紫外可見光分光光度法

關于紫外可見光分光光度法第1頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三4.1.1方法的特點

1.靈敏度高

通常，待測物質(zhì)的含量1～10－5％時，能夠用分光光度法準確測定。所以它主要用于測定微量組分。

2.應用廣泛

幾乎所有的無機離子和許多有機化合物可以用分光光度法進行測定。如土壤中的氮、磷以及植物灰、動物體液中各種微量元素的測定。

第2頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三3.操作簡便、迅速、儀器設備不太復雜

若采用靈敏度高、選擇性好的有機顯色劑，并加入適當?shù)难诒蝿话悴唤?jīng)過分離即可直接進行分光光度法測定、其方法的相對誤差通常為5～10％，其準確度雖不及重量分析法和容量法，但對于微量組分的測定，結果還是滿意的。第3頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三4.2.1顏色的產(chǎn)生4.2吸光光度法的基本原理第4頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三4.2.2電磁波和能量第5頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三第6頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三

光的波長λ(cm)、頻率(Hz)，它們與光速c的關系是：4.2.3光的基本性質(zhì)

在真空介質(zhì)中，光速為2.9979×1010cm/s。單個光子的能量E與上述三要素的關系是：E－－光子的能量，J；h－－普朗克常數(shù)（6.625×10－34J·s）第7頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三4.2.4溶液顏色與光吸收的關系

光波是一種電磁波。電磁波包括無線電波、微波。紅外光、可見光、紫外光、x射線等。如果按照其頻率或波長的的大小排列，可見光只是電磁波中一個很小的波段。見表12－1第8頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三第9頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三

有色物質(zhì)的不同顏色是由于吸收了不同波長的光所致。溶液能選擇性地吸收某些波長的光，而讓其他波長的光透過，這時溶液呈現(xiàn)出透過光的顏色。透過光的顏色是溶液吸收光的互補色。有色溶液對各種波長的光的吸收情況，常用光吸收曲線來描述。將不同波長的單色光依次通過一定的有色溶液，分別測出對各種波長的光的吸收程度（用字母A表示）。以波長為橫坐標，吸光程度為縱坐標作圖，所得的曲線稱為吸收曲線或吸收光譜曲線。第10頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三能復合成白光的兩種顏色的光叫互補色光。物質(zhì)所顯示的顏色是吸收光的互補色。第11頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三KMnO4的顏色及吸收光譜第12頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三葉綠素的結構和吸收光譜第13頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三一個新配合物的吸收

光譜第14頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三4.3光吸收基本定律

當一束平行的單色光照射均勻的有色溶液時，光的一部分被吸收，一部分透過溶液，一部分被比色皿的表面反射。如果人射光的強度為I0，吸收光的強度為Ia，透過光的強度為It，反射光的強度為Ir，則:

I0＝Ia＋It＋Ir

在吸光光度法中，由于采用同樣質(zhì)料的比色皿進行測量，反射光的強度基本上相同，其影響可以相互抵消，上式可簡化為:

I0＝Ia＋It

第15頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三

透過光的強度It；與入射光的強度Io比之比稱為透光度或透光率，用T表示。

T＝It/Io一束單色光通過溶液后，由于溶液吸收了一部分光能，光的強度就要減弱。若溶液的濃度不變，液層越厚，透過光的強度越小，光線減弱的程度越大。如果將液層分成許多無限小的相等的薄層，其厚度為db。則dI應與db及I成正比，即－dI∝Idb，從而，－dI/I=k1db，積分此式，得：動畫1.朗伯定律第16頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三將上式變成常用對數(shù)，得上式稱為朗伯定律。如用A=lg(I0/It)或lg(1/T),則A稱為吸光度。第17頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三

例1.有一單色光通過厚度為1cm的有色溶液,其強度減弱20%。若通過5cm厚度的相同溶液,其強度減弱百分之幾?

解：lgT1

c1

─────=───,lgT25c1

lgT2=5lgT1=5×lg0.80=-0.485

T2=32.7%,即減弱67.3%第18頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三

當一束單色光通過液層厚度一定的溶液時，溶液的濃度愈大，光線強度減弱愈顯著。若有色溶液的濃度增加dc，入射光通過溶液后，強度的減弱-dI與人射光強度I及dc成正比，即

-dI=k3Idc，或-dI/I=k3dc，積分，可得到:通常稱比耳定律。動畫2.比耳定律第19頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三

例2.一符合比爾定律的有色溶液，當濃度為c時，透射比為T，若其它條件不變，濃度為c/3時，T為_________，濃度為2c時，T為__________。解:

T1/3

T2

這說明濃度與透射比T

的是指數(shù)關系。第20頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三3．朗伯一比耳定律

如果溶液濃度和液層厚度都是可的，就要同時考慮溶液濃度c和液層厚度b對吸光度的影響。為此，將朗伯和比耳公式和合并，得到即通常所稱的朗伯一比耳定律。第21頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三4．吸光系數(shù)、摩爾吸光系數(shù)和桑德爾靈敏度

在朗伯-比耳公式，k值決定于c，b所用的單位，它與入射光的波長及溶液的性質(zhì)有關。當濃度c以g·L-1、液層厚度b以cm表示時，常數(shù)k是以a表示，此時稱為吸光系數(shù)，單位為L·g-1·cm-1。朗伯－比耳公式可表示為:

A＝abc

若b以cm為單位，c以mol·L-1為單位時，則將k稱為摩爾吸光系數(shù)，以符號ε表示，其單位為L·mol-1cm-1。ε的物理意義表達了當吸光物質(zhì)的濃度為1mol·L-1，液層厚度為1cm時溶液的吸光度。在這種條件下上式可改寫為:A=εbc第22頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三

摩爾吸光系數(shù)是有色化合物的重要特性。ε

愈大，表示該物質(zhì)對某波長的光吸收能力愈強，因而光度測定的靈敏度就越高。ε的值，不能直接取1mol/L這樣高濃度的有色溶液來測量，而只能通過計算求得。由于溶液中吸光物質(zhì)的濃度常因離解、聚合等因素而改變。因此，計算ε

時，必須知道溶液中吸光物質(zhì)的真正濃度。但通常在實際工作中，多以被測物質(zhì)的總濃度計算，這樣計算出的ε

值稱為表觀摩爾吸光系數(shù)。文獻中所報道的ε

值就是表觀摩爾吸光系數(shù)值。第23頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三桑德爾（Sandell)靈敏度

桑德爾靈敏度又叫桑德爾指數(shù)，用S表示。在分光光度分析中常常使用。桑德爾靈敏度規(guī)定儀器的檢測極限為A=0.001時，單位截面積光程內(nèi)所能檢測出被測物質(zhì)的最低含量，以μg/cm2表示。S與ε的關系可如下推導：A=0.001=bcε，即

cb=0.001/ε

c為mol/1000cm3;b為cm,故cb為單位截面積光程內(nèi)的物質(zhì)量，即mol/1000cm2。如果cb乘以被測物質(zhì)的摩爾質(zhì)量M，就是單位截面積光程內(nèi)被測物質(zhì)的質(zhì)量，即為S，所以,S=cb/1000×M×106=cbM×103μg/cm2，代入cb后,

第24頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三5.偏離朗伯－比耳定律的原因

朗伯－比耳定律是吸光光度分析的理論基礎、在實際應用時，通常是使液層厚度保持不變，然后測定一系列濃度不同的標準溶液的吸光度，根據(jù)A=kbc=k’c關系式，以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標作圖，應得到一通過原點的直線，稱為標準曲線或工作曲線。但是，在實際工作中，當有色溶液的濃度較高時，往往不成直線，這種現(xiàn)象稱為偏離朗伯－比耳定律。見圖12－8，第25頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三

引起偏離朗伯－耳定律的原因主要有以下幾個方面：

(1).由于入射光不是單色光而引起的偏離

朗伯－比耳定律只適用于單色光。但實際上單波長的光不能得到。目前各種方法所得到的入射光是具有一定波長范圍的波帶，而非單色光。因而發(fā)生偏離朗伯一比耳定律的現(xiàn)象。單色光的純度愈差，吸光物質(zhì)的濃度愈高，偏離朗伯-比耳定律的程度愈嚴重。在實際工作中，若使用精度較高的分光光度計，可獲得較純的單色光。

(2).由于介質(zhì)的不均勻性引起的偏離

當被測溶液是膠體溶液、懸濁液或乳濁液時，入射光通過溶液后除一部分被吸收外，還有一部分因溶液中存在微粒的散射作用而損失，并使透光度減小。而當膠體或其他微粒凝聚沉淀時，又會使溶液吸光度下降。第26頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三(3).溶液中的化學變化引起的偏離

溶液中的化學變化如締合、離解、溶劑化、形成新的化合物、互變異構等，使吸光度不隨溶液濃度而成正比地改變，而導致偏離朗伯－比耳定律。

例如，重鉛酸鉀在弱酸性介質(zhì)中有如下平衡：

Cr2O72-+H2O2HCrO4-

在450nm波長處測量不同濃度重鉻酸鉀溶液的吸光度。由于在濃度低時重鉻酸根的離解度大，而濃度高時離解度小，同時由于鉻酸氫根離子（HCrO4-）的摩爾吸光系數(shù)比重鉻酸根離子的摩爾吸光系數(shù)要小得多，因此低濃度時重鉻酸根離子的吸光度降低十分顯著，這就使工作曲線偏離朗伯和耳定律。第27頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三4.4光度分析的方法和儀器4.4.1光度分析的方法

1.目視比色法 用眼睛觀察、比較溶液顏色深度以確定物質(zhì)含量的方法稱為目視比色法。將一系列不同量的標準溶液依次加入各比色管中，再分別加入等量的顯色劑和其他試劑，并控制其他實驗條件相同，最后稀釋至同樣體積，配成一套顏色逐漸加深的標準色階。將一定量的被測溶液置于另一比色管中，在同樣條件下進行顯色，并稀釋至同樣體積，從管口垂直向下（有時由側(cè)面）觀察顏色。如果被測溶液與標準系列中某溶液的顏色相同，則被測溶液的濃度就等于該標準溶液的濃度。如果被測試液濃度介于相鄰兩種標準溶液之間，則試液的濃度就介于這兩個標準溶液濃度之間。第28頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三2．標準曲線法

根據(jù)朗伯－比耳定律，保持液層厚度，入射光波長和其它測量條件也不變，則在一定濃度范圍內(nèi)，所測得吸光度與溶液中待測物質(zhì)的濃度成正比。因此，配制一系列已知的具有不同濃度的標準溶液，分別在選定波長處測其吸光度A，然后以標準溶液的濃度c為橫坐標，以相應的吸光度A為縱坐標，繪制出A－c關系曲線。如果符合光的吸收定律，則可獲得一條直線，稱為標準曲線或稱工作曲線。在相同條件下測量樣品溶液的吸光度，就可以從標準曲線上查出樣品的濃度。Ac標準工作曲線動畫第29頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三3.加入標準法

所謂的加入標準法，即在一定濃度的試樣溶液測定吸光度A0后，加入合適濃度的標準溶液，再測吸光度A1，或再加幾次標準溶液，得A2,A3…吸光度，計算或作圖外推求試樣濃度的方法。即：

A0=kC樣；A1=k(C樣＋C標）設試樣體積為V0;加入的標準溶液體積為V標，則：A1=k(C樣V0+C標V標)/(V0+V標），聯(lián)解方程可求出C樣?；蛴肁對C標作圖，外推求出C樣。第30頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三4.二元混合組分的測定

混合溶液里兩組分的測定有如圖12－5的三種情況：

（a）若1和2兩組分的最大吸收峰互不重合，而且在1組分的最大吸收波長λ1處，2組分沒有吸收；或在2組分的最大吸收波長λ2處，1組分無吸收。這樣比較簡單，按單組分測定方法測1和2兩組分即可。（b）若1和2組分在混合溶液中的吸光光譜曲線如圖12－5(b)所示，則當1和二混合在一起時，在1組分的最大吸收波長處，2組分無吸收，所以只需在λ1處測定1組分。但在λ2處所測定吸光度是1和2的總吸收，因此必須事先測得1組分在λ2的ε，先從λ1出1組分，再從疊加處得的和量中減去組分1。

第31頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三

(c)這種情況比較復雜，要解一個一元二次方程。第32頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三第33頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三5.三元絡合物的應用

所謂的三元絡合物是指由三個組分所形成的絡合物。目的是提高靈敏度和選擇性。例：[Co(H2O)3(NH3)3]2+

淡紅色

[Co(H2O)2(NH3)4]2+

暗紅色

[Co(H2O)(NH3)5]2+

紅色

[Co(NH3)6]2+

黃色第34頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三4.4.2分光光度計第35頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三停留分光光度計第36頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三A原理第37頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三第38頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三光柵和棱鏡分光原理光柵分光動畫棱鏡分光動畫第39頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三儀器光通路圖第40頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三B.分光光度計的類型動畫第41頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三雙光束光度計動畫示意動畫第42頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三雙波長光度計光路示意圖動畫第43頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三C.光電轉(zhuǎn)換器

I.定義光電轉(zhuǎn)換器是將光輻射轉(zhuǎn)化為可以測量的電信號的器件。

S=kP+kd=kP

k:校正靈敏度；P：輻射功率；kd:暗電流（可通過線路補償，使為0）II.理想的光電轉(zhuǎn)換器要求靈敏度高；S/N大；暗電流??；響應快且在寬的波段內(nèi)響應恒定。第44頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三第45頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三1.硒光電池+-SeFe(Cu)h玻璃Ag(Au)透明膜-收集極塑料--(當外電阻<400，i=10-100A)優(yōu)點：光電流直接正比于輻射能；使用方便、便于攜帶（耐用、成本低）；缺點：電阻小，電流不易放大；響應較慢。只在高強度輻射區(qū)較靈敏；長時間使用后，有“疲勞”(fatigue)現(xiàn)象。第46頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三2.真空光電管90VDC直流放大陰極R-+光束e陽極絲（Ni）抽真空

陰極表面可涂漬不同光敏物質(zhì)：高靈敏(K,Cs,Sb其中二者)、紅光敏(Na/K/Cs/Sb,Ag/O/Cs)、紫外光敏、平坦響應(Ga/As，響應受波長影響小)。產(chǎn)生的光電流約為硒光電池的1/10。優(yōu)點：阻抗大，電流易放大；響應快；應用廣。缺點：有微小暗電流（Darkcurrent，40K的放射線激發(fā)）。第47頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三3.光電倍增管（photomultipliertube,PMT）

石英套光束1個光子產(chǎn)生106~107個電子柵極，Grill陽極屏蔽光電倍增管示意圖共有9個打拿極(dynatron)，所加直流電壓共為9010VPMT動畫第48頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三900Vdc90V123456789陽極陰極石英封讀出裝置R光電倍增管（PMT）電路圖優(yōu)點：高靈敏度；響應快；適于弱光測定，甚至對單一光子均可響應。缺點：熱發(fā)射強，因此暗電流大，需冷卻（-30oC)。不得置于強光(如日光)下，否則可永久損壞PMT！第49頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三4.硅二極管p區(qū)n區(qū)pn結p區(qū)n區(qū)(反向偏置)耗盡層空穴電子

反向偏值—耗盡層(depletionlayer)—pn結電導趨于0(i=0)；光照—耗盡層中形成空穴和電子—空穴移向p區(qū)并湮滅—外加電壓對pn“電容器”充電—產(chǎn)生充電電流信號(i0)。特點：靈敏度介于真空管和倍增管之間。第50頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三5.光電二極管陣列，photodiodearray(PDA)SiO2窗p

型硅n型硅基pnpnpnpnpnpn0.025mm2.5mm側(cè)視(crosssection)頂視(topview)光束說明：在一個硅片上，許多pn結以一維線性排列，構成“陣列”；每個pn結或元（element，64-4096個）相當于一個硅二極管檢測器；硅片上布有集成線路，使每個pn結相當于一個獨立的光電轉(zhuǎn)換器；硅片上置于分光器焦面上，經(jīng)色散的不同波長的光分別被轉(zhuǎn)換形成電信號；實現(xiàn)多波長或多目標同時（simultaneously）檢測。PDA在靈敏度、線性范圍和S/N方面不如光電倍增管。應用較少。第51頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三6.電荷轉(zhuǎn)移器件,CTDSiO2絕緣體摻雜n區(qū)襯基-5V-10V電極hCTD側(cè)視圖（一個電荷轉(zhuǎn)移單元或像素）光子—空穴—空穴聚集（金屬-SiO2電容)a行轉(zhuǎn)換器單元b個檢測單元/行=ab個像素=二維排列于一片硅片上；類似膠片上的信息存貯；測量兩電極間電壓變化—CID使電荷移至電荷放大器并測量—CCD第52頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三襯基5V10Vh-5V-10Ve-v1n型Si襯基5V10V+5V+10V襯基5V10V-10Vv1n型Sin型Siv2襯基5V10V+10Vn型Si電荷形成并聚集測量V1測量V2電荷重新注入(1)CID破壞性讀出非破壞性讀出第53頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三(2)CCD512320320512pixel高速寄存器123三相時鐘輸出（存貯）h金屬基電極(electrode)SiO2絕緣體(insulator)p型硅----勢阱(potentialwell)On-chippreamp1234第54頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三CCD光電轉(zhuǎn)換演示動畫CCD動畫第55頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三CID與CCD之比較

與PDA相比，CTD最大的優(yōu)勢在于其二維特性，可作為影像檢測器，在電視及航空等領域有廣泛應用。ChargeinjectiondeviceChargecoupleddevice第56頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三4.5顯色反應和顯色條件4.5.1分光光度法對顯色反應的要求在光度分析法中，使被測物質(zhì)在試劑（顯色劑）的作用下形成有色化合物的反應稱為顯色反應。對于顯色反應，一般必須滿足下列要求：

（1）選擇性好。即在顯色條件下，顯色劑盡可能不要與溶液中其他共存離子顯色，如果其他離子也和顯色劑反應，干擾離子的影響應容易消除。

第57頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三(2)靈敏度高。顯色反應的靈敏度高，才能測定低含量的物質(zhì)。靈敏度可從摩爾吸光系數(shù)來判斷，但靈敏度高的顯色反應，不一定選擇性好。在實踐中應全面考慮。（3）顯色產(chǎn)物應具有固定的組成，符合一定的化學式。對于形成不同配合比的配合物的顯色反應，需要嚴格控制實驗條件，使生成一定組成的配合物，以提高其重現(xiàn)性。（4）顯色產(chǎn)物的化學性質(zhì)應該穩(wěn)定。在測量過程中溶液的吸光度應改變很小。

(5）顯色產(chǎn)物與顯色劑之間的顏色差別要大。第58頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三4.5.2顯色條件

1.顯色劑的用量

被測物質(zhì)與顯色劑的反應可用下列一般式表示：

M十R＝MR

（被測物）（顯色劑）（有色配合物）為了使顯色反應盡可能完全，一般應加入過量的顯色劑。如果配合物穩(wěn)定度高，而且在一定條件下能保持穩(wěn)定，顯色劑不必大量過量。在分析實踐中，由于待測物質(zhì)的濃度未知，稍過量的顯色劑是必要的。第59頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三

當生成不太穩(wěn)定的有色配合物時，必須加入相當過量的試劑，以保證獲得足夠的有色配合物并有可觀的吸光度。有時顯色劑的用量過大，反而會引起副反應，對光度測定不利。應嚴格控制顯色劑的用量，以保證得到正確的結果。通常，顯色劑的用量是根據(jù)實驗結果來確定的。第60頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三2.溶液的酸度

(1)

酸度對顯色劑濃度的影響

所用的顯色劑不少是有機弱酸（以HR表示），酸度提高則平衡傾向于生成HR，使R的實際濃度降低，不利于顯色反應的進行。因此。顯色時溶液的酸度不能高于某一限度。此外，在不同的酸度下，R的濃度不同，有時可引起有色配合物配位數(shù)的改變。

(2）酸度對被測離子形態(tài)的影響當被測離子是容易水解的金屬離子時，若酸度低于某一限度，被測離子形成羥基配合物、多核羥基配合物、堿式鹽或氫氧化物沉淀，不利于光度分析。

第61頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三（3）對顯色劑顏色的影響許多有機顯色劑具有酸堿指示劑的性質(zhì)，隨著pH的改變，顯出不同的顏色，在選擇酸度時必須考慮這種情況。例如

H2RH++HRH＋R2-

（黃色）（橙色）（紅色）pH6.9pH12.4第62頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三

3．顯色時間

有些顯色反應能瞬間完成，且有色化合物的顏色很快達到穩(wěn)定狀態(tài)，在較長時間內(nèi)保持不變；有些顯色反應雖能迅速完成，但由于空氣的氧化、光的照射或其他原因使有色化合物的顏色逐漸減退；有些顯色反應需要一定時間才能完成。

4．顯色溫度

（1）對顯色反應速度的影響。反應速度常隨溫度的升高而加快。（2）由于溫度的升高可能導致某些有色配合物發(fā)生分解或氧化還原反應，因而會使有色配合物破壞而不利于光度測定。

第63頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三

（3）溫度升高會引起有色配合物離解度的增大，使其穩(wěn)定性降低而導致吸光度下降。（4）溫度變化會使有色配合物的摩爾吸光系數(shù)改變，從而使吸光度發(fā)生改變。必須指出，在分析實踐中，并不是每一顯色反應都同時存在上述四個方面的影響。通過繪制吸光度一溫度曲線可以確定反應的適宜溫度。

5．溶劑

通常，水溶性有色配合物因加入適當有機溶劑，使溶液的介電常數(shù)降低，使配合物離解度減小，或穩(wěn)定性增大。有時，可增大速度。第64頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三4.6儀器測量誤差和測量條件4.6.1儀器測量誤差

在分光光度分析法中，使用任何光度計進行測量時，都會產(chǎn)生一定的誤差。這些誤差可能來自光源的電壓不穩(wěn)定，光電元件靈敏度的變化和儀器刻度讀數(shù)不準確等。如果測量時透光率讀數(shù)的絕對誤差是ΔT，對于同一臺儀器，它基本上是常數(shù)。但由于吸光度與透光率之間是負對數(shù)關系，在不同A值時，同樣的ΔT的讀數(shù)誤差所引起的吸光度的絕對誤差ΔA是不同的。A值越大，由ΔT引起的ΔA也越大。第65頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三

根據(jù)朗伯－比耳定律,由ΔA引起的被測物質(zhì)濃度的誤差Δc為

ΔA＝k′Δc

再是根據(jù)吸收公式微分，可得：儀器測量誤差ΔT引起的濃度測量的相對誤差為：第66頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三設ΔT＝0.01，計算不同T值與Δc/c的關系，可得到下圖：lnT=-1lgT=-0.434T=0.368這時誤差最小動畫第67頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三4.6.2測量條件的選擇

除選擇適宜的顯色條件外，還應當選擇合適的測量條件。主要的測量條件包括入射光波長、吸光度范圍和空白溶液等。下面將分別討論。

1．選擇入射光波長入射光的波長對測定結果的靈敏度和準確度都有很大的影響。選擇時，應先繪制有色溶液的光吸收曲線。然后選用該溶液的最大吸收波長來進行測量。如果試液中某種組分在同樣的波長也有吸收，則對測定有干擾，這時，可選另一靈敏度稍低．但能避免干擾的入射光波長。

第68頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三

2．控制吸光度的范國由儀器測量誤差的討論中可知，為了使測定結果獲得較高的準確度，應該控制溶液的吸光度在一定的范圍內(nèi)，一般要求是0.15～0.8?？刂莆舛确秶姆椒ㄊ歉淖儽壬蟮暮穸?，也可以改變?nèi)芤旱臐舛然蛟嚇拥馁|(zhì)量。

3．選擇適當?shù)膮⒈热芤簠⒈热芤河址Q空白溶液。在光度分析法中，利用參比溶液調(diào)節(jié)儀器的吸光度零點、消除顯色溶液中其他有色物質(zhì)的干擾，抵消比色皿壁及溶液對入射光的反射和吸收的影響等。第69頁，講稿共80頁，2023年5月2日，星期三4.6.3共存離子的影響及其消除

1.共存離子與顯色劑生成有色化合物，使測定結果偏高。

2.共存離子與被測組分或顯色劑生成無色化合物或發(fā)生其它反應，降低了被測組分或顯色劑的濃度，使測定結果偏低。

3.共存離子本身具有顏色。消除共存離子的干擾主要有以下幾種方法：