第七章芳胺類藥物分析

第七章芳胺類藥物分析第一頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四基本要求一、掌握芳胺類藥物的鑒別試驗方法和含量測定的亞硝酸鈉滴定法。二、熟悉芳胺類藥物的特殊雜質檢查和含量測定的非水滴定法和分光光度法；熟悉苯乙胺類藥物的鑒別、檢查和含量測定方法；三、了解本類藥物的結構和性質。第二頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四R1HNCOOR2對氨基苯甲酸酯結構通式第一節(jié)芳胺類藥物的分析一、對氨基苯甲酸酯類藥物的基本結構與主要性質第三頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四H2NCOOC2H5苯佐卡因H2NCOOCH2CH2N(C2H5)2鹽酸普魯卡因HClCH3(CH2)2NHCOOCH2CH2N(C2H5)2HCl鹽酸丁卡因第四頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四結構與分析方法芳伯氨基，顯芳伯氨基特性。脂烴胺側鏈，游離堿多為堿性油狀液體或固體，與生物堿沉淀劑反應。有酯鍵（或酰氨鍵），易水解，尤其受堿或光、熱的影響能促進水解。水解產物限量控制。第五頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四酰胺類藥物結構通式R1R3R4NHCOR2二、酰胺類藥物的基本結構與主要性質第六頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四HONHCOCH3對乙酰氨基酚CH3COHNSOONHCOCH3醋氨苯砜H3CCH3NHCOCH2N(C2H5)2HClH2ONHCONCH3CH3C4H9HCl鹽酸利多卡因鹽酸布比卡因第七頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四結構與分析方法酰氨結構，可水解為芳伯氨基，重氮化偶合?？臻g位阻影響水解。有酚羥基或水解產生酚羥基，可與三氯化鐵顯色。脂烴胺側鏈，顯弱堿性，與生物堿沉淀劑或重金屬離子反應。第八頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四三、鑒別試驗（一）重氮化-偶合反應

分子結構中含有芳伯氨基或潛在芳伯氨基的藥物，均可發(fā)生此反應。Ar-NH2HClNaNO2重氮鹽OH--萘酚橙黃~猩紅色第九頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四

直接反應：苯佐卡因、鹽酸普魯卡因、鹽酸普魯卡因胺間接反應：對乙酰氨基酚、醋氨苯砜

利多卡因和布比卡因由于空間位阻很難發(fā)生此反應。第十頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四

丁卡因雖無芳伯氨基，但可與NaNO2反應生成N－亞硝基化合物的乳白色沉淀。

（可與具有芳伯氨基的同類藥物區(qū)別）第十一頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四第十二頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四鹽酸普魯卡因ChP（2005）[鑒別]（4）本品顯芳香第一胺類的鑒別反應（附錄Ⅲ）取供試品約50mg，加稀鹽酸1mL，必要時緩緩煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亞硝酸鈉溶液數(shù)滴，滴加堿性β-萘酚試液數(shù)滴，視供試品不同，生成由橙黃到猩紅色沉淀。

第十三頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四（二）與三氯化鐵反應對乙酰氨基酚+FeCl3藍紫色化合物第十四頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四對乙酰氨基酚ChP（2005）[鑒別]（2）取本品約0.1g，加稀鹽酸5m1，置水浴中加熱40分鐘，放冷；取0.5m1，滴加亞硝酸鈉試液5滴，搖勻，用水3ml稀釋后，加堿性β-萘酚試液2m1，振搖，即顯紅色。第十五頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四

1.與銅和鈷離子反應：利多卡因與硫酸銅生成藍紫色配位化合物；與氯化鈷生成亮綠色沉淀。（三）與金屬離子反應第十六頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四第十七頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四2.羥肟酸鐵鹽反應（基于普魯卡因胺分子中的芳酰胺結構）第十八頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四3.與汞離子反應鹽酸利多卡因+H2NO3+Hg(NO3)2黃色對氨基苯甲酸酯＋H2NO3+Hg(NO3)2紅色或橙黃色第十九頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四1.鹽酸普魯卡因的鑒別

(四)水解產物反應鹽酸普魯卡因+NaOH普魯卡因油狀物對氨基苯甲酸鈉+二乙氨基乙醇（使?jié)駶櫟募t色石蕊試紙變蘭色）對氨基苯甲酸鈉+HCl對氨基苯甲酸（白色）第二十頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四第二十一頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四2.苯佐卡因的鑒別

苯佐卡因+NaOH乙醇乙醇+I2+NaOHCHI3（碘仿臭氣，黃色沉淀）第二十二頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四(五)制備衍生物測熔點1.三硝基苯酚衍生物的制備：利多卡因和布比卡因第二十三頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四

2.硫氰酸鹽衍生物的制備：

鹽酸丁卡因第二十四頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四(六)紫外特征吸收光譜法

1.在λmax處測定供試液的百分吸收系數(shù)。

例如：對乙?；釉?.4%NaOH中于λmax=240nm;E1%1cm=715在HCl(0.1nol/L)-甲醇于λmax=249nm;E1%1cm=8802.在規(guī)定的濃度測定λmax

例如：醋氨苯砜5μg/ml;λmax=256nm;284nm

再例如：鹽酸普魯卡因胺5μg/ml;λmax=280nm(七)紅外吸收光譜法第二十五頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四（一）對乙酰氨基酚中的雜質檢查（化學合成工藝）A、對硝基氯苯→水解→對硝基酚→還原→對氨基酚→乙?；疊、酚→亞硝化、還原→對氨基酚，乙?；?）酸度來源：生產過程，水解要求：本品1%溶液pH應為5.5—6.5。四、特殊雜質檢查第二十六頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四2）乙醇溶液的澄清度與顏色本品為白色結晶或潔凈性粉末，易溶于乙醇，溶液澄清。來源：中間體對氨基酚氧化產物。要求：不得比棕紅色2號更深來源：生產中還原劑（鐵粉）。要求：不得比1號濁度標準液更濃。第二十七頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四檢查方法取本品的細粉1.0g，置具塞離心管或試管中，加乙醚5ml，立即密塞，振搖30分鐘，離心或放置澄清，取上清液作為供試品溶液；另取每1ml中含對氯乙酰苯胺1.0mg的乙醇溶液適量，用乙醚稀釋成每1ml中含50μg的溶液作為對照液。吸取供試品溶液200μl與對照溶液40μl，分別點于同一硅膠GF254薄板上。以氯仿－丙酮－甲苯（13:5:2）為展開劑，展開后，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視，供試品溶液如顯雜質斑點，與對照溶液的主斑點比較，不得更大，更深。3）有關物質對氯乙酰苯胺第二十八頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四4）對氨基酚檢查方法

取本品1.0g，加甲醇溶液（1→2）20ml溶解后，加堿性亞硝基鐵氰化鈉試液1ml，搖勻，放置30min；如顯色，與對乙酰氨基酚對照品1.0g加對氨基酚50μg用同一方法制成的對照液（臨用配制）比較，不得更深（0.005％）。第二十九頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四（二）鹽酸普魯卡因注射液中對氨基苯甲酸的檢查檢查方法

精密量取本品，加乙醇稀釋使成為每1ml中含鹽酸普魯卡因2.5mg的溶液，作為供試品溶液。取對氨基苯甲酸對照品,加乙醇制成每1ml中含30μg的溶液,作為對照品溶液。取上述兩種溶液各10μl，分別點于含有羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠H薄層板上，用苯－冰醋酸－丙酮－甲醇（14:1:1:4）為展開劑，展開后，取出晾干，用對二甲氨基苯甲醛溶液（2％對二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸5ml制成）噴霧顯色。供試品溶液如顯與對照品溶液相應的雜質斑點，其顏色與對照品溶液主斑點比較，不得更深。第三十頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四2）對氨基苯甲酸第三十一頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四原理

芳伯氨基藥物在酸性溶液中與亞硝酸鈉定量反應，生成重氮鹽，用永停法或外指示劑法指示反應終點。潛在芳伯氨基，可通過水解或還原得到芳伯氨基。

（一）亞硝酸鈉滴定法五、含量測定第三十二頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四重氮化反應歷程：NaNO2+HClHNO2+NaClHNO2+HClNOCl+H2OAr-NH2NOClAr-NH-NOAr-N=N-OHHNO2+HBrNOBr+H2O快快慢Ar-N2+Cl-（1）K1（2）K2

∵K1

≈300K2

加入KBr，可增大被測溶液中NO+的濃度，所以能加快重氮化反應速度第三十三頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四注意條件：1.溴化鉀的作用：催化劑。與亞硝酸生成NOBr，可加大NO+濃度。2.酸的種類及其濃度：

①重氮化反應速度加快；②重氮鹽在酸性溶液中穩(wěn)定；③防止生成偶氮氨基化合物，影響測定結果強酸性下可加速反應，但酸度過高，會使芳伯氨基游離受阻，影響反應速度。太濃亞硝酸分解在不同酸中重氮化反應的速度為：HBr＞HCl＞H2SO4＞HNO3鹽酸1:2.5～6過量鹽酸作用第三十四頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四3.溫度：溫度升高，反應速度加快，而生成的重氮鹽的分解也加速，亞硝酸鈉滴定液也易分解逸失。滴定應在室溫條件4.滴定速度：（先快后慢）

反應為分子反應，滴定不宜過快，要不斷攪拌。將滴定管尖端插入液面下2/3處，滴定液一次大部分放下，近終點時方改為慢速滴定，加入最后一滴滴定液后，攪拌1—5分鐘方能確定終點。5.電極活化：用濃硝酸（加1—2滴三氯化鐵試液）溫熱活化。第三十五頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四永停滴定法：鉑－鉑電極系統(tǒng)。用亞硝酸鈉液滴定，終點前，溶液中無亞硝酸，線路無電流通過，電流計指針指零。終點時溶液中有微量亞硝酸存在，電極即起氧化還原反應，線路中遂有電流通過，此時電流計指針突然偏轉，并不再回復，即為終點。終點的指示方法第三十六頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四外指示劑法：常用碘化鉀－淀粉糊劑或指示液，滴定到達終點時，稍過量的亞硝酸鈉在酸性溶液中氧化碘化鉀，析出的碘遇淀粉即顯藍色終點的指示方法KI—淀粉糊劑或試紙2NaNO2+2KI+4HCl→2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O

第三十七頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四本品在稀堿溶液中，在257+1nm波長處有最大吸收（二）紫外分光光度法對乙酰氨基酚ChP（2005）取本品約40mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加0.4％氫氧化鈉溶液50ml溶解后，加水至刻度，搖勻，精密量取5m1，置100ml量瓶中，加0.4％氫氧化鈉溶液10m1，加水至刻度，搖勻，在257nm的波長處測定吸收度，按C8H9NO2的吸收系數(shù)為715計算，即得。第三十八頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四苯乙胺類藥物基本結構R1C*HOHCHR3NHR2HOHOR1R2R3CH3H腎上腺素H2NClClHCH3鹽酸克侖特羅第二節(jié)苯乙氨類藥物的分析第三十九頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四結構與分析方法酚羥基，易氧化。脂烴胺側鏈，顯弱堿性。芳伯氨基。手性碳，光學活性。第四十頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四一、與三氯化鐵反應藥物三氯化鐵腎上腺素Adrenaline0.1mol/L鹽酸液中顯翠綠色，加氨試液顯紫色，紫紅色重酒石酸去甲腎上腺素Noradrenalinebitartrate翠綠色，加碳酸氫鈉試液顯藍色，紅色鹽酸去氧腎上腺素Phenylephrine

hydrochloride紫色鹽酸異丙腎上腺素Isoprenalinehydrochloride深綠色，滴加新制5%碳酸氫鈉液，顯藍紫色，紅色鹽酸多巴胺Dopaminehydrochloride墨綠色，滴加1%氨溶液，顯紫紅色第四十一頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四二、與甲醛－硫酸反應藥物甲醛－硫酸腎上腺素Adrenaline紅色重酒石酸去甲腎上腺素Noradrenalinebitartrate淡紅色鹽酸去氧腎上腺素Phenylephrine

hydrochloride玫瑰紅，橙紅，深棕紅鹽酸異丙腎上腺素Isoprenalinehydrochloride棕色，暗紫色鹽酸多巴胺Dopaminehydrochloride第四十二頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四

苯乙胺類藥物多數(shù)含有多羥基酚，更易被氧化顯不同顏色。

腎上腺素血紅色異丙腎上腺素橙黃色重酒石酸去甲腎上腺素黃色鹽酸去氧腎上腺素無色鹽酸甲氧明無色三、還原性（氧化呈色）反應第四十三頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四四、UV吸收光譜特征藥物溶劑濃度(mg/ml)λnm(nm)吸收度(A)重酒石酸間羥胺水0.10272鹽酸異丙腎上腺素水0.052800.50鹽酸多巴胺0.5%硫酸0.03280鹽酸芬氟拉明0.1mol/L鹽酸0.25263,270鹽酸苯乙雙胍水0.012340.60鹽酸克倫特羅0.1mol/L鹽酸0.03243,296硫酸沙丁胺醇水0.08274鹽酸偽麻黃堿水0.50251,257,263第四十四頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四特殊雜質與檢查一、酮體檢查生產工藝：酮體氫化還原制得，若氫化不完全則引入酮體雜質。降解產物腎上腺素紅多聚體第四十五頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四一、酮體檢查腎上腺素（

）中腎上腺酮（

）的檢查

260280300320Aλ第四十六頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四藥物雜質溶劑C(mg/ml)λ(nm)A腎上腺素腎上腺酮HCl(9→2000)2.0310≤0.05鹽酸去氧腎上腺素酮體水2.0310≤0.20重酒石酸去甲腎上腺素去甲腎上腺酮水2.0310≤0.05鹽酸異丙腎上腺素酮體水2.0310≤0.15鹽酸甲氧明酮胺水1.5347≤0.06紫外分光光度法檢查酮體的條件及要求第四十七頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四二、有關物質的檢查腎上腺素——HPLC鹽酸苯乙雙胍——紙色譜法鹽酸去氧腎上腺素——TLC第四十八頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四含量測定原料：非水溶液滴定法、溴量法制劑：比色法、提取容量法、紫外分光光度法、高效液相色譜法第四十九頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四一、非水溶液滴定法(一)基本原理當HA酸性較強時，反應不能定量完成，必須除去或降低HA的酸性，使反應順利地完成。BH+A-+HClO4BH+ClO4+HA游離堿類鹽被置換出的弱酸因此，要根據不同情況采用相應測定條件。第五十頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四(二)一般方法供試品+冰醋酸10ml~30ml若供試品為氫鹵酸鹽再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml~5ml結果高氯酸滴定液滴定以空白試驗校正第五十一頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四1.適用范圍

主要用于Kb＜10-8的有機堿鹽的含量測定。對堿性較弱的雜環(huán)類藥物，只要選擇合適的溶劑、滴定劑和終點指示的方法，可使pKb為8～13的弱堿性藥物采用本法滴定。

一般來說：

Kb為10-8～10-10時，宜選冰醋酸作為溶劑；(藥物)Kb為10-10～10-12時，宜選冰醋酸與醋酐的混合溶液；Kb＜10-12時，應用醋酐作為溶劑。

另外，在冰醋酸中加入不同量的甲酸，也能使滴定突躍顯著增大，使一些堿性極弱的雜環(huán)類藥物獲得滿意測定結果。(三)問題討論第五十二頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四

2.酸根的影響：無機酸類，在醋酸介質中的酸性以下列排序遞減：

高氯酸＞氫溴酸＞硫酸＞鹽酸＞硫酸氫根＞硝酸＞磷酸

消除HX干擾的方法：加Hg(Ac)2

量不足終點不明顯，結果偏低。

2B·HX+Hg(Ac)2→2B·HAc+HgX2

過量(1～3倍)不影響測定結果(三)問題討論第五十三頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四3.滴定劑的穩(wěn)定性非水溶液滴定法所用的溶劑為醋酸，具有揮發(fā)性，膨脹系數(shù)較大，溫度和貯存條件都影響滴定劑的濃度。若滴定樣品與標定HClO4溶液時的溫度不一致，溫差未超過10℃時，應將高氯酸滴定液的濃度用下列公式加以校正：

4.終點指示方法常用電位法和指示劑法。Ch.P收載的本類藥物大多采用結晶紫指示劑指示終點，少數(shù)采用電位法指示終點。(三)問題討論第五十四頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四例：重酒石酸去甲腎上腺素－－直接滴定

鹽酸克倫特羅－－加醋酸汞消除氫鹵酸干擾；由于堿性較弱，電位法指示終點

硫酸沙丁胺醇－－加入醋酐以增大突躍，結晶紫為指示劑(四)應用實例第五十五頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四二、溴量法1、游離溴及碘極易揮散，操作過程中防逸失2、不能加入太過量的溴液，以防酚羥基氧化或溴化。一般以過量2％為宜。3、平行條件作空白，校正操作中溴及碘揮發(fā)。第五十六頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四三、提取酸堿滴定法(溶解性差異)方法：供試品溶于水或礦酸，加入適量堿性試劑使藥物游離，用適當?shù)挠袡C溶劑提取，將提取液蒸干，殘渣中加中性乙醇溶解，用標準酸滴定液直接滴定（或在提取液中加定量過量的標準酸滴定液，蒸去有機溶劑后，再用標準堿滴定液回滴定）。硫酸苯丙胺→加水溶解→加氫氧化鈉試液8ml→加氯化鈉使飽和→乙醚多次提取→合并乙醚液→精密加硫酸滴定液（0.05mol/L）25ml振搖→低溫蒸去乙醚→放冷至室溫→加甲基紅指示液2滴→用氫氧化鈉（0.1mol/L）滴定。每1ml硫酸滴定液（0.05mol/L）相當于18.42mg的C18H26N2·H2SO4。第五十七頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四四、UV和比色法五、HPLC法六、體內藥物分析(GC-MS)第五十八頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四鹽酸克侖特羅的測定

取本品約0.25g，精密稱定，加冰醋酸20ml，微熱使溶解，放冷，加醋酸汞試液5ml，照電位滴定法，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并將滴定結果用空白試驗校正。每1ml的高氯酸滴定液(0.1mol/L)相當于31.37mg的C12H18Cl2N2O·HCl。

第五十九頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四

硫酸沙丁胺醇的測定

取本品約0.4g，精密稱定，加冰醋酸10ml，微熱使溶解，放冷，加醋酐15ml和結晶紫指示液1滴用高氯酸滴定液（0.1mol/L）滴定，并將滴定結果用空白試驗校正。每1ml的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當于57.67mg的（C13H21NO3）2H2SO4第六十頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四比色法測定原理加氯仿使栓劑基質溶解后，用鹽酸液（9→100）提取鹽酸克侖特羅，加亞硝酸鈉試液后，則分子中的芳伯氨基重氮化，在酸性溶液中，與N－（1－萘基）－乙二胺偶合顯色，在500nm波長處進行比色測定。[N2]+Cl-ClClCH(OH)CH2NHC(CH3)3NHCH2CH2NH2第六十一頁，共七十頁，編輯于2023年，星期四供試品溶液的制備:取本品20粒，精密稱定，切成小片，精密稱取適量（約相當于鹽酸克侖特羅0.36mg），置分液漏斗中，加溫熱的氯仿20ml使溶解，用鹽酸溶液（9→100）振搖提取3次（20、15、10ml），分取酸提取液，置50ml量