實(shí)驗(yàn)四血凝和血凝抑制試驗(yàn)

關(guān)于實(shí)驗(yàn)四血凝和血凝抑制試驗(yàn)第1頁(yè)，講稿共17頁(yè)，2023年5月2日，星期三一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

掌握血凝和血凝抑制試驗(yàn)的原理，以及使用該試驗(yàn)測(cè)定血清抗體水平的操作步驟和結(jié)果判定方法。第2頁(yè)，講稿共17頁(yè)，2023年5月2日，星期三二、實(shí)驗(yàn)原理

（一）血凝試驗(yàn)（HA）有些病毒能夠促使某些動(dòng)物（如雞、鵝、豚鼠、綿羊）和人的紅細(xì)胞發(fā)生凝集，這就是紅細(xì)胞凝集現(xiàn)象，稱做血凝試驗(yàn)。病毒凝集紅細(xì)胞是一種較為普遍的現(xiàn)象，可以作為病毒鑒定的一個(gè)指標(biāo)。第3頁(yè)，講稿共17頁(yè)，2023年5月2日，星期三HA試驗(yàn)的原理圖第4頁(yè)，講稿共17頁(yè)，2023年5月2日，星期三病毒血凝素與完整成熟的病毒顆粒結(jié)合較密切，不經(jīng)特殊化學(xué)方法處理不能分開。例如流感、腮腺炎、新城疫等病毒，病毒游離下來(lái)后，紅細(xì)胞不能再次被凝集。病毒凝集紅細(xì)胞可以分為3種類型第5頁(yè)，講稿共17頁(yè)，2023年5月2日，星期三病毒血凝素與完整成熟的病毒顆粒易于分開，血凝素呈游離狀態(tài)，例如天花、牛痘、鼠痘等病毒，它們的凝集現(xiàn)象是可逆的。象各種腦炎病毒、口蹄疫病毒等，凝集紅細(xì)胞的條件很嚴(yán)格，對(duì)紅細(xì)胞的種類有很嚴(yán)格的選擇，同時(shí)還要掌握反應(yīng)的pH和溫度等。第6頁(yè)，講稿共17頁(yè)，2023年5月2日，星期三（二）血凝抑制試驗(yàn)（HI）當(dāng)病毒懸液中加入特異性抗體時(shí)，這種紅細(xì)胞凝集的現(xiàn)象就被抑制，稱做紅細(xì)胞凝集抑制試驗(yàn)，也叫血凝抑制試驗(yàn)。第7頁(yè)，講稿共17頁(yè)，2023年5月2日，星期三HI試驗(yàn)的原理圖第8頁(yè)，講稿共17頁(yè)，2023年5月2日，星期三三、試驗(yàn)材料雞新城疫病毒：雞新城疫弱毒株（Lasota）接種雞胚、收獲尿囊液制備。雞紅細(xì)胞：采集健康雞血液，以阿氏液抗凝，以生理鹽水洗滌3~5次，將血漿、白細(xì)胞等充分洗去，用生理鹽水配置成1%紅細(xì)胞懸液使用。0.85%生理鹽水。被檢血清，采自被檢雞的血清。第9頁(yè)，講稿共17頁(yè)，2023年5月2日，星期三四、操作步驟

（一）血凝試驗(yàn)（HA）在血凝板第一排的1~12孔加入50μl生理鹽水。在第1孔中加入50μl病毒抗原，反復(fù)吸取混勻后吸50μl到第2孔，如此倍比稀釋直到第10孔，混勻后棄50μl；最后兩孔（11、12）為細(xì)胞對(duì)照。第10頁(yè)，講稿共17頁(yè)，2023年5月2日，星期三將1%的紅細(xì)胞輕輕搖動(dòng)混勻，在1~12孔中每孔加入50μl。手工震蕩，37℃靜置30min后觀察結(jié)果。結(jié)果觀察（血凝價(jià)是1：？）。第11頁(yè)，講稿共17頁(yè)，2023年5月2日，星期三1:211:221:231:241:251:261:271:281:291:210CC

以50%的紅細(xì)胞發(fā)生凝集的病毒懸液的最高稀釋度作為血凝價(jià)的終點(diǎn)，即一個(gè)血凝單位。第12頁(yè)，講稿共17頁(yè)，2023年5月2日，星期三（二）血凝抑制試驗(yàn)（HI）在血凝板的1~12孔加入50μl生理鹽水，最后一孔加100μl。第1孔加入待檢血清50μl，混勻后吸50μl至第2孔，倍比稀釋直至第10孔，混勻后棄50μl。從1~11孔，每孔加稀釋好的50μl4個(gè)血凝單位的病毒懸液。如果血凝價(jià)為1:28，那么4個(gè)血凝單位就是1:26第13頁(yè)，講稿共17頁(yè)，2023年5月2日，星期三將1%的紅細(xì)胞輕輕搖動(dòng)混勻，在1~12孔中每孔加入50μl。手工震蕩，在37℃靜置30min后觀察結(jié)果。結(jié)果判定（血凝抑制價(jià)是1：？，被檢血清為陰/陽(yáng)性）。第14頁(yè)，講稿共17頁(yè)，2023年5月2日，星期三HA試驗(yàn)HI試驗(yàn)第15頁(yè)，講稿共