質(zhì)粒提取實驗

分子生物學(xué)實驗重組DNA技術(shù)質(zhì)粒DNA的提取瓊脂糖凝膠電泳復(fù)制翻譯轉(zhuǎn)錄不同來源的DNA分子通過磷酸二酯鍵連接成新的DNA分子，這一過程稱為DNA重組。不同來源的DNA分子重組DNA分子重組DNA技術(shù)基本過程載體

攜帶目的基因轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞的一種能自我復(fù)制的DNA分子。作用：1、攜帶目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞2、使外源DNA在宿主細(xì)胞復(fù)制擴(kuò)增或表達(dá)。載體的特點1.對受體細(xì)胞無害，不影響受體細(xì)胞正常生命活動2.具有自主復(fù)制能力3.含有多克隆酶切位點4.攜帶標(biāo)記基因、便于篩選5.除保留必要序列外，載體應(yīng)盡可能小6.生物安全性好載體的類型質(zhì)粒噬菌體病毒質(zhì)粒

存在于細(xì)菌染色體外的小的共價、閉環(huán)雙鏈DNA分子。第一次實驗第二次實驗第三次實驗選切、連轉(zhuǎn)篩質(zhì)粒DNA的提取方法：堿裂解法原理：質(zhì)粒DNA與染色體DNA變性與復(fù)性的差異將菌條液轉(zhuǎn)網(wǎng)移至鹽1.副5m亂l離原心管忌中(臂盡量專倒?jié)M播)↓鞭12訓(xùn)00宅0r掘pm藏/言30誓s（重復(fù)陳一次）棄上怨清扣干夏，加叨入So估lu滑ti掀on捏Ⅰ10抗0μ昌L,劇烈論振蕩打散暫菌體春，室尖溫3m炎in↓（以感下操既作要五輕柔飾）加入拌新配闊制的So稠lu陜ti濕on棵Ⅱ20蛾0μ垮L,溫和巧顛倒離心踢管4～5次混玩勻，貧室溫趟放置3mi釀n↓（此裝時出晴現(xiàn)拉校絲現(xiàn)個象）加入扶預(yù)冷巾的So泉lu芬ti良o(jì)n索Ⅲ15付0μ情L,溫和蓮顛倒離心葉管2昨～3飾次混齒勻，告室溫3mi攔n↓離秧心1典20頂00抬rp觸m/綁5m披in具體榴步驟質(zhì)粒妨DN森A的上清40誰0μL移至辣另一紙離心門管中↓加等乳體積氯仿,輕疏微振竟蕩↓離柴心1比20曉00嶺rp襯m脹/2惑mi廟n轉(zhuǎn)移上清夢液35鈔0μL至另斗一離穴心管↓加入2倍過體積無水授乙醇,輕輕鞠混勻饒室溫伯放置把2mi問n↓離晴心1魚20記00遭rp的m胡/5區(qū)mi們n棄上界清,加入70姐%乙型醇洗滌麻沉淀↓啟離心傾12恰00村0r孩pm乒/蘇2m口in流（重復(fù)梅一次）棄上曲清，液惰體盡辰量倒坊凈并穗在吸塞水紙誓上扣毫干↓室榴溫放坐置15mi籮n干脫燥加入TER礙40μL溶解轎質(zhì)粒具體贊步驟So仰lu只ti僅on棍I1、蔗索糖：手增加擁溶液孫的粘夕度，汗減少顯抽提劣過程捷中的欠機(jī)械婆剪切放作用鼻，防燭止破殺壞D包NA錦。2、Tr裹is-Cl：使溶液落維持賠最適pH范先圍。3、ED烏TA：螯合辮掉Mg2+、C線a2+等二屯價金湖屬離陰子，貌抑制壓DN語A酶鼻活性鳳，防漏止其底對DN更A分子度的降扔解作蓋用。蔗糖+Tr音is+榮ED我TASo卡lu剪ti箏on秤I裝I1.SD即S：破節(jié)壞細(xì)歇胞膜棟；解煙聚核董蛋白看并與汪蛋白辣質(zhì)分嬌子結(jié)喪合使狂之變燥性2.Na門OH門：破壞延氫鍵偽，使DN杜A分子挨變性SD敬S號+Na違OHSo張lu炕ti吩on虛I迎II1.中和桃溶液II道的堿添性，肯使D弟NA狡復(fù)性悼。2.K+離子億會與憤SD繼S形困成溶通解度彼很低黎的鹽巾并與返蛋白傭質(zhì)形中成沉跟淀而音除去敞。溶蜘液中熟的染樹色體酬DN氣A也震會與乞蛋白批質(zhì)-檔SD萌S形笑成相苦互纏闖繞的晚大分承子物拋質(zhì)，旅很容北易與尼小分席子的逝質(zhì)粒本DN冬A分旅離。KA胸c使與H妻Ac質(zhì)粒愚的鑒饞定——瓊脂猜糖凝晉膠電涌泳電泳：帶務(wù)電粒裂子在腸電場雨中向蔽著與持其電旋性相敵反的盛電極山移動墓的現(xiàn)咱象。作用折：用于吩生物默物質(zhì)得的分鏈離分惡析用于味分析但物質(zhì)逝的純煎度和烈分子跡量的洗測定犬等電泳科基本適原理當(dāng)粒再子穩(wěn)懷定運氏動時活：F’歌=F即EQ蜻=曉6π遭rηυυ/E表示電泳班遷移薦率，即躲單位劈燕電場先強度常粒子帳的運死動速鮮度，彈以μ表示瞞：μ=υ/E區(qū)=久Q雨/土6π閉rη影響是電泳筑的因跌素溶液庭的pH值電場腦強度緩沖硬液的拿離子島強度電滲代作用瓊脂堤糖凝致膠分星離范民圍凝膠濃度（%）線性DNA長度（bp）0.51000～300000.7800～120001.0500～100001.2400～70001.5200～30002.050～2000實驗谷流程茂注改意事按項1、制兩膠槽叢一定裁要放雪平2、倒鳳膠時槽要慢癥，防蜜止產(chǎn)株生氣