動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)與核移植技術(shù)

動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)與核移植技術(shù)第1頁(yè)，課件共25頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月動(dòng)物細(xì)胞工程通常采用的技術(shù)手段

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體動(dòng)物細(xì)胞核移植是其他動(dòng)物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)。第2頁(yè)，課件共25頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)第3頁(yè)，課件共25頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月請(qǐng)思考：1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的概念是什么？該技術(shù)實(shí)施的原理是什么

2、為什么要對(duì)取出的動(dòng)物組織進(jìn)行處理，使細(xì)胞分散？那么要怎樣處理呢？

3、用胰蛋白酶對(duì)動(dòng)物組織進(jìn)行處理說(shuō)明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是什么？用胃蛋白酶可以嗎？

4、胰蛋白酶真的不會(huì)把細(xì)胞消化掉嗎？為什么？

5、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的兩個(gè)重要的生長(zhǎng)特性是什么？

6、理解概念：原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。第4頁(yè)，課件共25頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月思考：該技術(shù)實(shí)施的原理是什么？一.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程思考：

1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的概念是什么？

從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后在適宜的培養(yǎng)基中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。

細(xì)胞增殖（有絲分裂）。為什么呢？分化程度低，增殖能力強(qiáng)，易于培養(yǎng)。取材：動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物器官、組織第5頁(yè)，課件共25頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月思考：

3、為何培養(yǎng)過(guò)程要將組織分散成單個(gè)細(xì)胞的呢？

成塊的組織細(xì)胞靠在一起,彼此限制了細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，也不利于細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和代謝廢物的排出。思考：

4、如何將動(dòng)物組織分散成單個(gè)的細(xì)胞呢？將材料剪碎用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）

處理單個(gè)細(xì)胞此過(guò)程稱為：消化第6頁(yè)，課件共25頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月將材料剪碎用胰蛋白酶（或膠原蛋白酶）

處理單個(gè)細(xì)胞思考：

5、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可說(shuō)明細(xì)胞間的物質(zhì)主要是什么成份？思考：

6.能夠用胃蛋白酶代替胰蛋白酶嗎？

為什么？使得成塊的組織分散蛋白質(zhì)不能胃蛋白酶需要的PH值與這兩種酶差異太大胰蛋白酶真的不會(huì)把細(xì)胞消化掉嗎？第7頁(yè)，課件共25頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月單個(gè)細(xì)胞細(xì)胞懸液用培養(yǎng)液稀釋制成10代細(xì)胞50代細(xì)胞無(wú)限傳代動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)特點(diǎn)：細(xì)胞貼壁、接觸抑制原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞系遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變第8頁(yè)，課件共25頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月過(guò)程：將材料剪碎用胰蛋白酶處理形成單個(gè)細(xì)胞取動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物組織、器官制成細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液培養(yǎng)10代細(xì)胞50代細(xì)胞無(wú)限傳代原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞系遺傳物質(zhì)未改變遺傳物質(zhì)已改變區(qū)別兩種用胰蛋白酶處理第9頁(yè)，課件共25頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月思考：動(dòng)物細(xì)胞離開(kāi)了動(dòng)物體，要正常生長(zhǎng)需要哪些條件？第10頁(yè)，課件共25頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境

（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液）2、營(yíng)養(yǎng)（葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、微量元素、動(dòng)物血清、血漿等。）3、溫度和PH36.5+0.5度PH為7.2-7.44、氣體環(huán)境：

O2和CO2（95%空氣和5%CO2

）提供有利于細(xì)胞生長(zhǎng)增殖所需的激素、生長(zhǎng)因子或提供合成培養(yǎng)基所缺乏的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等。多數(shù)培養(yǎng)基靠碳酸氫鈉與CO2體系進(jìn)行緩沖，維持pH值二.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的條件第11頁(yè)，課件共25頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1、獲得細(xì)胞產(chǎn)物，如蛋白質(zhì)生物制品－病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。

2、應(yīng)用與基因工程。

3、獲得細(xì)胞用于檢測(cè)有毒物質(zhì)，判斷毒性。

4、為治療及預(yù)防疾病提供理論依據(jù)。三.動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用第12頁(yè)，課件共25頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月獲得細(xì)胞或細(xì)胞產(chǎn)物細(xì)胞的全能性細(xì)胞數(shù)目增多一般為植物體培養(yǎng)結(jié)果快速繁殖、培育脫毒作物等培養(yǎng)目的葡萄糖、動(dòng)物血清促生長(zhǎng)因子蔗糖、植物激素培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較第13頁(yè)，課件共25頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)第14頁(yè)，課件共25頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動(dòng)物

克隆就是無(wú)性繁殖，具體地說(shuō)，是指一個(gè)共同的祖先，通過(guò)無(wú)性繁殖的方法產(chǎn)生出來(lái)的一群遺傳特性相同的DNA分子、細(xì)胞或個(gè)體。a.分子水平上：b.細(xì)胞水平上：c.個(gè)體水平上：1.什么是克??？一般指DNA克隆。指一個(gè)單一的細(xì)胞分裂所形成的細(xì)胞群體。指基因型完全相同的兩個(gè)或一個(gè)群體。第15頁(yè)，課件共25頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2、克隆動(dòng)物能否用類似植物組織培養(yǎng)的方法獲得？為什么？目前不能。

因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞的全能性隨著分化程度的提高逐漸受到限制。目前，用動(dòng)物體細(xì)胞克隆的動(dòng)物，實(shí)際上是通過(guò)核移植來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

第16頁(yè)，課件共25頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)1.回憶克隆羊“多莉”的培育過(guò)程卵細(xì)胞Ａ母綿羊Ｂ母綿羊乳腺細(xì)胞核移植早期胚胎卵裂C母綿羊子宮胚胎移植多莉羊分娩妊娠融合后的卵細(xì)胞第17頁(yè)，課件共25頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（MⅡ卵母細(xì)胞）減數(shù)第二次分裂中期2.結(jié)合P48圖2-21，敘述克隆高產(chǎn)奶牛的培育過(guò)程。將供體細(xì)胞注入去核卵母細(xì)胞核移植胚胎移植供體細(xì)胞培養(yǎng)第18頁(yè)，課件共25頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1、對(duì)比多莉羊和課本高產(chǎn)奶牛的克隆過(guò)程，找出操作過(guò)程的不同點(diǎn)？2、討論分析上述哪一種措施更科學(xué)？并說(shuō)明理由？MⅡ卵母細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中含有的物質(zhì)更易支持胚胎的全程發(fā)育，用它作受體更容易成功。

將供體細(xì)胞注入受體細(xì)胞，使克隆動(dòng)物更像供體動(dòng)物，操作也方便。思考與討論：

（1）多莉克隆過(guò)程中受體細(xì)胞是去核卵細(xì)胞，高產(chǎn)奶?？寺∵^(guò)程中受體細(xì)胞是去核卵母細(xì)胞。

（2）多莉克隆過(guò)程是將供體細(xì)胞核注入受體細(xì)胞，而高產(chǎn)奶牛的克隆過(guò)程是將供體細(xì)胞注入受體細(xì)胞。第19頁(yè)，課件共25頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月１、在體細(xì)胞的細(xì)胞核移植到受體卵母細(xì)胞之前，為什么必須先去掉受體卵母細(xì)胞的核？

為使核移植動(dòng)物的核遺傳物質(zhì)全部來(lái)自有利用價(jià)值的動(dòng)物提供的細(xì)胞。２、用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用傳代10代以內(nèi)的細(xì)胞，為什么？10代以內(nèi)的細(xì)胞一般保持正常二倍體的核型，未發(fā)生突變。討論：3、體細(xì)胞核移植方法生產(chǎn)的克隆動(dòng)物是對(duì)體細(xì)胞供體動(dòng)物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎？為什么？

克隆動(dòng)物絕大部分DNA來(lái)自供體細(xì)胞核，但核外還有少部分DNA（如線粒體DNA）來(lái)自受體卵母細(xì)胞。不是第20頁(yè)，課件共25頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月動(dòng)物核移植

是將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核，移入一個(gè)已經(jīng)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中，使其重組并發(fā)育成為一個(gè)新的胚胎，這個(gè)新的胚胎最終發(fā)育為動(dòng)物個(gè)體。（克隆動(dòng)物）動(dòng)物核移植胚胎細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植第21頁(yè)，課件共25頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）體細(xì)胞核移植技術(shù)的應(yīng)用前景閱讀P49-501、畜牧業(yè)方面：2、醫(yī)藥衛(wèi)生方面：可以加速家畜遺傳改良的進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育。保護(hù)瀕危物種，增加其存活數(shù)量生產(chǎn)醫(yī)用蛋白質(zhì)組織器官的移植3、其他領(lǐng)域了解胚胎發(fā)育及衰老過(guò)程更好追蹤研究疾病的發(fā)展過(guò)程、治療疾病第22頁(yè)，課件共25頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（四）體細(xì)胞核移植技術(shù)存在的問(wèn)題1、成功率低2、克隆動(dòng)物存在健康問(wèn)題