玻璃器皿的清洗包扎及高壓蒸汽滅菌

玻璃器皿的清洗包扎及高壓蒸汽滅菌組員：孫中濤17徐州18孫洋20劉彩云19戚望平21

一、實驗目的1.掌握玻璃器皿的清洗與包扎技術。2.學習并掌握高壓蒸汽滅菌、干熱滅菌的基本原理和操作方法。二、實驗原理（1）滅菌是指殺死或消滅一定環(huán)境中的所有微生物，滅菌的方法分物理和化學滅菌法兩大類。本實驗主要介紹物理方法的一種，即加熱滅菌。

加熱滅菌包括濕熱和干熱滅菌兩種。通過加熱使菌體內

蛋白質凝固變性，從而達到殺菌目的。蛋白質的凝固變性與其自身含水量有關，含水量越高，其凝固所需要的溫度越低。在同一溫度下，濕熱的殺菌效力比干熱大，因為在濕熱情況下菌體吸收水分，使蛋白質易于凝固；同時濕熱的穿透力強，可增加滅菌效力。（2）高壓蒸汽滅菌法：高壓蒸汽滅菌用途廣，效率高，是微生物學實驗中最常用的滅菌方法。這種滅菌方法是基于水的沸點隨著蒸汽壓力的升高而升高的原理設計的。當蒸汽壓力達到1.05kg/cm2時，水蒸氣的溫度升高到121℃，經15～30min，可全部殺死鍋內物品上的各種微生物和它們的孢子或芽孢。一般培養(yǎng)基、玻璃器皿以及傳染性標本和工作服等都可應用此法滅菌。（3）干熱滅菌法：通過使用干熱空氣殺滅微生物的方法叫干熱滅菌。一般是把待滅菌的物品包裝就緒后，放入電烘箱中烘烤，即加熱至160～170℃維持1～2h。（4）火焰滅菌：直接用火焰灼燒滅菌，迅速徹底。對于接種環(huán)，接種針或其它金屬用具，可直接在酒精燈火焰上燒至紅熱進行滅菌。此外，在接種過程中，試管或三角瓶口，也采用通過火焰而達到滅菌的目的。四、操作方法玻璃器皿在滅菌前必須經正確包裹和加塞，以保證玻璃器皿于滅菌后不被外界雜菌所污染。1.將平皿用紙包扎好，以5～8個為一包；（一）、玻璃器皿的清洗包扎2、吸管應在管口約0.5厘米以下的地方塞入少許長約1.5厘米的棉花，以拉直的曲別針一端放在棉花的中心，輕輕捅入管口，松緊必須適中，松緊程度以吹氣時通氣順暢而不致下滑為準，管口外露的棉花纖維統(tǒng)一通過火焰燒去。然后，將吸管尖端放在4-5厘米寬的長條紙的一端約與紙條成45°角，折疊紙條，包住吸管尖端，然后將吸管卷入紙條內，末端剩余紙條折疊打結，待滅菌。包扎試管包扎完成3、三角瓶在棉塞與瓶口外再包以厚紙，用棉繩以活結扎緊，以防滅菌后瓶口被外部雜菌所污染；4、試管塞上棉花塞，多支扎成一捆外用牛皮紙或兩層舊報紙與細線包。高壓蒸汽滅菌鍋（二）、干熱滅菌將包扎好的試管、平皿、三角錐瓶放入干燥烘箱內，注意不要擺放太密，以免妨礙空氣流通；不得使器皿與烘箱的內層底板直接接觸。將烘箱的溫度升至160～170℃并恒溫1～2h，注意勿使溫度過高，超過170℃，器皿外包裹的紙張、棉花會被烤焦燃燒。如果是為了烤干玻璃器皿，溫度為120℃持續(xù)30分鐘即可。溫度降至60～70℃時方可打開箱門，取出物品，否則玻璃器皿會因驟冷而爆裂。（三）、高壓蒸汽滅菌

加水：打開滅菌鍋蓋，向鍋內加水到水位線。立式消毒鍋最好用已煮開過的水，以便減少水垢在鍋內的積存。注意水要加夠，防止滅菌過程中干鍋。裝料、加蓋：將待滅菌物品放好后，關閉滅菌器蓋，采用對角式均勻擰緊鍋蓋上的螺旋，使蒸汽鍋密閉，勿使漏氣。排氣：打開排氣口(也叫放氣閥)。用電爐加熱，待水煮沸后，水蒸氣和空氣一起從排氣孔排出，當有大量蒸汽排出時，維持5min，使鍋內冷空氣完全排凈。升壓、保壓和降壓：當鍋內冷空氣排凈時，即可關閉排氣閥，壓力開始上升。當壓力上升至所需壓力時，控制電壓以維持恒溫，并開始計算滅菌時間，待時間達到要求（一般培養(yǎng)基和器皿滅菌控制在121℃，20min）后，停止加熱，待壓力降至接近“0”時，打開放氣閥。注意不能過早過急地排氣，否則會由于瓶內壓力下降的速度比鍋內慢而造成瓶內液體沖出容器之外。五、思考題

（1）吸管在滅菌前應如何處理？

答：吸管應在管口約0.5厘米以下的地方塞入少許長約1.5厘米

的棉花，以拉直的曲別針一端放在棉花的中心，輕輕捅入管口，松緊必須適中，松緊程度以吹氣時通氣順暢而不致下滑為準，管口外露的棉花纖維統(tǒng)一通過火焰燒去。然后，將吸管尖端放在4-5厘米寬的長條紙的一端約與紙條成45°角，折疊紙條，包住吸管尖端，然后將吸管卷入紙條內，末端剩余紙條折疊打結，待滅菌。（2）高壓蒸汽滅菌開始之前