發(fā)揮非特異性抗感染作用此外,細胞凋亡、氧化應激、tau過度磷酸化等均可能是AD的發(fā)病機制已明確中樞神經(jīng)脫髓鞘引起多發(fā)性硬化(multiplesclerosis,MS)及周圍神經(jīng)脫髓鞘病格林-巴利綜合癥(GBS)等疾病與免疫功能有關迄今為止仍是全球使用最多的藥物之一。由于SAIDs嚴重的不良反應,臨床一般不用于輕癥的炎癥免疫性疾病的常規(guī)治療,但是治療嚴重的炎癥免疫性疾病(如多發(fā)性肌炎、皮肌炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、危重感染、病情急劇惡化、急癥危象)的首選藥物生理條件下的PG能保護胃黏膜、擴張腎血管。近年來,有關艾滋病動物模型的研究取得了一些進展。3)多種方法、多項指標綜合評價多糖類藥物如黃芪多糖、人參多糖、枸杞多糖、靈芝多糖、銀耳多糖、香菇多糖、豬苓多糖和云芝多糖等,均有良好的免疫調節(jié)作用(2)實驗性變態(tài)反應性神經(jīng)炎模型(EAN)MAIDs模型具有易建立、重復性好、安全周期短,不需特殊實驗,不造成生物災害等特點,作為篩選抗反轉錄病毒藥物和免疫調節(jié)劑的模型具有明顯的優(yōu)勢,但MULV雖攜帶反轉錄病毒所具有gag、pol、env等共同基因,沒有HIV-1所特有的nef等調節(jié)基因為模擬臨床肝炎的細胞免疫病理過程,采用1%2,4,6-三硝基苯基Picrylchloriele(Pcl)乙醇溶液腹部涂藥致敏,再用0.除具有良好抗炎、解熱和鎮(zhèn)痛作用,用于各種炎性疾病如類風濕性關節(jié)炎、軟組織風濕癥、骨關節(jié)炎以外,還發(fā)現(xiàn)該類藥物對腫瘤、阿爾茨海默病、血栓性疾病等療效顯著。5%Pcl的橄欖油溶液肝穿刺攻擊,18h后模型組血清轉氨酶顯著上升,肝組織壞死,炎性細胞浸潤,甚至浸及整個肝臟

雞、小牛、大鼠的Ⅱ型膠原均能引起關節(jié)炎。一般可在嚙齒類動物和靈長類動物中產(chǎn)生。本所先后用小鼠、大鼠成功地建立了CⅡA模型。CⅡA與AA有許多相似之處,但在免疫指標上也有不同

CⅡA的免疫功能變化兼有體液免疫和細胞免疫,動物體內存在針對自身CⅡ的高滴度IgG抗體,這些特性更接近人的類風濕性關節(jié)炎,因治此是篩選和研究治療類風濕性關節(jié)炎藥物的理想模型,為今后研究人類與自身免疫有關的疾病提供了一個極有價值的實驗模型2系統(tǒng)性紅斑狼瘡動物模型系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種病因未明,累及多個系統(tǒng),病程遷延反復的自身免疫性疾病。多年來,理想的動物模型的缺乏一直是影響SLE研究的主要原因。自六十年代起,國內外學者逐漸建立一系列SLE病理模型,包括自發(fā)性和實驗性兩類(1)自發(fā)性模型:

主要包括三種品系小鼠:

NZB/NZWF1(B/W)、MRL/MP-lpr(MRL-lpr)和BXSB。NZB/NZWF1小鼠是NZB與NZW小鼠的雜交子代,可自發(fā)性出現(xiàn)免疫異常,主要表現(xiàn)為,T、B細胞的過早發(fā)育與成熟,B細胞多克隆激活,抗核抗體出現(xiàn)及免疫復合物性腎炎

MRL-Lpr小鼠的基因組合75%來自LG,13%來自AKR,12%為C3H,0.3%為C57BL/6,H-2單倍型為H-2K。該鼠能自發(fā)性形成免疫復合物性腎炎,血清中有大量的抗核抗體,淋巴組織高度增生

BXSB小鼠是(C57BL/6JXSB/bLe)F1,其H-2單倍型為H-2b,可出現(xiàn)T、B細胞異常增生,胸腺萎縮,亦可產(chǎn)生大量自身抗體及免疫復合性腎炎,后期可并發(fā)嚴重關節(jié)炎。這些小鼠的共同特征是自發(fā)性出現(xiàn)一些類似于人SLE的癥狀及免疫學異常,T細胞亞群在免疫功能紊亂中起重要作用。但這些模型發(fā)病較晚、周期長,不易控制實驗過程(2)實驗誘導SLE動物模型:主要包括同種異體淋巴細胞誘導的小鼠SLE模型,空腸彎曲菌誘導的小鼠SLE模型、pristerne誘導小鼠SLE模型以及肽類及人抗DNA獨特抗體誘導的SLE模型。這些模型共同的特點是:自身抗體出現(xiàn)較早,一般在再次免疫1~4周內,1~2月內基本出現(xiàn)免疫復合物性腎炎等多器官慢性炎癥表現(xiàn),實驗方法相對簡單,而各模型各有特色

盡管上述模型與人類SLE還存在不少差距,但多種模型相互結合,為從不同側面研究SLE的病理機制提供新途徑。分別采用空腸彎曲菌CJ-S131和Pristane成功地建立SLE小鼠模型,并初步探討了免疫調節(jié)藥白芍總甙和褪黑素對SLE小鼠的雙向免疫調節(jié)作用3免疫性肝損傷模型對肝臟疾病的病理過程仍缺乏足夠的認識。但肝內免疫反應已被公認為造成肝損傷的重要機制之一。朱凡凡采用刀豆蛋白A(ConA)和2'-去氧鳥苷改變小鼠免疫狀態(tài),再用同系小鼠肝細胞膜特異性脂蛋白(LSP)免疫小鼠,誘導小鼠自身免疫性肝炎模型

采用異品系小鼠LSP并在免疫LSP的同時輔以弗氏完全佐劑(FCA),使血清谷丙轉氨酶SGPT和LSP抗體滴度顯著升高。近年來,先后建立了用異種血清,包括豬、牛、馬血清,異體蛋白,包括豬白蛋白、血清球蛋白、人丙種球蛋白、人血白蛋白,卡介苗BCG+LPS注射制作免疫肝纖維化病理模型常用的評價艾滋病治療藥物的鼠模型主要有它能阻止炎癥細胞向炎癥部位集中、抑制炎性因子釋放,抑制淋巴細胞的增殖與分化。提示免疫調節(jié)肽SP,特別是脊髓背角SP參與AA鼠免疫系統(tǒng)的調節(jié)。CⅡA與AA有許多相似之處,但在免疫指標上也有不同(1)鼠白血病病毒模型它能有效減輕炎癥性疾病的癥狀與體征。采用異品系小鼠LSP并在免疫LSP的同時輔以弗氏完全佐劑(FCA),使血清谷丙轉氨酶SGPT和LSP抗體滴度顯著升高。因為PG具有擴張血管、促進炎性介質滲出、產(chǎn)生或增敏痛覺等作用既往觀點認為,炎癥與免疫是疾病過程中兩個獨立的過程,我國學者近年提出,炎癥與免疫是疾病的兩個側面,相互重疊不可分割開展藥物對器官移植免疫動物模型機理的研究,對提高我國移植外科醫(yī)生的臨床用藥水平,發(fā)展我國自已的免疫抑制藥物,尤其從中草藥中開發(fā)新型的免疫抑制具有重要的理論和現(xiàn)實意義另一類NSAIDs是一氧化氮釋放型NSAIDs。其發(fā)病機理,臨床體征及病理組織改變和MS相似,因此被廣泛用于研究MS的發(fā)病機理和藥物治療作用的研究,而且近年來有重要的突破近年來,先后建立了用異種血清,包括豬、牛、馬血清,異體蛋白,包括豬白蛋白、血清球蛋白、人丙種球蛋白、人血白蛋白,卡介苗BCG+LPS注射制作免疫肝纖維化病理模型隨之而來的是羅非昔布等“昔布類”(coxibs)藥物的不斷涌現(xiàn)。該鼠能自發(fā)性形成免疫復合物性腎炎,血清中有大量的抗核抗體,淋巴組織高度增生所以有學者建議這種“脈沖”療法可用于嚴重RA病情加劇或新的SAIDs應用之前（用小劑量脈沖療法，即每周1次，第一周2．5—5毫克，以后每周增加2．5毫克，至每周10—15毫克。提示免疫調節(jié)肽SP,特別是脊髓背角SP參與AA鼠免疫系統(tǒng)的調節(jié)。該模型可以更直接地用于研究EAE和MS的發(fā)病機理,及藥物預防和治療機理的研究因為PG具有擴張血管、促進炎性介質滲出、產(chǎn)生或增敏痛覺等作用臨床上聯(lián)合應用生理劑量SAIDs和其他藥物,可以提高內源性防御機制,既能發(fā)揮抗炎作用,還能抵抗細胞自身免疫反應,這是治療RA的一種切實可行的方法

采用短小棒狀桿菌+LPS序貫靜脈注射建立免疫性肝損傷,該模型發(fā)病快,血SGPT在造模后16-18h達高峰水平,并伴肝脾明顯腫大,血漿NO水平升高和脾細胞致分裂素反應明顯下降的特點

為模擬臨床肝炎的細胞免疫病理過程,采用1%2,4,6-三硝基苯基Picrylchloriele(Pcl)乙醇溶液腹部涂藥致敏,再用0.2%~0.5%Pcl的橄欖油溶液肝穿刺攻擊,18h后模型組血清轉氨酶顯著上升,肝組織壞死,炎性細胞浸潤,甚至浸及整個肝臟

上述模型的建立,為肝損傷的機制及藥效評價開辟了新的途徑,但仍與病毒性肝炎免疫損傷所致的纖維化模型有相當大的差異。尋找新的、在免疫及病理學等方面相比更接近臨床肝炎的動物模型仍是今后人們努力的方向

艾滋病(AIDS)是20世紀人類的頭號病魔。尋找合適的動物模型一直是AIDS研究的重大難題之一。理想的AIDS動物模型應是:能感染HIV;動物體型小;遺傳、免疫、代謝特性較清楚;靶細胞應該是CD4+淋巴細胞和巨噬細胞為主

靶器官應包括血清、淋巴組織和腦,傳染方式應類似HIV,發(fā)病癥狀與人AIDS相似。但至今尚未發(fā)現(xiàn)理想的動物模型。近年來,有關艾滋病動物模型的研究取得了一些進展。常用的評價艾滋病治療藥物的鼠模型主要有(1)鼠白血病病毒模型鼠白血病病毒(Murineleukerniavirus,MULV)屬于反轉錄病毒,接種于敏感鼠后可以導致脾淋巴結增大,免疫抑制和機會性感染等癥狀,稱為鼠艾滋病(MAIDs)。該模型也被用于研究和評價AIDS的治療藥物以及免疫調節(jié)劑(2)嵌合鼠模型利用嚴重聯(lián)合免疫缺陷小鼠(SCID)缺乏功能性T、B細胞,而不發(fā)生異體移植排斥反應的特性,將胚胎組織或末梢血細胞移植給SCID,從而建立嵌合型鼠模型。其特點是對多種病人血液中HIV-1分離株和實驗室HIV-1株敏感

MAIDs模型具有易建立、重復性好、安全周期短,不需特殊實驗,不造成生物災害等特點,作為篩選抗反轉錄病毒藥物和免疫調節(jié)劑的模型具有明顯的優(yōu)勢,但MULV雖攜帶反轉錄病毒所具有gag、pol、env等共同基因,沒有HIV-1所特有的nef等調節(jié)基因

MULV/MAIDs系統(tǒng)只能用于評價那些作用于反轉錄病毒共同基因的藥物。而SCID/HIV-1模型系統(tǒng)尚處于建立時期,操作復雜、病毒在體內復制過程和病理生理變化尚不清楚,它是HIV-1感染的小動物模型,具有MULV/MAIDs系統(tǒng)不可比擬的優(yōu)勢,是一種很有希望的小動物模型5早老性癡呆早老性癡呆(Alzheimer'sdisease,AD)是一種與年齡相關的、進行性神經(jīng)退化而導致癡呆的疾病。流行病學研究發(fā)現(xiàn),使用抗炎藥物的人群AD發(fā)病率,癥狀及持續(xù)時間均明顯低于、輕于對照人群粘膜耐受的機制較為復雜。上述模型的建立,為肝損傷的機制及藥效評價開辟了新的途徑,但仍與病毒性肝炎免疫損傷所致的纖維化模型有相當大的差異。該模型也被用于研究和評價AIDS的治療藥物以及免疫調節(jié)劑因為PG具有擴張血管、促進炎性介質滲出、產(chǎn)生或增敏痛覺等作用二硝基氯苯喂豚鼠,發(fā)現(xiàn)豚鼠對二硝基氯苯的皮膚反應性降低。2系統(tǒng)性紅斑狼瘡動物模型近年來,先后建立了用異種血清,包括豬、牛、馬血清,異體蛋白,包括豬白蛋白、血清球蛋白、人丙種球蛋白、人血白蛋白,卡介苗BCG+LPS注射制作免疫肝纖維化病理模型此種動物模型的發(fā)病機理、臨床體征及組織病理與人類格林巴利綜合征(GBS)相似,因此,EAN作為GBS的動物模型已被國際所公認并廣為應用尋找合適的動物模型一直是AIDS研究的重大難題之一。大量COX-2選擇性抑制劑由此不斷推出(如二芳香吡唑類、二芳香咪唑類、庚烯類、環(huán)戊烯類等)多糖類藥物如黃芪多糖、人參多糖、枸杞多糖、靈芝多糖、銀耳多糖、香菇多糖、豬苓多糖和云芝多糖等,均有良好的免疫調節(jié)作用當COX途徑受到抑制后,脂氧酶活性相應增加,導致其代謝產(chǎn)物白三烯增加,而后者也是一類重要的炎癥介質,與PG有協(xié)同作用。BXSB小鼠是(C57BL/6JXSB/bLe)F1,其H-2單倍型為H-2b,可出現(xiàn)T、B細胞異常增生,胸腺萎縮,亦可產(chǎn)生大量自身抗體及免疫復合性腎炎,后期可并發(fā)嚴重關節(jié)炎。近年來,有關艾滋病動物模型的研究取得了一些進展。主要動物為Lewis大鼠或兔。(1)鼠白血病病毒模型5%Pcl的橄欖油溶液肝穿刺攻擊,18h后模型組血清轉氨酶顯著上升,肝組織壞死,炎性細胞浸潤,甚至浸及整個肝臟CⅡA與AA有許多相似之處,但在免疫指標上也有不同尋找新的、在免疫及病理學等方面相比更接近臨床肝炎的動物模型仍是今后人們努力的方向2)體內與體外實驗互相補充;

炎癥免疫機制在AD的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。尤其是通過中樞小膠質細胞的激活,釋放IL-1及IL-6等炎癥細胞因子,促進腦內淀粉樣前體蛋白(amyloidprecursorpeptide,APP)變?yōu)榈矸蹣拥鞍爪?amyloidβ-peptide)及老年斑(senileplaques,SPS)的形成,使神經(jīng)纖維纏結,突觸減少和神經(jīng)元喪失。此外,細胞凋亡、氧化應激、tau過度磷酸化等均可能是AD的發(fā)病機制

對AD發(fā)病機理尚缺乏根本的了解,因此尚缺乏真正的AD模型。目前常采用的主要有:1)AlCl3灌胃,建立大鼠老年性癡呆模型,主要病理變化為在癡呆大鼠背海馬結構各部位可見較多的β-AP樣免疫反應神經(jīng)元和較強β-APP表達2)毀損Wistar大鼠邁內特基底核(nucleusbasalisofMeynert,nbM)建立AD動物模型,其表現(xiàn)為記憶力下降,乙酰膽堿酯酶(AchE)

銳減,β-AP和tau蛋白樣免疫神經(jīng)元增加、變性、壞死細胞形成,并有人AD相似的老年斑3)采用海馬內微量注射β-AP多肽誘發(fā)AD模型,注射一周,學習記憶發(fā)生改變,出現(xiàn)大量膠質細胞反應,神經(jīng)原軸突退化。此外,還有鵝育覃氨酸基底前腦注射致膽堿能損傷大鼠,雙側頸總脈永久性結扎致腦缺血大鼠和D-半乳糖皮下注射后自由基增多致腦老化小鼠等1995年以來,發(fā)達國家已用基因技術培育出早老性癡呆動物模型,國內已有單位引進日本快速老化小鼠(Senencenceacceleratedmouse,SAM)模型,但上述模型并不具備AD的全部特征,具有一定局限性。因此,采用不同模型,多方面著手,仍是研究該類藥物的主要途徑6移植免疫同種異體器官移植能導致受體動物產(chǎn)生排異反應。這種反應能被免疫抑制劑抑制或延緩,在動物實驗中,多種器官可以進行異體移植,如皮膚片、腎、心臟、小腸、肝等,可通過免疫抑制對排異反應的抑制程度來評價免疫抑制性藥物

通過用藥組和對照組的排異時間平均值來評價免疫抑制的作用強度.隨著我國器官移植外科學的發(fā)展,器官移植手術在我國較大醫(yī)院已相當普及。相對來說,移植免疫的動物模型研究相對滯后,研究開發(fā)免疫抑制藥物對移植免疫動物模型的影響相對較少

開展藥物對器官移植免疫動物模型機理的研究,對提高我國移植外科醫(yī)生的臨床用藥水平,發(fā)展我國自已的免疫抑制藥物,尤其從中草藥中開發(fā)新型的免疫抑制具有重要的理論和現(xiàn)實意義7神經(jīng)免疫功能紊亂疾病的動物模型神經(jīng)系統(tǒng)部分疾病的發(fā)病機制和免疫功能紊亂有關。已明確中樞神經(jīng)脫髓鞘引起多發(fā)性硬化(multiplesclerosis,MS)及周圍神經(jīng)脫髓鞘病格林-巴利綜合癥(GBS)等疾病與免疫功能有關MS是以堿性髓鞘蛋白(myelinbasicprotein,MBP)為自身抗原,GBP則以周圍神經(jīng)髓鞘中P2蛋白為重要的抗原實驗性變態(tài)反應性腦脊髓膜炎和實驗性變態(tài)反應性神經(jīng)炎模型是人們研究神經(jīng)免疫性疾病的常用模型(1)實驗性變態(tài)反應性腦脊髓膜炎(EAE)

是研究MS的理想動物模型。其發(fā)病機理,臨床體征及病理組織改變和MS相似,因此被廣泛用于研究MS的發(fā)病機理和藥物治療作用的研究,而且近年來有重要的突破

MS是一中樞神經(jīng)系統(tǒng)的自身免疫性疾病,是體內CD4細胞對自身抗原一種免疫反應,主要的自身抗原包括MBP或MBP的多肽片段、含脂蛋白(proteinlipidprotein,PLP)等在動物小鼠、大鼠及豚鼠均能誘發(fā)成功

采用牛MBP致敏SJL小鼠建立實驗性變態(tài)反應性腦脊髓模型,分離EAE發(fā)病動物外周血對CD4特異的T淋巴細胞,用此種細胞靜脈注入同種健康小鼠,可建立被動轉移EAE模型。該模型可以更直接地用于研究EAE和MS的發(fā)病機理,及藥物預防和治療機理的研究(2)實驗性變態(tài)反應性神經(jīng)炎模型(EAN)

采用牛MBPP2蛋白加弗氏不完全佐劑,多點基礎免疫7d后,同劑量加強免疫一次,一周后動物發(fā)病。主要動物為Lewis大鼠或兔。其主要表現(xiàn)為:精神萎靡、體重下降,先出現(xiàn)雙下肢無力,逐漸加重到癱瘓,隨之發(fā)展到四肢癱瘓、四肢針刺反應減退。此種動物模型的發(fā)病機理、臨床體征及組織病理與人類格林巴利綜合征(GBS)相似,因此,EAN作為GBS的動物模型已被國際所公認并廣為應用8粘膜耐受實驗研究方法

粘膜耐受(MT)是指粘膜通過口服或鼻腔吸入等途徑接觸蛋白質抗原后,再用此種蛋白進行粘膜外免疫,引起的一種系統(tǒng)低反應狀態(tài)。1911年Wells首次用公雞卵白蛋白喂豚鼠,發(fā)現(xiàn)豚鼠對此種蛋白質引起的過敏具有抵抗性

二硝基氯苯喂豚鼠,發(fā)現(xiàn)豚鼠對二硝基氯苯的皮膚反應性降低。八十年代,口服耐受才應用到炎癥免疫性疾病動物模型的治療上.此外,研究發(fā)現(xiàn),鼻腔給予蛋白也是一種有效誘導免疫耐受的研究的方法

粘膜耐受的機制較為復雜。一般認為小劑量抗原口服后,通過調節(jié)性T細胞分泌一些抑制性細胞因子如TGF-β、IL-4、IL-10等,介導導主動抑制,大劑量口服或吸入后,抗原通過作用胸腺、脾臟及粘膜局部伴發(fā)的淋巴組織等處的Th1、Th2細胞,使其克隆無能(cloneanergy)或克隆清除(clonedeletion)發(fā)揮免疫耐受作用

通過口服Ⅱ型膠原可以明顯抑制由Ⅱ型膠原誘導的大鼠或小鼠的關節(jié)炎;口服MBP可以對MBP誘導Lewis大鼠和SJL小鼠的EAE發(fā)揮明顯治療作用,通過口服耐受治療其他免疫功能紊亂性疾病的研究正在國內外許多實驗室進行,而且走在逐步應用臨床。因此,MT的研究,對于炎癥免疫性疾病的治療提供了新的思路9結語炎癥與免疫是機體的兩種不同功能,但又密切相關不可分割,其相互之間的關系,錯縱復雜。抗炎免疫藥理學主要研究藥物對炎癥和免疫功能的作用及其機制,為炎癥免疫性疾病的藥物治療提供理論基礎

多數(shù)抗炎免疫藥物在發(fā)揮抗炎作用的同時,又影響機體的免疫功能,使機體異常的免疫狀態(tài)(升高或降低)恢復,而對正常的免疫功能無明顯影響;抗炎免疫藥物多作用于炎癥免疫功能的不同環(huán)節(jié),但離不開機體神經(jīng)內分泌系統(tǒng)內環(huán)境的相互影響,且不同品種、性別年齡的動物對抗炎免疫藥物的反應可能不同臨床用于恢復一種結構類似左旋咪唑的tilomisole,能促進淋巴細胞恢復和增殖,提高IL-2,INF的產(chǎn)生,可適用于治療RA系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種病因未明,累及多個系統(tǒng),病程遷延反復的自身免疫性疾病。一些用于治療炎癥免疫性疾病的外用劑型相繼被開發(fā)。由此提出抗炎免疫藥理學的新觀點。分別采用空腸彎曲菌CJ-S131和Pristane成功地建立SLE小鼠模型,并初步探討了免疫調節(jié)藥白芍總甙和褪黑素對SLE小鼠的雙向免疫調節(jié)作用生理條件下的PG能保護胃黏膜、擴張腎血管。與FK506結構相似的雷帕霉素在體內外均具有抗免疫活性。粘膜耐受(MT)是指粘膜通過口服或鼻腔吸入等途徑接觸蛋白質抗原后,再用此種蛋白進行粘膜外免疫,引起的一種系統(tǒng)低反應狀態(tài)。Ⅱ型膠原關節(jié)炎(collagentypeⅡinducedarthritis,CⅡA)是Trentham等1977年首次建立的實驗性關節(jié)炎模型。一些用于治療炎癥免疫性疾病的外用劑型相繼被開發(fā)。另一類NSAIDs是一氧化氮釋放型NSAIDs。3)多種方法、多項指標綜合評價除具有良好抗