超氧化物歧化酶

超氧化物歧化酶(SOD)的生產(chǎn)第六組錢龍SOD知識(shí)簡(jiǎn)介1.SOD的概念超氧化物歧化酶是一種廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物中的金屬酶，是生物體內(nèi)抗氧化酶系中主要成員之一。2.SOD的分類按其結(jié)合的金屬離子可分為Fe-SOD、Mn-SOD、CuZn-SOD三種SOD知識(shí)簡(jiǎn)介3.SOD的理化性質(zhì)3.1SOD對(duì)氰化物和H2O2的敏感性長(zhǎng)時(shí)間用過(guò)氧化氫處理可使CuZn-SOD和Fe-SOD失活，而Mn-SOD不受影響3.2SOD的吸收光譜特性CuZn-SOD具有獨(dú)特的紫外吸收光譜。由于色氨酸和酪氨酸的含量較低，它在280nm處并沒(méi)有最大吸收峰。CuZn-SOD的可見(jiàn)光最大吸收波長(zhǎng)都在680nm左右，這反映了酶分子中Cu2+的光學(xué)特性。SOD知識(shí)簡(jiǎn)介

3.3SOD穩(wěn)定性及影響因素3.3.1PH、熱、蛋白酶的影響：SOD在pH5.3～9.6間催化性能良好，在pH4.5～pH11間能穩(wěn)定存在。pH3.6時(shí)，CuZn-SOD中95%的Zn要脫落，在pH12.2時(shí)，SOD的構(gòu)象會(huì)發(fā)生不可逆的轉(zhuǎn)變而使酶失活。3.3.2SOD對(duì)熱的穩(wěn)定性與溶液中離子強(qiáng)度有關(guān)。當(dāng)離子強(qiáng)度很低時(shí),即使加熱到95℃,其活性損失也很少其他因素：SOD活性受飲料的色澤、成分、酸堿度、乙醇含量等多種因素的影響，只有在無(wú)色、近中性、無(wú)乙醇飲料中SOD活性較穩(wěn)定。另外還發(fā)現(xiàn)有機(jī)溶劑和Cl對(duì)SOD的活性具抑制作用SOD的作用welcometousethesePowerPointtemplates,NewContentdesign,10yearsexperience它催化超氧陰離子轉(zhuǎn)化為H2O2和O2的反應(yīng)，即催化超氧陰離子自由基O2-·發(fā)生歧化反應(yīng)，從而清除O2-·，2O2-·+2H+→H2O2+O2，在生命體的自我保護(hù)系統(tǒng)中起著極為重要的作用，在免疫系統(tǒng)中也有重要的功，因而它能防御氧毒性，增強(qiáng)機(jī)體抗輻射損傷能力，防衰老。實(shí)訓(xùn)目的（1）掌握SOD酶的提取、分離、檢測(cè)一般步驟。2）了解酶在提取過(guò)程中的兩個(gè)參數(shù)：回收率、純化倍數(shù)。3）掌握離心機(jī)的使用。實(shí)訓(xùn)原理welcometousethesePowerPointtemplates,NewContentdesign,10yearsexperience

鄰苯三酚在堿性條件下，能迅速自氧化，釋放出O2-，生成帶色的中間產(chǎn)物，中間物的積累在滯留30～45s后，與時(shí)間成線性關(guān)系，一般線性時(shí)間維持在4min的范圍內(nèi)，中間物在420nm波長(zhǎng)處有強(qiáng)烈光吸收。當(dāng)有SOD存在時(shí)，由于它能催化O2-與H+結(jié)合生成O2和H2O2，從而阻止了中間產(chǎn)物的積累，因此，通過(guò)測(cè)定光吸收即可求出SOD的酶活性。實(shí)訓(xùn)器材welcometousethesePowerPointtemplates,NewContentdesign,10yearsexperience

大蒜，冷丙酮，磷酸緩沖液（PH7.8，0.05mol/L)氯仿-乙醇混合液鄰苯三酚濃鹽酸儀器：天平、石英砂、研缽、冷凍離心機(jī)、50mL離心管（8）、紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)、250mL三角瓶（8個(gè)）、玻璃棒（8根）、試劑瓶250mL（3個(gè)）、500mL（3個(gè)）、250mL燒杯（16個(gè)）、試管帶膠塞(80根)、移液管(5根)SO倉(cāng)D的燙生產(chǎn)1.割SO每D酶新的提奇取稱取榆5克弦大蒜平蒜瓣甩，加臟入石膀英砂形研磨廉破碎膊細(xì)胞勇后，皺加入盈pH推7.源8,鋸0.棚05還mo殿l/籃L的張磷酸深緩沖等液（但pH咱7.吩8）原15別ml惠，繼去續(xù)研從磨2置0m榴in嘴,使就SO器D酶圣充分接溶解陣到緩壞沖液幸中，基然后革60家00昨r/稅mi封n冰揪凍離盆心1股5m挨in合，放所棄沉捕淀，而取上泉清液鳳。2.粒去除煉雜蛋士白上清自液中葵加入夕0.慘25堡倍體終積的者氯仿共——犬乙醇撈混合肌液攪揀拌1醉5m累in聽(tīng),6灶00塔0r射/m猜in邊離心服15獲mi喊n，映放棄幫沉淀伐，得靜到的劉上清姜液即疫是粗底酶液SO獄D的徹生產(chǎn)3.嫌SO少D酶獄的沉更淀分喇離粗酶另液在封攪拌市下緩務(wù)慢加月入固肉體硫濁酸銨贊至飽掛和濃塑度6禿0%布，持縫續(xù)攪允拌1省5m曉in畢，6勁00巾0r遍/m液in謀離心殺15捏mi頑n，金得到憐SO闖D酶畢沉淀4.涌將沉幻玉淀溶聯(lián)入p輩H7馳.8裕，0蜻.0挨5m活ol歉/L系的磷舅酸緩慢沖液照5m異L中嫂，然角后6送00撇0r蛙/m捕in病離心課15屈mi冷n，炒放棄量沉淀壟，取蔽上清依液，強(qiáng)用凝債膠s昂ep撫ha粥cy休lS賀-2北00鹿進(jìn)行碎純化約，然獨(dú)后超電濾濃飼縮。SO嗽D的際生產(chǎn)5.厚用紫扛外分算光光歇度計(jì)翼測(cè)定僅濃液揉的蛋串白含軟量6.即將濃戒縮冷城凍干漸燥后敲即得源成品捉。連苯鹿三酚蛙自氧句化速囑率的蓮測(cè)定取4呢.5件ml糾緩沖砍液，掉在2本5℃他水浴匙中保凳溫1滋5m寨in鐮,加津入1儉0持連苯喪三酚濱液，凝迅速側(cè)搖勻空白百：取爬4.鉛5m夕l緩鴉沖液深，在勻25京℃水萄浴中輛保溫逃15搜mi墨n,嘗加雅入1聚0孔緩沖宇液，頭迅速扎搖勻倒入挎光徑疑1c木m的置比色宿杯中籌，在洋32與5n霧m波廊長(zhǎng)下并于恒萬(wàn)溫池廣中每穴隔3京0s健測(cè)A棵值一所次計(jì)算噴線形港范圍掃內(nèi)，仰每1糧mi窯nA藏的增婚值，靈此即勝連苯彈三酚辜的自競(jìng)氧化暴速率蠶，要引求自翼氧化降速率?？刂婆炘?鞋.0娃7O職D/淚mi唉n酶活鵝測(cè)定測(cè)定追方法稼與測(cè)獸連苯歲三酚協(xié)自氧坐化速棋率相市同取1能.5宣ml挎緩沖及液，唱在2椅5℃他水浴島中保艙溫1耀5m鏈in凍,加腰入3嗽ml愿酶液歪，加父入1叛0白連苯常三酚宮液，側(cè)迅速木搖勻空白阿：取亭1.勁5m廁l緩衫沖液黑，在搜25恥℃水鼓浴中茅保溫揀15泄mi癥n,豎加異入3幼ml霉酶液介，加泊入1控0梯緩沖院液，溜迅速粘搖勻計(jì)算蠶加酶紛后連擠苯三庫(kù)酚自市氧化駛速率SO讀D的幅生產(chǎn)試劑/ml空白管對(duì)照管OD1提取液OD2粗酶液OD2酶液OD2PH8.3緩沖液33333SOD提取液000.10.10.1蒸餾水21.81.71.71.7室溫放置20min鄰苯三酚00.20.20.20.2結(jié)果是計(jì)算酶活朗力單背位提取毫液酶罪活力移單位紀(jì)：=粱2（占OD咬1-倆OD模2）魚×5缺/0揭.1呢=粗酶佛液活考力單府位：滾=2裂（O反D1帶-O淡D2旦）×剪5/肯0.貌1=酶液勸活力水單位畏：=原2（淺OD個(gè)1-束OD觸2）頁(yè)×5陷/0息.1萄=總活互力提取腳液總削活力告U=墳活力攤單位冊(cè)×總值體積夜=粗酶族液總蘆活力蝦=活出力單貨位×睜總體脖積=酶液芽總活色力=鐘活力須單位躁×總涂體積耗=比活孟力提取針液酶竭液比傻活力媽U/獵mg剖=活母力單辰位/畏蛋白奴質(zhì)濃能度=粗酶麥液比湯活力斥U/毀mg軟=活驅(qū)力單兩位/紫蛋白訊質(zhì)濃匯度=酶液恩比活訂力U搶/m寸g=庸活力削單位耽/蛋誓白質(zhì)孟濃度逮=注意身事項(xiàng)we身lc存om嗓e離to護(hù)u燈se攔t叨he感se徒P動(dòng)ow鏟er怨Po噸in鍵t碎te昏mp勿la治te回s,粱N粘ew銳C華on吩te歲nt斑d查es勿ig貫n,傳1肥0新ye午ar掌s趨ex攜pe支ri撐en泊ce1.SOD的安全性大量角試驗(yàn)掙和臨軌床應(yīng)戀用表歇明，繁無(wú)享論何掙種給舉藥方亡式，怪除罕籃見(jiàn)的秋超敏勵(lì)反應(yīng)凡外，途SO識(shí)D對(duì)隊(duì)人體堂無(wú)毒陣性。飄雖然窯SO顫D是輛Mr歉在3腹0賣00濃0以途上的涌蛋白哄質(zhì)，勾但小卻未筑發(fā)現(xiàn)衣具有