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文檔簡介
免疫抑制劑對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的影響【摘要】目的研究免疫抑制劑對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞(Macrophage,M)的損傷作用機(jī)制。方法以小鼠腹腔巨噬細(xì)胞為對(duì)象,采用小鼠尾靜脈注射地塞米松/只,環(huán)磷酰胺/只,小鼠腹腔巨噬細(xì)胞培養(yǎng),檢測(cè)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能及腹腔灌洗液中NO2-/NO3-濃度并用形態(tài)學(xué)方法觀察比較免疫抑制劑對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的損傷特點(diǎn)。結(jié)果地塞米松和環(huán)磷酰胺均能抑制巨噬細(xì)胞功能,與對(duì)照組比,細(xì)胞吞噬功能均顯著下降,DEX組腹腔灌洗液中NO2-/NO3-濃度顯著升高,Cy組不升高。VitC為自由基鏈反應(yīng)阻斷劑,阻斷過氧化鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可減輕損傷,可使DEX組細(xì)胞吞噬功能獲得部分恢復(fù)。結(jié)論推測(cè)環(huán)磷酰胺對(duì)腹腔巨噬細(xì)胞損傷是以直接損傷染色體而DEX以氧化損傷為主。
【關(guān)鍵詞】地塞米松環(huán)磷酰胺巨噬細(xì)胞
Theeffectofdexamethasoneandcyclphosphamideonperitonealmacrophageofmice
【Abstract】ObjectiveWeinvestigateddemagemechanismofperitonealmacrophage(M)inducedbyinjectionofdexamethasoneandcyclophosphamideinTheimmunefunctionbydeterminingthephagocyticfunctionandstructureofthemacrophagocytesoftheabdominalcavitiesofmiceinvitro.Thephagocytosisofperitonealmacrophageswasevaluatedbychickenerythrocytesmethod;ObservedtheconcentratuonofNO-2/NO-3intheperitoneallavageDexamethasoneandcyclophosphamideinducedtheapoptosisofperitonealmacrophageandconcomitantdecreaseofphagocytosis(vscontrolgroup,),theconcentratuonofNO-2/NO-3intheperitoneallavagefluidsignificantlyincreasedafterdexamethasoneinjection;VitC(inhibitorofiNOSandinhibitorofreactiveoxygenspecies)preventedtheapoptosisofperitonealmacrophageandreducedtheconcentrationofNO-2/NO-3intheperitoneallavagefluidaftertheeffectofTheseevidencessupportthatNOandactiveoxygenspeciesmaybeinvolvedintheapoptosisprocessofperitonealperitonealmacrophageinducedbydexamethasoneinmice.
【Keywords】dexamethasonecyclophosphamidemacrophage
地塞米松和環(huán)磷酰胺在臨床腫瘤的治療中是常用的藥物,在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)又會(huì)引起免疫系統(tǒng)損傷,而影響治療效果。巨噬細(xì)胞(macrophage,M)是機(jī)體免疫體系中重要的免疫效應(yīng)細(xì)胞,具有非特異性直接清除各種異物,殺傷病原體和腫瘤細(xì)胞的功能,并具有抗原提呈作用。本實(shí)驗(yàn)選用小鼠腹腔巨噬細(xì)胞進(jìn)一步探討在整體條件下地塞米松和環(huán)磷酰胺對(duì)免疫功能影響的機(jī)制。
1材料和方法
實(shí)驗(yàn)分組及動(dòng)物處理昆明種雄性小鼠,日齡55~58天。60只分為5組:正常對(duì)照組;DEX組:腹腔注射地塞米松150μg/只,每日1次,連續(xù)注射3次;Cy組:腹腔注射環(huán)磷酰胺/只,每日1次,連續(xù)注射3次;VitC+DEX組:與DEX組同時(shí)注射;VitC+Cy組:與Cy同時(shí)注射;給藥第2天上述小鼠腹腔注射2%無菌淀粉1ml。
腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的測(cè)定于第4天取各組6只,小鼠腹腔注射5%雞紅細(xì)胞1ml,30min后,引頸處死小鼠,腹腔注射D-HanKs1ml,輕輕按揉腹壁1min,吸出腹腔液滴片。置37°C濕盒孵育30min后,用PBS沖洗,去除未貼壁M和游離雞紅細(xì)胞,1:1丙酮-甲醇固定7~8min,自然晾干。有姬母薩-瑞士染液進(jìn)行染色,油鏡下計(jì)數(shù)M和M吞噬CRBC數(shù)。用下列公式計(jì)算吞噬百分率和吞噬指數(shù):吞噬百分率=吞噬雞紅細(xì)胞的M/100個(gè)M×100%吞噬指數(shù)=被吞噬的雞紅細(xì)胞總數(shù)/100個(gè)M。
細(xì)胞涂片Giemsa染色各組小鼠第4天引頸處死,腹腔注射D-Hanks液5ml,吸出腹腔液4℃500r/min,去上清與PBS制成細(xì)胞懸液,調(diào)細(xì)胞為1×106個(gè)/ml,100μl涂片,涼干后甲醇固定,晾干Giemsa染色,普通光鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化。
腹腔巨噬細(xì)胞NO檢測(cè)NO2-/NO3-的測(cè)定按NO試劑盒說明書操作,最后測(cè)定500nm吸光度值。NO2-/NO-3=/。
2實(shí)驗(yàn)結(jié)果
所有數(shù)據(jù)均采用單因素方差分析法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,并采用Student-NK檢驗(yàn)法進(jìn)一步檢驗(yàn)。腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的測(cè)定結(jié)果見表1。DEX和Cy注射組小鼠M的吞噬百分率和吞噬指數(shù)均明顯降低,與生理鹽水對(duì)照組比較具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;VitC+DEX組M的吞噬百分率和吞噬指數(shù)比DEX組有顯著提高;VitC+Cy組M的吞噬百分率和吞噬指數(shù)較Cy組差異無顯著性。形態(tài)學(xué)變化可見:DEX組和Cy組較對(duì)照組出現(xiàn)明顯形態(tài)變化細(xì)胞變小,染色質(zhì)凝聚,細(xì)胞質(zhì)濃縮,可見凋亡小體。
腹腔巨噬細(xì)胞NO檢測(cè)結(jié)果見圖1:小鼠腹腔灌洗液中NO濃度測(cè)定顯示:與對(duì)照組比,DEX組NO2-/NO-3濃度顯著上升,而VitC能部分逆轉(zhuǎn)NO濃度,但對(duì)Cy組無明顯改善。表1腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的測(cè)定結(jié)果
注:①與對(duì)照組比較,;②與對(duì)照組比較,;③與DEX組比較,;④與Cy組比較,
圖1腹腔巨噬細(xì)胞NO檢測(cè)結(jié)果注:①與對(duì)照組比較,P<;②與DEX組比較,P<,③與DEX組比較,P<;④與Cy組比較,P>
3討論
巨噬細(xì)胞是機(jī)體免疫體系中重要的免疫效應(yīng)細(xì)胞,本實(shí)驗(yàn)選用腹腔巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的方法來觀察免疫抑制劑對(duì)巨噬細(xì)胞的影響。結(jié)果可見,免疫抑制劑可顯著抑制小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力;VitC能明顯改善地塞米松對(duì)巨噬細(xì)胞的影響。文獻(xiàn)報(bào)道抗氧化劑VitC通過清除氧自由基和降低脂質(zhì)過氧化提高機(jī)體免疫功能[1~3]。機(jī)體氧化-抗氧化的平衡對(duì)維持正常的免疫功能具有重要的作用,它影響到免疫細(xì)胞膜磷脂、細(xì)胞內(nèi)蛋白、核酸的完整性和免疫信號(hào)的傳導(dǎo)及基因表達(dá)。免疫細(xì)胞由于其細(xì)胞膜磷脂含有較高的不飽和脂肪酸,因此對(duì)氧應(yīng)激非常敏感[4]。已有實(shí)驗(yàn)證明VitC有很強(qiáng)的抗氧化作用,注射VitC可明顯減弱DEX對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬功能的抑制作用,分析DEX對(duì)巨噬細(xì)胞的免疫抑制作用可能與其氧化損傷有關(guān)。文獻(xiàn)報(bào)道[5]抗氧化劑維生素C通過抑制DEX誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞凋亡增強(qiáng)淋巴細(xì)胞的增殖能力,VitC具有抗氧化作用,提示通過抗氧化促進(jìn)細(xì)胞增殖,抑制DEX誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞的凋亡。巨噬細(xì)胞具有非特異性直接清除各種異物,殺傷病原體和腫瘤細(xì)胞的功能[6]。靜止的巨噬細(xì)胞胞體小,細(xì)胞活性低,吞噬功能弱。當(dāng)巨噬細(xì)胞被激活后,細(xì)胞胞體變大、表面突起增多,細(xì)胞內(nèi)有完整的細(xì)胞器,且溶酶體、線粒體增多,細(xì)胞吞噬功能增強(qiáng)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,VitC改善巨噬細(xì)胞吞噬功能,形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn),VitC處理的M細(xì)胞表面突起增多,細(xì)胞伸展率提高并能對(duì)抗DEX引起的細(xì)胞變小,伸展性差,細(xì)胞聚集成團(tuán)現(xiàn)象。有研究報(bào)道DEX可降低M的吞噬作用[7,8],Grasso等[9]研究發(fā)現(xiàn)DEX與M體外共同孵育可抑制M細(xì)胞吞噬功能,但培養(yǎng)液中一旦去除DEX,M吞噬功能很快便得到恢復(fù)。DEX具有誘導(dǎo)免疫細(xì)胞凋亡的作用[10]。M凋亡的機(jī)制十分復(fù)雜,近年的研究發(fā)現(xiàn)許多因素與M凋亡有關(guān)。巨噬細(xì)胞受到刺激或進(jìn)行吞噬作用后,發(fā)生呼吸暴發(fā),可產(chǎn)生大量的活性氧及NO等活性物質(zhì)[11]。是巨噬細(xì)胞在腫瘤免疫中發(fā)揮獨(dú)特作用的基礎(chǔ),一定濃度的NO又是M凋亡信息傳遞通路中的關(guān)鍵環(huán)節(jié),通過調(diào)控巨噬細(xì)胞自身凋亡保持巨噬細(xì)胞數(shù)量恒定[12]。有研究報(bào)道凋亡時(shí)活性氧和NO或減少或增多[13],機(jī)制尚不清。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示DEX誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞凋亡與NO生成增多有關(guān)。NO是一種自由基氣體,其不成對(duì)電子在氮原子上,為氮自由基參與細(xì)胞內(nèi)和線粒體內(nèi)的鏈?zhǔn)椒磻?yīng),VitC為自由基鏈反應(yīng)阻斷劑,減輕損傷,能部分抑制巨噬細(xì)胞凋亡,細(xì)胞吞噬機(jī)能也獲得部分恢復(fù),以DEX組較顯著。本實(shí)驗(yàn)提示VitC以抗氧化與抑制DEX誘導(dǎo)的M凋亡有關(guān)。推測(cè)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)腹腔巨噬細(xì)胞凋亡是以直接損傷染色體而DEX以氧化損傷為主,VitC以抗氧化作用而減輕DEX誘導(dǎo)的M凋亡。【參考文獻(xiàn)】
1PardueSL,ThaxtonJP.Evidenceforameliorationofsteroid-mediatedimmunosuppressionbyascorbicacid.PoultSci,1984,63(6):1262-1268.
2OlsonGE,PoikHCvitroeffectofascorbicacidoncorticosteroid-causedneutrophilSurgRes,1997Feb,22(2):109-112.
3DeIaFuenteM,F(xiàn)errandezfunctioninagedwomenisimprovedbyingestionofvitaminsCandJPhysiolPharmacol,1998Apr,76(4):373-380.
4ERICAntioidantsandimmuneresponseinagedperson:overviewofpresentJClinNutr,1995Dec,62(6Suppl):1462-1476.
5RojasM,RugelesmodulationofapoptosisandnecrosisbyantioxidantsinimmunosuppressedhumanApplPharmacol2002Apr15:180(2):67-73.
6WilliamsMA,NewlandAC.Thepotentialformonocytemediatedimmunotherapyduringinfectionandmalignancy.PartI:apoptosisinductionandcytotoxicLymphoma,1999Jun,34(1-2):1-23.
7BeckerJ,Grassoofyeastingestionbydexamethasoneinmacrophagecultures:evidenceforasteroid-inducedphagocytosisinhibitoryJImmunopharmacol1998;10(4):325-338.
8GrassoRJ,KleinofyeastphagocytosisandcellspreadingbyglucocorticoidsinculturesofresidentmurineperitonealImmunopharmacol,1981,3(2):171-192.
9GrassoRJ,Westofyeastphagocytosisbydexamethasoneinmacrophagecultures:reversibilityofeffectandenhancedsuppressioninculturesofstimulated,1982-83,4(4):265-78Related.
10SoniaL.Glucocorticoids-InducedApoptosisinandBiophysicalResearchCommunications,2000,279:307-312.
11MalechHL,Gallinconcepts:Immunology,NeutrophilsinhumanEnglJ
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