核酸與核苷類藥物概述及合成工藝

核酸與核苷類藥物概述及合成工藝第1頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月第一節(jié)概述一、核酸與核苷類藥物核酸與核苷類藥物是指具有藥用價值的核酸、核苷酸、核苷或者堿基天然的、類似物、衍生物及其聚合物作用：影響生物的蛋白質(zhì)合成和脂肪、糖類的代謝恢復(fù)正常代謝或干擾某些異常代謝用途：放射病、血小板減少癥、白細(xì)胞減少癥、急慢性肝炎、心血管疾病和肌肉萎縮、腫瘤、病毒病第2頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月核酸類物質(zhì)藥物一般可分為兩大類：一類具天然結(jié)構(gòu)的核酸類物質(zhì)，另一類是自然結(jié)構(gòu)堿基、核苷、核苷酸的結(jié)構(gòu)類似物或聚合物。第3頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月

前者是生物體合成原料或蛋白質(zhì)、脂肪、糖生物合成與降解以及能量代謝的輔酶，這一類藥物有助于改善機(jī)體的物質(zhì)代謝和能量平衡，加速受損組織的修復(fù)，促使缺氧組織恢復(fù)正常生理機(jī)能，臨床上已廣泛使用于放射病、血小板減少癥、白細(xì)胞減少癥、急慢性肝炎、心血管疾病、肌肉萎縮等病癥的治療，包括肌苷、輔酶A、GTP、CTP、UTP、ATP、腺苷、輔酶I、輔酶Ⅱ等，多數(shù)是生物體自身能夠合成的物質(zhì)，具有一定臨床功能，毒副作用小，基本都可經(jīng)微生物發(fā)酵或從生物資源中提取。

第4頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月后一類藥物是治療病毒感染性疾病、腫瘤的重要手段，也是產(chǎn)生干擾素、免疫抑制的臨床藥物。正式用于臨床的抗病毒核苷類藥物有三氮唑核苷、疊氮胸苷、阿糖腺苷等。第5頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月二、核酸與核苷的一般理化性質(zhì)核糖（核糖脫氧核糖）核苷嘌呤（腺嘌呤、鳥嘌呤）堿基核酸核苷酸嘧啶（胞、尿、胸腺嘧啶）（DNA、RNA）磷酸DNA和RNA是存在于細(xì)胞中的正常成分。DNA主要存在于細(xì)胞核中，少量（2%）存在于線粒體和葉綠體中；RNA主要存在于細(xì)胞質(zhì)中，少量（10%）存在于核仁、核漿和染色體中。核酸的含量與細(xì)胞大小無關(guān)，以生長旺盛的組織細(xì)胞中含量較多，如動物胰臟、脾臟、胸腺，植物的莖尖、根尖及各種分生組織等。第6頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)一些藥物的制備工藝及原理一、RNA的提取與制備

工業(yè)用RNA的提取（1）RNA及其工業(yè)來源：從微生物中提取RNA是工業(yè)上最實(shí)際和有效的方法。一些最常見的菌體含有豐富的核酸資源，如酵母、白地霉、多種抗菌素的菌絲體——青霉素，制霉菌素等菌體。通常在細(xì)菌中RNA占5％～25％，在酵母中占2.7％～15％，在霉菌中占0.7%～28％。第7頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月

在菌體內(nèi)RNA含量的變化受培養(yǎng)基組成影響，其中關(guān)鍵是銨離子濃度和磷酸鹽濃度。培養(yǎng)酵母菌體收率高，易于提取RNA。

很顯然在許多酵母中，早期細(xì)胞中的RNA含量高，其確切數(shù)值取決于碳、氮比例和培養(yǎng)基組成等。（2）高RNA含量酵母菌株的篩選

可以從自然界篩選到RNA含量高的酵母菌株，也可用誘變育種的方法提高酵母菌的RNA含量。第8頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月

稀堿法：是用氫氧化鈉溶液（1%），使細(xì)胞壁變性，使核酸從細(xì)胞內(nèi)釋放出來。需用酸中和PH7。然后除去菌體，將pH調(diào)至RNA的等電點(diǎn)（pH2.5），使RNA沉淀出來。上法的缺點(diǎn)是制得的RNAMr較低,(磷酸單脂酶、磷酸二脂酶降解RNA，90℃保持3－4h破壞酶)。

濃鹽法：是用高濃度鹽溶液（6%－8%）處理，同時加熱，以改變細(xì)胞壁的通透性，使核酸從細(xì)胞內(nèi)釋放出來。要避免分子降解，可采用苯酚法制備RNA。用苯酚處理生物材料，使蛋白質(zhì)變性，然后離心，上層水溶液內(nèi)含有全部RNA，可用乙醇沉淀出來。脫氧核糖核蛋白溶于濃鹽溶液1mol/L,不溶于0.14mol/L,而核糖核蛋白溶于0.14mol/L鹽溶液。

第9頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月（3）RNA的提取實(shí)例：

啤酒酵母是提取RNA的很好的資源。取100g壓榨啤酒酵母（含水份70%），加入230ml含NaOH3g的水，20℃以下緩慢攪拌30分鐘。用6mol／LHCl調(diào)至pH7，攪拌15分鐘，離心得清液255m1。冷至10℃以下，6mol／LHCl調(diào)pH2.5，置冷過夜，離心得RNAl.8g（純度80％）。第10頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月RNA提取實(shí)例：

[提取][中和]HCl[酸化、沉淀]HCl酵母提取液上清液RNA

NaOH、水pH7、離心pH2.5、離心第11頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月二、DNA的提取與制備

工業(yè)用DNA的提取

取新鮮冷凍魚精20kg，用絞肉機(jī)粉碎2次成漿狀，加入等體積水，攪拌均勻，傾入反應(yīng)鍋內(nèi)，緩慢攪拌，升溫至100℃，保溫15分鐘，迅速冷卻至20～25℃，離心除去魚精蛋白等沉淀物，獲得35L含熱變性DNA的溶液，經(jīng)精確測定DNA含量后直接可用于酶法降解生產(chǎn)脫氧核苷酸。如要制成固體狀DNA，在熱變性DNA溶液中逐漸加入等體積95％乙醇，離心可獲得纖維狀DNA，沉淀用乙醇、丙酮洗滌，減壓低溫干燥得DNA粗品，產(chǎn)品含熱變性DNA50％～60％。第12頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月工業(yè)用DNA的提取

[提取][熱變性][沉淀]乙醇魚精提取液纖維狀DNA

水、100℃

冷卻、離心70%--80%

（無生物活性）

15min

干燥粗品DNA（熱變性后無活性）第13頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月

具有生物活性DNA的制備動物內(nèi)臟（肝、脾、胸腺）加4倍重量生理鹽水經(jīng)組織搗碎機(jī)搗碎1分鐘，勻漿于2500r／pm離心30分鐘，沉淀用同樣體積的生理鹽水洗滌3次，每次洗后離心，將沉淀懸浮于20倍重量的冷生理鹽水中，再搗碎3分鐘，加入2倍量5％的（用45%乙醇作溶劑）十二烷基磺酸鈉，并攪拌2～3小時，在0℃2500r／pm離心，在上層液中加入等體積的冷95％乙醇，離心即可得到纖維狀DNA，再用冷乙醇和丙酮洗滌，減壓低溫干燥得粗品DNA。粗品DNA溶于適量蒸餾水，加入5％十二烷基磺酸鈉達(dá)1／10體積，攪拌1小時，經(jīng)5000r／pm離心1小時，清液中加入NaCl達(dá)1mol／L，再緩慢加入冷95%乙醇，DNA析出，經(jīng)乙醇、丙酮洗滌，真空干燥得具有生物活性的DNA（活性DNA制備需在0～3℃操作）。第14頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月生物活性DNA的制備

[提取]

[洗滌3次]5%SDS

動物內(nèi)臟沉淀沉淀上層液（肝、脾）生理鹽水生理鹽水[再搗碎]

離心、30min[沉淀][洗滌、干燥][提取]

纖維狀DNA粗品DNA上清液

95%乙醇冷乙醇、丙酮水、5%SDS

離心

[沉淀][洗滌、干燥]DNA沉淀活性DNANaCL、95%乙醇乙醇、丙酮第15頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月三、用酶解法、發(fā)酵法和半合成法制備核苷酸

1、酶解法及堿水解法制備核苷酸

酶解法制備脫氧核苷酸

桔青霉產(chǎn)生5`-磷酸二脂酶

紅酵母產(chǎn)生3`-磷酸二脂酶第16頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月

第17頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月

酶解法制備戊糖核苷酸

我國從60年代開始使用核酸酶P1降解核糖核酸生產(chǎn)單核苷酸，日本年產(chǎn)呈味核苷酸（肌苷酸和鳥苷酸）3000噸，其中60%是使用酶解法生產(chǎn)的。酶解法生產(chǎn)5‘—單核苷酸工藝流程第18頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月第19頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月雙酶法生產(chǎn)肌苷酸和鳥苷酸（I＋G）

呈味核苷酸的主要品種是肌苷酸鈉和鳥苷酸鈉，商品名簡稱為（I＋G），用核酸酶Pl降解RNA可獲得GMP和AMP，其中AMP經(jīng)脫氨生成IMP。雙酶法生產(chǎn)（I十G）工藝。第20頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月第21頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月菌體自溶法生產(chǎn)核苷酸

磷酸二酯酶在合適的條件下降解細(xì)胞內(nèi)的RNA可產(chǎn)生5′-核苷酸。在國內(nèi)用谷氨酸產(chǎn)生菌體自溶法生產(chǎn)5‘-核苷酸。（1）菌體自溶法生產(chǎn)核苷酸工藝流程：第22頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月

堿水解法生產(chǎn)2＇，3＇-混合核苷酸

RNA結(jié)構(gòu)中的磷酸二酯鍵對于堿性條件不穩(wěn)定，很容易生成2′，3＇

-環(huán)狀磷酸酯，此環(huán)狀磷酸酯對堿更不穩(wěn)定，很易加水分解生成2＇，3＇-混合核苷酸。取RNA配成3％～3.5%的水溶液，加氫氧化鈉達(dá)0.3mol／L濃度，升溫至38℃，保溫16～20小時，用6mol／L鹽酸中和至pH7.0，從RNA水解成2′，3＇-核苷酸的降解率達(dá)95％以上，將2′，3＇-混合核苷酸制成每片含50～100mg的片劑，經(jīng)臨床使用，對非特異性血小板減少癥、對白血球減少癥、癌腫的化療和放療后的升白血球均有較好療效。第23頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月第24頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月發(fā)酵法生產(chǎn)核苷酸1、發(fā)酵法生產(chǎn)肌苷酸（IMP）肌苷酸鈉是一種高效增鮮劑，在谷氨酸鈉（味精）中加2%，鮮度可增加3倍。因此，在味精中添加肌苷酸鈉（或鳥苷酸鈉）后成為第二代特鮮味精。

產(chǎn)氨短桿菌嘌呤核苷酸生物合成途徑、代謝調(diào)控和肌苷酸發(fā)酵機(jī)制:第25頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月第26頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月

積累IMP的主要前提：（1）阻斷SAMP合成酶:

即選育缺該酶的菌株（嘌呤缺陷型），發(fā)酵前期提供適量腺嘌呤，以滿足菌體生長；（2）保持PRA合成暢通，即后期沒有多余腺嘌呤阻遏該步反應(yīng)；（3）要使IMP滲出胞外，選育對Mn+不敏感菌株；（4）生成的IMP不被降解，恰好原菌株該酶活力低。第27頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月2、混合培養(yǎng)法發(fā)酵生產(chǎn)鳥苷酸（GMP）:

直接發(fā)酵法生產(chǎn)GMP必需滿足以下條件（1）解除GMP的反饋抑制（與GMP積累相勃）;（2）改變細(xì)胞對GMP的透性;（3）不分解生成GMP

只能先合成XMP，后轉(zhuǎn)化為GMP：方法如下：

選育鳥嘌呤、腺嘌呤缺陷型菌株，同時解除PRPP轉(zhuǎn)酰胺酶及XMP合成酶的阻遏，積累大量XMP(GMP合成酶及SAMP合成酶缺失）。第28頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月XMP轉(zhuǎn)化為GMP菌株的條件:(1)GMP不被分解

(2)GMP合成酶活力要強(qiáng)化(抗生素激動劑)(3)增加細(xì)胞通透性第29頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月

半合成法制備核苷酸由于發(fā)酵法生產(chǎn)核苷的產(chǎn)率很高，核苷懸浮于磷酸三甲酯或磷酸三乙酯中，在冷卻條件下加入氯化氧磷，進(jìn)行磷酸化，從核苷生成5′-核苷酸收率可達(dá)90%。例一：肌苷2mmol／L懸浮于5ml磷酸三乙酯中，溫度控制0℃，添加氯化氧磷6mmol／L，水2mmol／L，反應(yīng)2h，5＇-IMP摩爾產(chǎn)率達(dá)91％。例二：鳥苷2mmol／L懸浮于5ml磷酸三甲酯中，溫度控制0℃，添加氯化氧磷6mmol／L，水2mmo/L，反應(yīng)6h，5＇-GMP摩爾產(chǎn)率達(dá)90%。第30頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月四、核苷的制備

核苷是多種核苷類藥物的原料，在核酸類藥物中占主導(dǎo)地位。（1）以核苷及其結(jié)構(gòu)類似物、衍生物為主藥物多達(dá)幾十種；（2）核苷類藥物在抗病毒、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫方面占重要地位；（3）核苷的發(fā)酵水平大大高于核苷酸，所以常做后者的前體物質(zhì)。1、RNA化學(xué)水解法制備核苷：第31頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月第32頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月2、發(fā)酵法生產(chǎn)核苷

產(chǎn)率高、周期短、控制容易、產(chǎn)量大。共同特點(diǎn)：（1）使用磷酸單酯酶活力很強(qiáng)的枯草芽孢桿菌或短小芽孢桿菌為誘變出發(fā)菌株；（2）具有特定標(biāo)記的有變株；（3）發(fā)酵培養(yǎng)時需提供限量生長因素。原菌株：（1）AMP強(qiáng)烈抑制PRPP轉(zhuǎn)酰胺酶的活性，控制總代謝途徑；（2）AMP抑制SAMP合成酶；（3）GMP抑制IMP脫氫酶第33頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月第34頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月生產(chǎn)菌株：（1）酶6、7缺失（為腺嘌呤缺陷型）積累IMP---肌苷（肝炎輔助藥）；（2）酶4缺失（為鳥嘌呤缺陷型）積累XMP---黃苷；（3）酶5缺失積累鳥苷。第35頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月發(fā)酵法生產(chǎn)肌苷（1）肌苷生產(chǎn)工藝（2）發(fā)酵工藝條件：碳源為葡萄糖保證充足的氮源磷酸鹽的影響Mg+、Ca+有促進(jìn)作用生長因子腺嘌呤或酵母粉要亞適量最適發(fā)酵溫度為30--34℃，pH6.0—6.2需大風(fēng)量,高溶氧和低CO2第36頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月發(fā)酵法生產(chǎn)肌酐的工藝流程第37頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月發(fā)酵法生產(chǎn)鳥苷和黃苷

鳥苷產(chǎn)生菌的特征：（1）嘌呤核苷酸分解酶活力強(qiáng)；（2）SAMP合成酶，GMP還原酶缺失；（3）解除AMP、GMP對PRPP轉(zhuǎn)酰胺酶，肌苷酸脫氫酶和GMP合成酶的反饋抑制；第38頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月第39頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月發(fā)酵法生產(chǎn)腺苷

以肌苷生產(chǎn)菌（枯草桿菌）為誘變基礎(chǔ)菌株。誘變結(jié)果：（1）腺嘌呤回復(fù)，腺嘌呤酶缺失；（2）黃嘌呤缺陷型，GMP還原酶缺失；（3）抗8雜氮黃嘌呤解除對PRPP轉(zhuǎn)酰胺酶的抑制；（4）發(fā)酵不穩(wěn)定的原因：黃嘌呤缺陷及腺嘌呤酶缺失與回復(fù)（菌種傳代中）。第40頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)核酸與核苷類藥物的制備舉例

第41頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月（一）疊氮胸苷（Azidothymidine，AZT）1、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

AZT是1987美國FDA批準(zhǔn)的治療艾滋病的新藥。AZT的藥理作用是人體內(nèi)經(jīng)磷酸化后生成了3`-疊氮-2′-脫氧胸腺嘧啶核苷酸，后者取代了正常的胸腺嘧啶核苷酸參與病毒DNA的合成，含有AZT成份的DNA不能繼續(xù)復(fù)制，從而達(dá)到阻止病毒增殖的目的。2、生產(chǎn)工藝此合成路線的起始原料是胸苷，目前主要是從DNA水解法制備，由于原料來源少，合成路線較復(fù)雜，成本很高。第42頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月

已見報道的胸苷合成方法還有兩條途徑：

①從2′-脫氧胞苷或2′-脫氧鳥苷或2＇-脫氧腺苷與胸腺嘧啶反應(yīng)，經(jīng)大腸桿菌產(chǎn)生的磷酸化酶催化生成胸苷。

②從鳥苷（300mmol／L）與胸腺嘧啶（300mmol／L）反應(yīng)，在歐文氏菌AJZ992所產(chǎn)生的嘌呤核苷磷酸化酶和嘧啶核苷磷酸化酶的催化下生成5′-甲基尿苷，然后經(jīng)化學(xué)法合成胸苷。第43頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月第44頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月（二）阿糖腺苷（Adeninearabinoside）1、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

阿糖腺苷的化學(xué)名稱為9-β-D-阿拉伯呋喃糖腺嘌呤，或稱腺嘌呤阿拉伯糖苷。早在1960年就在實(shí)驗(yàn)室合成了阿糖腺苷，1969年美國用StreptomycesantibioticusNRRL3238菌株，1972年日本用Strepto－myceshebacecus4334菌株發(fā)酵法分別制備了阿糖腺苷。

1979年用從E．Coli中分離得到的尿嘧啶磷酸化酶和嘌呤核苷磷酸化酶，以固相酶的方法將阿糖脲苷轉(zhuǎn)化為阿糖腺苷。第45頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月2、生產(chǎn)工藝酶-化學(xué)合成法

最新的阿糖腺苷的合成法是酶-化學(xué)合成法：用尿苷為原料經(jīng)氧氯化磷和二甲基甲酰胺反應(yīng)，生成氧橋化合物，在堿性水溶液中水解成阿糖尿苷，然后利用阿糖尿苷中的阿拉伯糖經(jīng)酶法轉(zhuǎn)化成阿糖腺苷。經(jīng)選育從阿糖尿苷酶法合成阿糖腺苷的優(yōu)秀菌株是產(chǎn)氣腸桿菌（Enterbacteraerogens），這株菌能產(chǎn)生尿苷磷酸化酶（Upase）和嘌呤核苷磷酸化酶（Pynpase），用這個菌株的休止細(xì)胞作為酶源，從阿糖尿苷和腺嘌呤能高效地合成阿糖腺苷，菌體也可制成固定化細(xì)胞進(jìn)行連續(xù)生產(chǎn)。第46頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月第47頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月第48頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月以5`-AMP為原料的化學(xué)合成

3、作用與用途

阿糖腺苷是近年來引人注目的廣譜DNA病毒抑制劑，對單純皰疹Ⅰ、Ⅱ型，帶狀皰疹，巨細(xì)，牛痘等DNA病毒，在體內(nèi)外都有明顯抑制作用。目前認(rèn)為，阿糖腺苷是治療單純皰疹腦炎最好的抗病毒藥物。阿糖腺苷在體內(nèi)受激酶作用生成的阿糖腺三磷，是脫氧腺三磷（dATP）的拮抗物，從而阻抑了以dATP為底物的病毒DNA聚合酶的活力。而且阿糖腺三磷對于病毒DNA聚合酶的親和性比宿主細(xì)胞的同一個酶的親和性高。因此這個藥物對于抑制病毒具有較高選擇性。第49頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月

（三）三氮唑核苷1、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

三氮唑核苷商品名病毒唑，對DNA病毒，RNA病毒都有廣泛作用。本品為白色結(jié)晶，熔點(diǎn)174～176℃，易溶于水。這個化合物經(jīng)X線解析，它的立體結(jié)構(gòu)與腺苷、鳥苷非常類似，在體內(nèi)被磷酸化成三氮唑核苷酸，抑制肌苷酸脫氫酶阻斷鳥苷酸的生物合成，從而抑制病毒DNA合成。它的另一特點(diǎn)是對病毒作用點(diǎn)多，不易使病毒產(chǎn)生抗藥性。

第50頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月2、生產(chǎn)工藝

酶合成法

使用產(chǎn)氣腸桿菌，以（尿苷）肌苷和TCA為底物可以用酶法簡易地合成三氮唑核苷。

采用前段與后段由兩個不同的酶催化，即前段使用嘧啶核苷磷酸化酶，后段使用嘌呤核苷磷酸化酶。第51頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月（四）阿糖胞苷（Cytarabine，Cytosinearabinoside，ArabinosylCytosine，Aracytidine）

1、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

阿糖胞苷又稱胞嘧啶阿拉伯糖苷，糖的組成部分是阿拉伯糖。白色或類自色結(jié)晶性粉末，無臭，易溶于水，略溶于甲醇、乙醇中，乙醚中極微溶。阿糖胞苷進(jìn)入體內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榘⑻前账?，抑制DNA聚合酶，阻止胞二磷轉(zhuǎn)變?yōu)槊撗醢讖亩种艱NA的合成，干擾DNA病毒繁殖和腫瘤細(xì)胞增殖。只能注射。第52頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月2、生產(chǎn)工藝

以5＇－CMP為原料的合成法（1）工藝路線：第53頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月第54頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月（2）工藝過程：

①水解：并加入處理好的6.5L氫氧化鑭凝膠，總體積為7.5L，升溫至90℃，在不斷攪拌下，于pH9下進(jìn)行水解。在不同的反應(yīng)時間內(nèi)，均勻取出2mL凝膠溶液，離心分離，取上清液5至10μl，pH9.2電泳分析，檢查水解程度。②氧橋化：氧橋化后總OD光譜高峰位置移至264nm（pH2）③氨解：使氧橋斷裂3‘，5’-乙?；撀?。④成鹽：

2％鹽酸-甲醇以葡萄糖酸鈣為原料的合成路線

第55頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月第56頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月（五）聚肌胞苷酸（聚肌胞）（Poyinosinic，PolycytidylicAcid，Poly1：C）1、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

1967年美國人Field發(fā)現(xiàn)聚肌胞是干擾素誘導(dǎo)物，而且具有廣譜抗病毒作用。本品是人工合成的干擾素誘導(dǎo)劑，系由多聚肌苷酸和多聚胞苷酸組成的雙股多聚核苷酸。本品可溶于0.85％氯化鈉溶液。2、生產(chǎn)工藝70年代中期我國開始研制聚肌胞，其生產(chǎn)工藝如下：底物5-核苷二磷酸吡啶鹽的制備第57頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月（3）固定化多核苷酸磷酸化酶，將分離純化的酶液滴加入冰浴中的載體，得到共價結(jié)合的固定化多核苷酸磷酸化。第58頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月3、PolyI：C制備（1）底物預(yù)處理：CDP吡啶鹽轉(zhuǎn)成鋰鹽，IDP轉(zhuǎn)成鈉鹽。（2）酶促反應(yīng)：（每毫升反應(yīng)液含μmol／L數(shù)）IDP或CDP15；Tris150；MgC126；EDTA1；聚合酶5單位，pH9.0，37℃，3～4小時。用鹽酸調(diào)pH1.5～2.0，使PolyI（或PolyC）沉淀，立即離心。此后在磷酸液沖液中溶解，等摩爾PolyI與PolyC混合，生成產(chǎn)品。

第59頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月3、作用與用途

本品具有抗病毒，抗腫瘤，增強(qiáng)淋巴細(xì)胞免疫功能和抑制核酸代謝等作用。本品注入人體誘導(dǎo)產(chǎn)生干擾素。臨床已試用于腫瘤、血液病、病毒性肝炎及痘類毒性感染等多種疾患。第60頁，課件共65頁，創(chuàng)作于2023年2月

胞二磷膽堿（CDP-膽堿）1、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)

胞二磷膽堿其化學(xué)名稱為胞嘧啶核苷-5＇-二磷酸膽堿鈉鹽本品為白色無定形粉末，易吸濕，易溶于水，幾不溶于乙醇、氯仿、丙酮等多數(shù)有機(jī)溶劑。1％水溶液pH2.5～3.5，注射液pH7.0。

第61頁，課