細胞培養(yǎng)基本技術(shù)

第四章細胞培養(yǎng)的基本(jīběn)技術(shù)

解放軍總醫(yī)院基礎(chǔ)醫(yī)學(jīchǔyīxué)研究所免疫學研究室黃建華第一頁，共六十四頁。精選ppt

細胞培養(yǎng)技術(shù)(jìshù)平臺基因治療基因診斷試管嬰兒組織工程藥物篩選(shāixuǎn)致病機理第二頁，共六十四頁。精選ppt主要(zhǔyào)內(nèi)容

基本操作技術(shù)和要求原代培養(yǎng)(péiyǎng)傳代培養(yǎng)和細胞系的維持細胞凍存與復蘇細胞培養(yǎng)污染的檢測和排除第三頁，共六十四頁。精選ppt細胞是生命活動(huódòng)的基本單位1665年英國學者RobertHooke，用自制的顯微鏡觀察軟木的薄片，第一次發(fā)現(xiàn)植物的細胞結(jié)構(gòu)，并首次(shǒucì)借用拉丁文Cella（小室）詞.1983-39德國植物學家施萊登和動物學家施旺確立了“細胞學說”的基本原則。（１）細胞是有機體，動植物都是由細胞發(fā)育來的；（２）每個細胞都作為一個相對的獨立單位，有自己的“生命”。（３）新的細胞可以通過老的細胞繁殖產(chǎn)生。進化論，遺傳學和細胞學說定為現(xiàn)代生物學的三大基石，而細胞學說又是后二者的"基石"。第四頁，共六十四頁。精選ppt組織(zǔzhī)（細胞）培養(yǎng)

從生物體內(nèi)取出細胞(xìbāo)（組織），模擬體內(nèi)生理環(huán)境，在無菌、適當溫度和一定營養(yǎng)條件下，使之生存、生長并維持其結(jié)構(gòu)和功能的方法。

細胞（組織），包括器官培養(yǎng)終歸是離體培養(yǎng)，缺少生物整體的嚴密聯(lián)系，不能代表整個機體。在進行醫(yī)學生物實驗過程及對結(jié)果的評估是都必須考慮這些。第五頁，共六十四頁。精選ppt1基本操作技術(shù)(jìshù)和要求由于體外培養(yǎng)的細胞沒有抗感染能力，因此防污染是決定培養(yǎng)成功的首要條件。一切操作需要(xūyào)保證無菌和有條不紊。第六頁，共六十四頁。精選ppt1.1培養(yǎng)(péiyǎng)室內(nèi)的無菌技術(shù)培養(yǎng)前的準備：按實驗計劃和程序準備物品，作到心中有數(shù)培養(yǎng)室和超凈臺：定期全面徹底消毒培養(yǎng)用品的無菌處理：高壓滅菌、過濾、酒精消毒實驗中無菌培養(yǎng)操作：均在火焰(huǒyàn)近處進行，實驗用品需火焰(huǒyàn)滅菌，冷卻后接觸培養(yǎng)細胞，以防燒死細胞。第七頁，共六十四頁。精選ppt1.2培養(yǎng)細胞(xìbāo)的取材基本要求：取材組織用培養(yǎng)液浸泡，4度運送，24h內(nèi)盡快培養(yǎng)。取材無菌操作，避免對組織的機械損傷，盡量去除脂肪、神經(jīng)(shénjīng)、結(jié)締、壞死組織，污染組織可用青鏈霉素和制霉菌素漂洗。原代取材同時保留組織學和電鏡標本，對供體來源、部位及一般情況做記錄。第八頁，共六十四頁。精選ppt1.2.3皮膚和粘膜(zhānmó)的取材皮膚和粘膜是上皮細胞培養(yǎng)的重要來源(láiyuán)。取材方法似斷層皮片手術(shù)，面積2-3mm2.盡可能去除皮下和粘膜下組織。因分布在體表，故細菌、霉菌很多，需嚴格消毒，可用較高濃度抗菌素漂洗。第九頁，共六十四頁。精選ppt1.2.4內(nèi)臟和實體(shítǐ)瘤的取材內(nèi)臟除消化道和泌尿管道外基本(jīběn)是無菌的，明確取材部位，去除結(jié)締組織。腫瘤組織取材避免壞死液化和結(jié)締組織，標本應按污染組織處理。第十頁，共六十四頁。精選ppt1.2.5血細胞的取材(qǔcái)血細胞培養(yǎng)可用于造血干細胞移植(yízhí)、免疫活性細胞的治療和染色體分析等。取血抗凝劑量過大易導致溶血，肝素常用濃度為20U/ml,針管用較高濃度肝素500U/ml濕潤。第十一頁，共六十四頁。精選ppt1.3組織(zǔzhī)材料的分離欲從組織中獲得大量(dàliàng)生長良好的細胞，須將組織分散開，使細胞解離出來。常用方法有機械法和化學法。第十二頁，共六十四頁。精選ppt1.3.1細胞懸液的分離(fēnlí)方法離心法：血液和體液等細胞懸液500-1000rpm轉(zhuǎn)速5-10分鐘。離心速度過大、時間過長，會造成細胞損傷和死亡。密度梯度離心法：用離心法將細胞分到不同密度的梯度介質(zhì)(jièzhì)中，再分別吸出各層細胞。適于分離密度不等的的細胞。常用介質(zhì)(jièzhì)有Ficoll400,Percoll,

泛影葡胺等。。第十三頁，共六十四頁。精選ppt機械(jīxiè)分散法

適于較柔軟(róuruǎn)的組織，如腦、肝、脾、淋巴結(jié)、胸腺、胚胎組織和腫瘤組織等。剪切組織為1mm3碎塊

后，置于組織勻漿研磨，或用吸管反復吹打分散組織細胞

組織液放在注射器內(nèi)通過針頭壓出。注射器針芯擠壓后，用PBS液洗滌，分別通過不銹鋼篩網(wǎng)80,150,400目孔徑篩網(wǎng)。記數(shù)活細胞數(shù)，制成細胞懸液接種。第十四頁，共六十四頁。精選ppt

消化(xiāohuà)分離法消化法是結(jié)合生化和化學手段把已剪切成較小體積的組織進一步分化，獲得細胞懸液直接(zhíjiē)進行培養(yǎng)第十五頁，共六十四頁。精選ppt.1胰蛋白酶(yídànbáiméi)法主要作用是對細胞間蛋白質(zhì)水解，使細胞離散?；钚砸韵业鞍椎哪芰?nénglì)測定，常用1：250消化效果與pH值、溫度、酶濃度和組織塊大小與硬度有關(guān)，對細胞分離作用與細胞的類型與性質(zhì)關(guān)系密切鈣鎂離子和血清抑制活性常用劑量為0.25%（0.1-0.5%），pH值8（8-9）溫度37。4度配制應用液。第十六頁，共六十四頁。精選ppt.2膠原酶法只對細胞間質(zhì)膠原組織起消化作用，使上皮細胞與膠原成份分離產(chǎn)品有I-VVII-IX等型，分別適用于分離肝細胞、胰島、脂肪細胞腎及纖維組織鈣鎂離子和血清不影響活性,pH.6.5-7常用(chánɡyònɡ)劑量為200單位/ml或0.1μg/ml~0.3μg/ml第十七頁，共六十四頁。精選ppt.3EDTA法EDTA（二乙烯四乙酸二鈉）作用較緩和(huǎnhé)。主要作用：能從組織生長環(huán)境中吸取維持組織完整的鈣鎂離子。單獨使用不能使細胞完全分散，常用1:1的EDTA（0.02%）和胰蛋白酶0.25%混合液第十八頁，共六十四頁。精選ppt2原代培養(yǎng)(péiyǎng)也稱初代培養(yǎng),是從供體取得組織細胞后在體外進行的首次培養(yǎng)。細胞保持原有的基本性質(zhì)，仍具二倍體遺傳物性。最接近和反映體內(nèi)生長特性。適合作藥物測試，細胞分化研究。原代培養(yǎng)細胞部分(bùfen)生物學特征尚不穩(wěn)定，供體和細胞間有很大差異。第十九頁，共六十四頁。精選ppt2.1組織(zǔzhī)塊培養(yǎng)法將組織剪成小塊后，接種于培養(yǎng)瓶，24小時貼壁后，細胞就從組織周圍長出。培養(yǎng)瓶底預先涂以膠原薄層，以利上皮細胞的生長(shēngzhǎng)。如需做組織染色或電鏡檢查，可將組織可放入小蓋玻片上后再放進培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。換液需輕巧，以免組織塊漂起，細胞死亡第二十頁，共六十四頁。精選ppt2.2消化(xiāohuà)培養(yǎng)法采用前述的組織消化分散法。將妨礙細胞生長的細胞間質(zhì)去除，使細胞分散，形成懸液，按不同(bùtónɡ)濃度接種培養(yǎng)瓶培養(yǎng)。第二十一頁，共六十四頁。精選ppt3傳代培養(yǎng)和細胞系的維持(wéichí)培養(yǎng)細胞增殖(zēngzhí)長滿瓶壁時，既達到所謂的飽和密度。此時正常細胞則不再生長；惡性細胞重疊生長，易于從瓶壁上成片脫落,，為此傳代勢在必行。第二十二頁，共六十四頁。精選ppt培養(yǎng)(péiyǎng)細胞的生長過程1）原代（初代）培養(yǎng)期：從機體取下組織培養(yǎng)到第一次傳代，此代細胞保持異質(zhì)性，細胞種類(zhǒnglèi)較多，接近原組織細胞種類(zhǒnglèi)。維持時間，因細胞種類(zhǒnglèi)不同，一般1-4周。2）傳代期培養(yǎng)：初代培養(yǎng)的細胞生長到一定程度，即可連接傳代，使其連續(xù)生長。一般正常二倍體細胞，不加附加條件，可傳代30-50代，此時可發(fā)生染色體丟失、突變、細胞增殖變慢、停止分裂，進入衰退期，我們稱之有限細胞系。這一轉(zhuǎn)折點有人稱之危象臨界點（crisis）有些細胞的少數(shù)后代，或通過人工條件轉(zhuǎn)化的細胞可通過這一期，獲得持久的增殖傳代能力，我們稱細胞系，或無限細胞系，即一般通稱的細胞系。第二十三頁，共六十四頁。精選ppt（3）衰退期：傳代細胞到達一定代數(shù)，即發(fā)生增殖緩慢，逐漸停止，進而發(fā)生衰退、死亡，多數(shù)傳代細胞（或叫有限細胞系），不能通過所謂的“crisis（危象臨界點），導致最終死亡，這一現(xiàn)象可能說明生物學衰老的細胞學基礎(chǔ)。人胚胎(pēitāi)成纖維細胞可以進行60代增殖，而80歲老人的肺成纖維細胞僅傳代了16代后便死亡。表皮細胞壽命4-10天；紅細胞3周-3個月，白細胞5-7天，神經(jīng)細胞數(shù)年或更多。第二十四頁，共六十四頁。精選ppt密度(mìdù)抑制（Densityinhibition）或接觸抑制（Ccontactinhibition）1958年Abercrombie等學者提出的一種現(xiàn)象，培養(yǎng)細胞再生長過程中多發(fā)生分裂(fēnliè)增殖，細胞移動而相互靠近，這時某些細胞可移向其他方向，保證細胞不會重疊，一但接觸，這種活動即可停止。所謂接觸抑制實際使細胞匯合形成單層時，細胞變得擁擠，與培養(yǎng)液接觸的表面區(qū)域也相應減少，營養(yǎng)成分消耗，其分裂也將停止。第二十五頁，共六十四頁。精選ppt細胞生長(shēngzhǎng)曲線細胞數(shù)量生長(shēngzhǎng)天數(shù)緩慢(huǎnmàn)生長期對數(shù)生長期平衡期第二十六頁，共六十四頁。精選ppt

（1）遲緩期（或延遲期）當細胞接種到培養(yǎng)瓶后，細胞逐漸貼附于瓶底，并恢復貼壁形狀，代謝開始旺盛，出現(xiàn)細胞分裂及增殖，但生長緩慢(huǎnmàn)。

（2）對數(shù)生長期：此期幾乎所有的細胞都在進行分裂，細胞數(shù)目迅速增長。期細胞倍增時間（TD）等于細胞周期時間（TC）長度。這一期常用細胞倍增時間及細胞分裂指數(shù)來判定。（3）平衡期（平坦期）這期細胞數(shù)目雖然在增加，但其增加速度在減慢，直至細胞數(shù)量不再增加，處于平衡狀態(tài)。

第二十七頁，共六十四頁。精選ppt3.1原代細胞培養(yǎng)的傳代(chuándài)細胞由培養(yǎng)(péiyǎng)瓶內(nèi)分離再培養(yǎng)(péiyǎng)稱之為傳代,進行一次分離再培養(yǎng)(péiyǎng)稱之為傳一代。原代培養(yǎng)的首次傳代是建系的關(guān)鍵時期，細胞需覆蓋大部分瓶底后再傳代。首次傳代時細胞接種數(shù)量要多一些，使細胞能盡快適應新環(huán)境而利于細胞生存和增殖。第二十八頁，共六十四頁。精選ppt3.2細胞傳代(chuándài)方法貼壁生長的細胞用消化法傳代；部分貼壁生長的細胞用直接吹打(chuīdǎ)即可傳代；懸浮生長的細胞采用離心分離后傳代，第二十九頁，共六十四頁。精選ppt3.2.1貼壁細胞傳代(chuándài)步驟吸除瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液；加入1ml消化液；37C或室溫25C消化2~5分鐘顯微鏡下進行觀察，發(fā)現(xiàn)胞質(zhì)回縮、細胞間隙增大后；直接(zhíjiē)加少許含血清的培養(yǎng)液，終止消化；細胞脫離瓶壁后形成細胞懸液計數(shù)，分別接種在新的培養(yǎng)瓶內(nèi)。第三十頁，共六十四頁。精選ppt3.2.2懸浮細胞(xìbāo)的傳代直接傳代即讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清洗掉1/2~1/3，然后用吸管吹打形成細胞懸液后，再傳代。離心法：離心800~1000rpm，5min，除上清，加新的培養(yǎng)液，然后傳代接種。部分(bùfen)貼壁生長細胞直接吹打傳代或需消化后傳代第三十一頁，共六十四頁。精選ppt3.3細胞系的維持(wéichí)是通過換液、傳代和細胞凍存實現(xiàn)的：建立檔案：記錄組織來源，生物學特性，培養(yǎng)液要求、傳代、換液時間和規(guī)律，細胞的遺傳學標志，生長形態(tài)，常規(guī)病理染色(rǎnsè)的標本等。第三十二頁，共六十四頁。精選ppt3.3細胞系的維持(wéichí)防細胞之間的交叉污染，傳代時所用器械要編號或做好標記每一種細胞系都應有充足的凍存儲備，以防絕種；另外二倍體細胞等有限細胞系如果暫時不用最好凍存以免(yǐmiǎn)傳代太多，造成細胞衰老或發(fā)生改變第三十三頁，共六十四頁。精選ppt4.3.4培養(yǎng)(péiyǎng)細胞的純化自然(zìrán)純化自然純化即利用某一種類細胞的增殖優(yōu)勢，而排除其它細胞生長，靠自然的增殖潛力最后留下生長優(yōu)勢細胞，去除其它細胞，達到細胞純化的目的。第三十四頁，共六十四頁。精選ppt人工(réngōng)純化利用人為手段造成對某一細胞生長有利的環(huán)境條件，抑制其它細胞的生長，從而達到純化(chúnhuà)細胞的目的。第三十五頁，共六十四頁。精選ppt酶消化(xiāohuà)法酶消化法：由于上皮細胞和成纖維細胞對胰蛋白酶的耐受性不同,，成纖維細胞先脫壁，而上皮細胞要消化相當長的時間才脫壁，利用這種差異采用多次差別(chābié)消化方法將上皮細胞和成纖維細胞分開。第三十六頁，共六十四頁。精選ppt3.4.2.2機械(jīxiè)劃除法機械劃除法：上皮細胞和成纖維細胞多數(shù)都同時出現(xiàn)，混雜生長常常分區(qū)呈片，采用機械的方法去除不需要的細胞區(qū)域(qūyù)，而保留需要的細胞。第三十七頁，共六十四頁。精選ppt3.4.2.3反復(fǎnfù)貼壁法成纖維細胞和上皮細胞相比，其貼壁過程快，大部分細胞常能在短時間內(nèi)大約10~30min完成附著過程（但不一定(yīdìng)完全伸展）；而上皮細胞大部分細胞在短時間內(nèi)不能附著或附著不穩(wěn)定，稍加振蕩即浮起，這樣可以利用此差別來純化細胞第三十八頁，共六十四頁。精選ppt3.4.2.4克隆(kèlónɡ)法將細胞分成單個細胞，使之分別生長成克隆，然后(ránhòu)對每一克隆進行測試，選擇出所需要的克隆。第三十九頁，共六十四頁。精選ppt3.4.2.5培養(yǎng)基限定(xiàndìng)方法某些細胞在生長過程中必須存在或必須去除某種物質(zhì)，否則將無法生長。而其它細胞與之相反，可以利用這種技術(shù)來純化細胞。如雜交瘤技術(shù)常用的HAT培養(yǎng)液，就用來篩選(shāixuǎn)雜交瘤細胞而抑制其它細胞。第四十頁，共六十四頁。精選ppt4.1細胞(xìbāo)的凍存凍存細胞要緩慢冷凍。減少細胞內(nèi)冰晶的形成是減少細胞損傷的關(guān)鍵(guānjiàn)。冷凍保護劑的使用，可使細胞免受冰晶形成和滲透壓改變而致的損傷。常用二甲基亞砜和甘油。凍存細胞最好每三個月復蘇一次，檢測細胞原特性是否改變。第四十一頁，共六十四頁。精選ppt細胞(xìbāo)凍存步驟

取生長對數(shù)期的細胞消化成細胞懸離心(líxīn)細胞記數(shù)2.5x106/ml凍存液加含10%DMSO凍存液熔封置4度數(shù)小時，負20度過夜或-70°C放置2-3h移入液氮罐中記錄第四十二頁，共六十四頁。精選ppt細胞(xìbāo)復蘇步驟取出安瓶立即放入37°C水中消毒安瓶開封后將細胞移入離心(líxīn)管中加培養(yǎng)液離心(líxīn)記數(shù)接種培養(yǎng)瓶培養(yǎng)第四十三頁，共六十四頁。精選ppt4.3培養(yǎng)(péiyǎng)細胞的運輸冷凍儲存運輸，即利用特殊容器內(nèi)盛液氮或干冰凍存充液法：（1）選擇生長(shēngzhǎng)狀態(tài)良好的細胞。一般以生長(shēngzhǎng)1/3~1/2瓶底壁為宜，換新液，保留微量空氣，擰緊瓶蓋（2）用棉花等做防震防壓處理第四十四頁，共六十四頁。精選ppt5細胞培養(yǎng)污染(wūrǎn)的檢測和排除培養(yǎng)細胞的污染(wūrǎn)概念包括所有混入培養(yǎng)環(huán)境中對細胞生存生存有害的成份和造成細胞不純的異物（真菌、細菌、病毒和支原體）、化學物質(zhì)及細胞第四十五頁，共六十四頁。精選ppt微生物污染(wūrǎn)的途徑空氣：一般培養(yǎng)室環(huán)境(huánjìng)中每立方米含菌數(shù)不應超過1~5個器材：CO2溫箱操作血清組織樣本第四十六頁，共六十四頁。精選ppt微生物污染(wūrǎn)的檢測真菌污染細菌污染支原體污染：可做如下(rúxià)檢測（1）相差顯微鏡檢測（2）熒光染色法（3）電鏡檢查（4）DNA分子雜交或支原體培養(yǎng)等方法第四十七頁，共六十四頁。精選ppt微生物污染(wūrǎn)的防治防止的關(guān)鍵在于嚴格無菌操作，把好每一個關(guān)口，盡可能禁止其它污染的物品(wùpǐn)進入培養(yǎng)操作環(huán)節(jié)：第四十八頁，共六十四頁。精選ppt微生物污染(wūrǎn)的防治抗生素：一般用常用量的5~10倍作沖擊療法。用藥24~48h后，再換常規(guī)培養(yǎng)液。加溫處理：根據(jù)支原體對熱敏感的特點，將受支原體污染的細胞放置在41°C作用5~10h，最長不超過18h，以殺滅支原體。動物體內(nèi)接種：將支原體污染的細胞接種在同種動物的皮下或腹腔(fùqiāng)，借動物體內(nèi)的免疫系統(tǒng)消滅支原體。待一定時間后取出細胞，做原代培養(yǎng)再進行繁殖。第四十九頁，共六十四頁。精選ppt細胞交叉(jiāochā)污染有效防止細胞交叉污染：所有(suǒyǒu)器具要嚴格區(qū)分不要觸及培養(yǎng)液瓶瓶口細胞系都要在早期留有充足的凍存儲備，可以復蘇早期凍存細胞使用。第五十頁，共六十四頁。精選ppt流式細胞儀分離法流式細胞儀可根據(jù)細胞核酸含量、某些物質(zhì)含量或細胞結(jié)構(gòu)大小等參數(shù)(cānshù)來將細胞分離成不同的群體。第五十一頁，共六十四頁。精選ppt培養(yǎng)(péiyǎng)細胞生長狀態(tài)的觀察貼附生長型為能附著(fùzhuó)于底物表面生長的細胞，懸浮生長型懸浮狀態(tài)即可生長，如血、骨髓脾細胞。第五十二頁，共六十四頁。精選ppt培養(yǎng)(péiyǎng)細胞的生長特性貼附：附著于底物如其它細胞(xìbāo)、膠元、玻璃或塑料，促細胞(xìbāo)附著物質(zhì)如基膜素、纖維連接素、膠元、血清擴展因子可能參加細胞(xìbāo)的粘附過程。接觸抑制：當兩個細胞相互接觸時，細胞不再移動，細胞膜皺褶樣活動停止。密度依賴性：細胞稀少時生長迅速，融合成片后，分裂停止。第五十三頁，共六十四頁。精選ppt常規(guī)(chángguī)觀察需每天觀察細胞生長過程(guòchéng)中出現(xiàn)的變化：1.培養(yǎng)液的顏色與透明度2.細胞形態(tài)變化3.細胞生長狀態(tài)4.微生物污染第五十四頁，共六十四頁。精選ppt細胞形態(tài)(xíngtài)變化的觀察相差顯微鏡：利用光通過不同物質(zhì)時的折射和物體厚度差別，產(chǎn)生衍射而引起光程改變(gǎibiàn)，產(chǎn)生相位差的特性，用于觀察培養(yǎng)細胞的附著、貼壁、伸展、移動、有絲分裂等形態(tài)活動。

狀態(tài)好的細胞透明度大，折光性強，輪廓清楚，分裂期細胞多見。

狀態(tài)差的細胞，失去原來的特點，胞質(zhì)出現(xiàn)空泡、顆粒，細胞變形，出現(xiàn)死亡。第五十五頁，共六十四頁。精選ppt細胞(xìbāo)計數(shù)它是了解細胞生長(shēngzhǎng)狀態(tài)的量化指標。制備細胞懸液，密度不低于10000細胞/ml，用10x物鏡觀察計數(shù)板四角大方格的細胞數(shù)計數(shù)：細胞數(shù)/ml原液＝（4大格細胞數(shù)之合/4）X10000注意：細胞分散均勻制成單個細胞懸液。第五十六頁，共六十四頁。精選ppt活細胞(xìbāo)的染料排除檢測法細胞(xìbāo)損傷或死亡時，細胞(xìbāo)膜通透性發(fā)生變化，某些染料可穿透變性的細胞(xìbāo)膜，與解體的DNA結(jié)合，使其著色，而活細胞能排出進入細胞內(nèi)的染料，或阻止這類染料進入細胞內(nèi)，因而不易著色。借此可以鑒別死活細胞。第五十七頁，共六十四頁。精選ppt細胞(xìbāo)活力測定的MTT比色法原理：活細胞的線粒體脫氫酶能將染料MTT（二甲基噻唑二笨基四唑溴鹽）轉(zhuǎn)變?yōu)椴豢扇苄缘淖仙滋骖w粒，后者被酸性異丙醇溶解后所呈現(xiàn)的色度(sèdù)（用OD值表示）反映出生活細胞的代謝水平。死亡細胞則無此酶活性。第五十八頁，共六十四頁。精選ppt細胞培養(yǎng)技術(shù)的商業(yè)化：對于生物技術(shù)所使用的各種細胞株的價值，很難作出評價。1998年，美國市場就達3.5-4億美元，而且還以6-8%的速度(sùdù)在增長。下邊介紹幾家美國細胞株供應公司和機構(gòu)。第五十九頁，共六十四頁。精選ppt美國(měiɡuó)細胞株供應公司和機構(gòu)名稱網(wǎng)址

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