反相高效液相色譜法測定清淋沖劑中大黃素和大黃酚的含量

反相高效液相色譜法測定清淋沖劑中大黃素和大黃酚的含量

【關(guān)鍵詞】反相

摘要：目的建立清淋沖劑中大黃素、大黃酚的含量測定方法。方法采用反相高效液相色譜(RPHPLC)法，檢測波長：254nm。結(jié)果大黃素線性范圍～μg(r=8)，大黃酚線性范圍～μg(r=9)，平均回收率大黃素％，RSD=％；大黃酚％，RSD=％。結(jié)論該方法簡便、準確、重現(xiàn)性好，可作為質(zhì)量檢驗的一個定量方法。

關(guān)鍵詞：反相高效液相色譜法；清淋沖劑；大黃素；

清淋沖劑為臨床常用中成藥，收載于《衛(wèi)生部藥品標準》中藥成方制劑第六冊，具有清熱瀉火，利水通淋的功效。標準中未收載該制劑的含量測定，本實驗采用HPLC法同時測定了該制劑中兩種蒽醌類成分大黃素、大黃酚的含量，為完善清淋沖劑的質(zhì)量標準提供了依據(jù)。

1儀器與材料

SSIPC2000高效液相色譜儀，SSIModel500紫外檢測器，ANASTAR色譜工作站。大黃素、大黃酚對照品(中國藥品生物制品檢定所)：清淋沖劑(某藥廠，3個不同批號)；甲醇為色譜純，水為重蒸去離子水，其余試劑為分析純。

2方法與結(jié)果

色譜條件色譜柱：LichrospherC18(mm×200mm，5μm)，流動相：甲醇％磷酸(85∶15)，檢測波長254nm，柱溫：30℃，流速ml/min。

對照品溶液的制備分別精密稱取大黃素、大黃酚對照品適量，加無水乙醇醋酸乙酯(2∶1)制成每1ml含大黃素mg，大黃酚mg的混合溶液，即得。

供試品溶液的制備取清淋沖劑2g，精密稱定，加乙醇25ml，超聲處理20min用乙醇補足損失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液10ml，置燒瓶中，水浴蒸干，加30％乙醇鹽酸(10∶1)溶液15m1，置水浴中加熱水解1h,立即冷卻，用氯仿強烈振搖提取4次，15ml/次，合并氯仿液，置水浴上蒸干，殘渣用無水乙醇醋酸乙酯(2∶1)溶解，移置25ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(μm)濾過，即得。

陰性對照液的制備按處方比例及生產(chǎn)制備方法，自制不含大黃藥材的陰性樣品，然后按供試品溶液的制備方法，制備陰性空白對照溶液。

空白干擾實驗分別吸取供試品溶液、陰性空白對照溶液、對照品溶液，按上述色譜條件分別進樣測定，結(jié)果陰性空白對照溶液在大黃素峰、大黃酚峰相應的保留時間無干擾。

線性關(guān)系考察精密稱取大黃素、大黃酚對照品混合溶液分別進樣，，，，μl在上述色譜條件下進行檢測，測定大黃素、大黃酚峰面積，以峰面積積分值Y為縱坐標，對照品進樣量X為橫坐標，經(jīng)線性回歸分析，得大黃素的回歸方程為：Y=3238，r=8；大黃酚的回歸方程為：Y=4375350X-423，r=9。結(jié)果表明：大黃素進樣量在～μg，大黃酚進樣量在～μg范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。

精密度實驗精密吸取對照品溶液μl，在上述色譜條件下，連續(xù)進樣5次，結(jié)果峰面積大黃素RSD=％，大黃酚RSD=％。

穩(wěn)定性實驗精密吸取對照晶溶液，每隔1h進樣量20μl，重復5次，結(jié)果對照品溶液在5h內(nèi)吸收面積基本無變化，RSD為％。

重現(xiàn)性實驗取同一批樣品5份，分別按樣品測定法測定，結(jié)果以含量計算，大黃素RSD=％，大黃酚RSD=％。

加樣回收率實驗精密稱取樣品細粉適量，分別精密加入大黃素、大黃酚對照品溶液適量，按供試品溶液的制備及含量測定的方法進行，結(jié)果平均回收率為：大黃素％，RSD=％；大黃酚％，RSD=％。

樣品含量測定取3個批號樣品，分別按供試品溶液的制備方法處理。分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入HPLC儀，在上述色譜條件下