藥物分析齊永秀第八章雜環(huán)類藥物分析

藥物分析齊永秀第八章雜環(huán)類藥物分析第1頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第一節(jié)吡啶類藥物一、典型藥物的結(jié)構(gòu)與主要化學(xué)性質(zhì)（一）典型藥物的結(jié)構(gòu)吡啶（pyridine）異煙肼（isoniazid）第2頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月尼可剎米（nikethamide）第3頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月硝苯地平（nifedipine)第4頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）主要化學(xué)性質(zhì)

1.弱堿性

吡啶環(huán)上的氮為堿性氮原子，吡啶環(huán)的pKb

值為8.8（水中）。尼可剎米除了吡啶環(huán)上氮外，β位上被酰氨基取代。酰氨基化學(xué)性質(zhì)不甚活潑，但遇堿水解后釋放出具有堿性的二乙胺，故可以進(jìn)行鑒別。

第5頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

2．還原性

異煙肼的吡啶環(huán)γ位上被具有還原性酰肼取代，可被氧化劑氧化，可與含羰基的化合物發(fā)生縮合反應(yīng)。

3．吡啶環(huán)的特性

異煙肼和尼可剎米的吡啶環(huán)α、α’位未取代，而β或γ位被羧基衍生物所取代；硝苯地平的吡啶環(huán)β、β’位被甲酸甲酯所取代，其吡啶環(huán)可發(fā)生開(kāi)環(huán)反應(yīng)。

第6頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、鑒別試驗(yàn)（一）吡啶環(huán)的開(kāi)環(huán)反應(yīng)

本反應(yīng)適用于吡啶環(huán)的α、α’位無(wú)取代基的異煙肼和尼可剎米。1.戊烯二醛反應(yīng)（k?ning反應(yīng)）尼可剎米+溴化氰H2O戊烯二醛衍生物苯胺黃色芳伯胺＋溴化氰→戊烯二醛→戊烯二醛衍生物芳伯胺吡啶環(huán)Ch.P只用于尼可剎米的鑒別第7頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第8頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（黃色~黃棕色）第9頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2．二硝基氯苯反應(yīng)（Vongerichten反應(yīng)）吡啶及其衍生物+2,4-二硝基氯苯至熔融或混合醇制KOH紫紅色無(wú)水條件第10頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月采用本法鑒別異煙肼、尼可剎米時(shí)，需適當(dāng)處理，即將酰肼氧化成羧基或?qū)Ⅴ０匪鉃轸然筮M(jìn)行鑒別。如異煙肼鑒別：第11頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月異煙肼可不經(jīng)處理發(fā)生如下反應(yīng)：異煙肼+2，4-二硝基氯苯乙醇OH-紫紅色第12頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）酰肼基團(tuán)的反應(yīng)

1．還原反應(yīng)異煙肼+AgNO3異煙酸銨+N2+Ag銀鏡異煙肼+亞硒酸硒（紅色）第13頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2．縮合反應(yīng)

異煙肼的酰肼基與芳醛縮合形成腙，其有固定的熔點(diǎn)，可用以鑒別。ChP和BP均采用本法鑒別.

黃色結(jié)晶mp為228℃～231℃

第14頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

Ar-NH2活性-CH2-+1，2-萘醌-4-磺酸OH-紅色第15頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）

形成沉淀的反應(yīng)

具有吡啶環(huán)的結(jié)構(gòu)，可與重金屬鹽類及苦味酸等試劑形成沉淀。

如尼可剎米+CuSO4+硫氰酸銨草綠色尼可剎米異煙肼+HgCl2白色第16頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

（四）分解產(chǎn)物的反應(yīng)使?jié)駶?rùn)的紅色石蕊試紙變藍(lán)尼可剎米異煙肼+無(wú)水Na2CO3Ca(OH)2吡啶臭尼可剎米+NaOH二乙胺第17頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（五）

紫外吸收光譜特征

本類藥物的分子結(jié)構(gòu)中均含有芳雜環(huán)，在紫外光區(qū)有特征吸收，其最大、最小吸收波長(zhǎng)及百分吸收系數(shù)可供鑒別。本類藥物的紫外特征吸收鑒別方法見(jiàn)下表。本類藥物的紫外特征吸收鑒別方法

藥物溶劑λmax（nm）λmin（nm）E1cm1%

異煙肼HCl（0.01mol/L）265—

約420水266234378尼可剎米HCl（0.01mol/L）263—285NaOH（0.1mol/L）255—840260—860

硝苯地平無(wú)水乙醇333—140第18頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

（一）異煙肼中游離肼的檢查

1.TLC法

Ch.P中異煙肼及其注射,采用TLC法中雜質(zhì)對(duì)照法。

對(duì)照品：硫酸肼0.20mg/ml（相當(dāng)于游離肼50μg）

薄層板：硅膠（用羧甲基纖維素鈉溶液制備）

展開(kāi)劑：異丙醇-丙酮（3：2）

顯色劑：乙醇制對(duì)-二甲氨基苯甲醛試液

檢測(cè)結(jié)果：供試品主斑點(diǎn)前方，不得顯黃色斑點(diǎn)

三、有關(guān)物質(zhì)檢查第19頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

BP的檢查方法：

供試品溶液制備:

取異煙肼1.0g，加丙酮-水(1:1)制成10ml.

對(duì)照溶液制備:

取硫酸肼50mg，加水50ml使溶解后，加丙酮稀釋至100ml；量取10ml，加供試品溶液0.2ml，加丙酮-水(1:1)稀釋至100ml。

薄層板：硅膠GF254薄層板

展開(kāi)劑：醋酸乙酯-丙酮－甲醇－水(50:20:20:10)

顯色劑：乙醇制對(duì)-二甲氨基苯甲醛試液第20頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

檢測(cè)結(jié)果：

于254nm紫外光下檢測(cè)，供試品中的雜質(zhì)斑點(diǎn)強(qiáng)度應(yīng)小于對(duì)照溶液中異煙肼色譜斑點(diǎn)；再噴以對(duì)-二甲氨基苯甲醛溶液，并在日光下檢視，對(duì)照溶液中硫酸肼斑點(diǎn)的強(qiáng)度大于供試液中的雜質(zhì)斑點(diǎn)。第21頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

2．比濁法

JP（14）采用樣品中加水楊醛的乙醇溶液觀察混濁的方法來(lái)控制游離肼的限量。

此法專屬性差，因異煙肼(慢)和硫酸肼均生成腙而析出沉淀。第22頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3.差示分光光度法

肼異煙肼+對(duì)-二甲氨基苯甲醛黃色縮合物對(duì)-二甲氨基苯甲醛連氮(λmax=456nm有最大吸收)形成的縮合產(chǎn)物對(duì)-二甲氨基芐叉(于λmax=456nm波長(zhǎng)處無(wú)吸收)

可在456nm波長(zhǎng)處測(cè)定并計(jì)算二者的差示吸收度ΔA456，同時(shí)以對(duì)照品比較法計(jì)算游離肼含量。第23頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

具體測(cè)定法：

對(duì)照品溶液：硫酸肼CR＝1μg/ml

5ml+丙酮λmax=456nm測(cè)A1+對(duì)-二甲氨基苯甲醛(ΔA456＝A2－A1)ΔAR5mlλmax=456nm測(cè)A2

供試品溶液：異煙肼C＝2mg/ml

游離肼CX=ΔAs/AR×CR

1份+丙酮

λmax=456nm測(cè)A1

+對(duì)-二甲氨基苯甲醛

(ΔA456＝A2－A1)ΔAs

2份

λmax=456nm測(cè)A2第24頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月(二)尼可剎米中有關(guān)雜質(zhì)檢查

因有關(guān)雜質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)不明，故Ch.P和BP均采用TLC法中的高低濃度對(duì)比法進(jìn)行檢查。方法：供試品甲醇溶解成40mg/ml的溶液，再精密吸取適量用甲醇稀釋至0.4mg/ml和0.04mg/ml的溶液作為對(duì)照液。取供試品和對(duì)照品液點(diǎn)樣分析，顯色后置紫外燈下觀察。供試品如果顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對(duì)照液2比較不得更深，如有一個(gè)雜質(zhì)斑點(diǎn)超過(guò)2的主斑點(diǎn)，應(yīng)不深于對(duì)照液1。

第25頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

(三)硝苯地平中有關(guān)物質(zhì)檢查

硝苯地平遇光分子內(nèi)部發(fā)生光化學(xué)歧化作用，降解為4-（2-硝基苯基）-2,6-二甲基吡啶-3,5-二羧酸二甲酯（A）和4-（2-亞硝基苯基）-2,6-二甲基吡啶-3,5-二羧酸二甲酯（B）。其化學(xué)結(jié)構(gòu)如下:第26頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月具體方法

1、供試液Ⅰ和Ⅱ的制備2、有關(guān)雜質(zhì)對(duì)照品液Ⅰ和Ⅱ的制備(0.2mg/ml)3、色譜條件與靈敏度調(diào)節(jié)填充劑：十八烷基硅烷鍵合硅膠

流動(dòng)相：甲醇-水（3：2）；檢測(cè)波長(zhǎng)：235nm。取對(duì)照品溶液Ⅱ20μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使雜質(zhì)A和B組分色譜峰的峰高為滿量程的20%；雜質(zhì)A和B組分之間，雜質(zhì)B與硝苯地平之間的分離度均符合規(guī)定。1mg/ml0.2mg/ml第27頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)

取供試液Ⅰ和對(duì)照液Ⅱ各20μl，分別進(jìn)樣記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的2倍。供試液Ⅰ如出現(xiàn)與對(duì)照液Ⅱ中雜質(zhì)A和B相對(duì)應(yīng)的峰，其峰面積不得大于對(duì)照液Ⅱ中雜質(zhì)A和B的峰面積；如出現(xiàn)除雜質(zhì)A和B以外的其他雜質(zhì)峰，其峰面積不得大于對(duì)照液Ⅱ中硝苯地平的峰面積；各雜質(zhì)總量不得大于0.5%。供試液Ⅰ中小于對(duì)照液Ⅱ中硝苯地平峰面積的10%以下的雜質(zhì)峰忽略不計(jì)。

返回第28頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第29頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第二節(jié)吩噻嗪類藥物一、基本結(jié)構(gòu)與化學(xué)性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與典型藥物苯并噻嗪硫氮雜蒽第30頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第31頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第32頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月奮乃靜第33頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月癸氟奮乃靜第34頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月鹽酸氟奮乃靜第35頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月鹽酸三氟拉嗪第36頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）主要化學(xué)性質(zhì)1.紫外和紅外吸收光譜特征硫氮雜蒽母核為共軛三環(huán)л系統(tǒng)

三個(gè)最大吸收峰別在：205nm、254nm、300nm由于2位、10位上的取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。

硫氮雜蒽母核的硫?yàn)槎r(jià)，易氧化為砜和亞砜，其紫外吸收光譜有明顯不同，它們具有四個(gè)峰值。另外，取代基R和R’的不同，則可產(chǎn)生不同的紅外光譜第37頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第38頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.易氧化呈色二價(jià)硫易氧化，遇不同氧化劑如硫酸、硝酸、三氯化鐵試液及過(guò)氧化氫等，隨著取代基的不同，而呈不同的顏色。

3.與金屬離子絡(luò)合呈色

本類藥物中未被氧化的硫，可與鈀離子形成配位化合物，其氧化產(chǎn)物則無(wú)此反應(yīng)。此性質(zhì)可用于鑒別和含量測(cè)定，并具有專屬性，可消除氧化產(chǎn)物的干擾。第39頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（一）紫外特征吸收和紅外吸收光譜

本類藥物可用UV和IR鑒別，Ch.P中UV鑒別實(shí)例如下：

藥物名稱溶劑濃度（μg/ml）λmax（nm）AE1%1cm鹽酸氯丙嗪鹽酸（9→1000）52540.46915306—

—鹽酸異丙嗪鹽酸（0.01mol/L）6249—883~937奮乃靜無(wú)水乙醇72580.65—癸氟奮乃靜乙醇10260—

—鹽酸氟奮乃靜鹽酸（9→1000）10255—553~593鹽酸三氟拉嗪鹽酸（1→20）10256—630鹽酸硫利達(dá)嗪乙醇8264與315—

—二、鑒別試驗(yàn)第40頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第41頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第42頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

（二）顯色反應(yīng)

1.與氧化劑的顯色反應(yīng)

藥物名稱硫酸硝酸過(guò)氧化氫

鹽酸氯丙嗪顯紅色,漸變淡黃色—鹽酸異丙嗪顯櫻桃紅色,放置生成紅色沉淀,加熱即溶解,后顏色漸變深溶液由紅色轉(zhuǎn)變?yōu)槌赛S色奮乃靜—

—顯深紅色;放置后紅色漸褪去鹽酸氟奮乃靜顯淡紅色,溫?zé)帷?/p>

—后變成紅褐色鹽酸三氟拉嗪—生成微帶紅色的白色沉淀;放—置后,紅色變深,加熱后變黃色

鹽酸硫利達(dá)嗪顯藍(lán)色

—

—

第43頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

2.與鈀離子絡(luò)合顯色反應(yīng)

利用分子結(jié)構(gòu)中未被氧化的硫與金屬鈀離子絡(luò)合形成有色絡(luò)合物，如與癸氟奮乃靜形成紅色絡(luò)合物。第44頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第45頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）分解產(chǎn)物的反應(yīng)

癸氟奮乃靜碳酸鈉及碳酸鉀F-+酸性茜素鋯試液[ZrF6]2-配位離子，茜素游離使溶液由紅色變?yōu)辄S色。600℃熾灼第46頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

(一)鹽酸異丙嗪中特殊雜質(zhì)檢查

主要有：2-二甲氨基-1-丙醇；N,N,β-三甲基-10H-吩噻嗪-10-乙胺異構(gòu)體和結(jié)構(gòu)不清的分解產(chǎn)物

。因此采用TLC法中的

高低濃度對(duì)比法控制上述這些雜質(zhì)的限量。(二)鹽酸硫利達(dá)嗪中有關(guān)物質(zhì)檢查

本品遇光不穩(wěn)定，在生產(chǎn)和貯藏過(guò)程中易引入有關(guān)物質(zhì)，因其結(jié)構(gòu)不清，因此也采用TLC法中的高低濃度對(duì)比法控制雜質(zhì)的限量。三、特殊雜質(zhì)檢查返回第47頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第三節(jié)苯并二氮雜卓類藥物一、結(jié)構(gòu)特征與典型藥物NNClH3CO地西泮苯環(huán)與含氮七元雜環(huán)第48頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月阿普唑侖第49頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月奧沙西泮第50頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月氯氮卓NNNCH3OClH第51頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月主要化學(xué)性質(zhì)1、堿性母核結(jié)構(gòu)上的氮原子，顯示弱堿性，并在不同的pH溶液中，可以形成不同的離子化狀態(tài)，包括質(zhì)子化分子、中性分子和去質(zhì)子化分子，從而影響其紫外吸收。2、水解性在強(qiáng)酸性溶液中可以發(fā)生水解成二苯甲酮衍生物第52頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

(一)化學(xué)鑒別試驗(yàn)

1，沉淀反應(yīng)

氯氮卓

橙紅色沉淀

阿普唑侖鹽酸氟西泮

＋KBiI4

也生成橙紅色沉淀氯硝西泮放置后，沉淀顏色變深，

因此可以相互區(qū)別。二、鑒別試驗(yàn)阿普唑侖+硅鎢酸白色沉淀，藥典中也用于鑒別。第53頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.水解后呈芳伯胺反應(yīng)

氯氮卓和奧沙西泮，其反應(yīng)如下：第54頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3.硫酸-熒光反應(yīng)

本類藥物溶于硫酸后，在紫外光（365nm）下，顯不同顏色的熒光。例如：

地西泮

黃綠色黃色氯氮卓黃色紫色艾司唑侖+H2SO4亮綠色+稀硫酸天藍(lán)色硝西泮淡藍(lán)色藍(lán)綠色奧沙西泮

淡黃綠色第55頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.分解產(chǎn)物的反應(yīng)

本類藥物多為有機(jī)氯化合物，用氧瓶燃燒法破壞，顯氯化物反應(yīng)。Ch.P用于地西泮和三唑侖藥物的鑒別。

5.氯化銅焰色反應(yīng)

分子結(jié)構(gòu)中含有氯元素的藥物，在銅網(wǎng)上燃燒發(fā)出CuCl2綠色火焰。此反應(yīng)藥典未用于本類藥物鑒別。第56頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

（二）紫外特征吸收和紅外吸收光譜

藥物名稱溶劑濃度（μg/ml）λmax（nm）A

地西泮0.5%硫酸甲醇溶液5242約0.51282

約0.23366氯氮卓鹽酸溶液(9→1000)7245,308阿普唑侖鹽酸溶液(9→1000)12264鹽酸氟西泮硫酸甲醇(1→36)10239±2,284±2比值1.95～2.50362±2氯硝西泮0.5%硫酸甲醇溶液10239±2,307±2奧沙西泮乙醇10229,315±2(較弱)

紅外吸收光譜:已用于地西泮、阿普唑侖、艾司唑侖、鹽酸氟西泮、氯硝西泮和奧沙西泮的鑒別。

第57頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）TLC法

1.常用的五種苯并二氮雜卓類藥物的TLC法

按常規(guī)法點(diǎn)樣10μl于硅膠G薄層板上，以苯-丙酮（3：2）為展開(kāi)劑,飽和15min，用上行法展開(kāi)15cm，揮發(fā)溶劑，用稀硫酸噴霧，于105℃干燥30min，置紫外燈下檢視熒光斑點(diǎn)。BP:氯硝西泮＋氯氮卓－TLC法USP:地西泮＋鹽酸氟西泮－TLC法；氯氮卓－HPLC法Ch.P:地西泮注射液－HPLC法第58頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.酸水解產(chǎn)物的TLC法

利用苯并二氮雜卓類藥物經(jīng)酸水解產(chǎn)生的二苯甲酮衍生物進(jìn)行鑒別。由于不同的苯并二氮雜卓類藥物水解后可能會(huì)獲得相同的二苯甲酮衍生物，因此本法的專屬性較差。

第59頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

（一）有關(guān)物質(zhì)檢查－中間體、副產(chǎn)物、分解產(chǎn)物

Ch.P收載的八種本類藥物，除氯氮卓外，其余均作此項(xiàng)檢查。其檢查方法除了三唑侖采用GC法外，其余均用TLC法進(jìn)行檢查。USP(24)和BP(2000)中對(duì)氯氮卓都規(guī)定了此項(xiàng)檢查，而且均用TLC法進(jìn)行檢查。三、特殊雜質(zhì)檢查第60頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

1.地西泮中有關(guān)物質(zhì)的檢查

地西泮在合成過(guò)程中因其副反應(yīng)，可能引入N-去甲基苯甲二氮卓及化學(xué)結(jié)構(gòu)不清的有關(guān)物質(zhì)，可采用TLC法中的高低濃度對(duì)比法進(jìn)行檢查。

2.氯氮卓中有關(guān)物質(zhì)的檢查

USP(24)用TLC法檢查氯氮卓中的有關(guān)物質(zhì)，并規(guī)定其分解產(chǎn)物2-氨基-5-氯-2-苯甲酮含量不得過(guò)0.01%；中間體7-氯-1，3-二氫-5-苯基-2H-1，4-苯并二氮雜卓-2-酮-4-氧化物含量不得過(guò)0.1%。第61頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3.氯氮卓中有關(guān)物質(zhì)的反相高效液相色譜法

色譜條件：色譜柱為150mm×4.6mm（i.d.）Nucleosil10C18柱；流動(dòng)相為甲醇-水（50:50),流速1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm。

檢測(cè)結(jié)果：間硝西泮的tR為3.1min、氯氮卓的tR為3.6min，有關(guān)物質(zhì)A的保留時(shí)間約為氯氮卓0.7，有關(guān)物質(zhì)B約為2.3，有關(guān)物質(zhì)C約為3.9。溶液的配制：供試品液0.2mg/ml、對(duì)照液(a)1μg/ml、硝西泮a(b)5μg/ml,(2-氨基-5-氯苯基）苯甲酮對(duì)照液（c)0.4μg/ml第62頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月要求：1、記錄的色譜時(shí)間為主峰保留時(shí)間的6倍2、有關(guān)物質(zhì)A和B的峰面積不得大于對(duì)照液a主峰面積的0.2％3、有關(guān)物質(zhì)C的峰面積不得大于對(duì)照液c主峰面積的0.2％4、其他雜質(zhì)峰的峰面積年均不得大于對(duì)照液a主峰面積的0.5倍5、各雜質(zhì)峰的面積和不得大于對(duì)照液a峰面積的2.5倍第63頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第64頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月(二)降解產(chǎn)物的檢查

地西泮注射液列入此項(xiàng)檢查，因本品在貯藏過(guò)程中有可能分解成2-甲氨基-5-氯-二苯甲酮等雜質(zhì)。采用HPLC法進(jìn)行檢查。返回第65頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第六節(jié)含量測(cè)定一、非水溶液滴定法主要用于測(cè)定有機(jī)堿及其鹽，也可以測(cè)定有機(jī)弱酸

1、酸性溶劑：有機(jī)弱堿在酸性溶劑中可顯著地增強(qiáng)相對(duì)堿度2、堿性溶劑：有機(jī)弱酸在堿性溶劑中可顯著地增強(qiáng)相對(duì)酸度

3、兩性溶劑：具有酸、堿性能，如methanol4、惰性溶劑：沒(méi)有酸、堿性的溶劑，丙酮、氯仿第66頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、非水溶液滴定法(一)基本原理當(dāng)HA酸性較強(qiáng)時(shí)，反應(yīng)不能定量完成，必須除去或降低HA的酸性，使反應(yīng)順利地完成。BH+A-+HClO4BH+ClO4+HA游離堿類鹽被置換出的弱酸因此，要根據(jù)不同情況采用相應(yīng)測(cè)定條件。第67頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月(二)一般方法供試品+冰醋酸10ml~30ml若供試品為氫鹵酸鹽再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml~5ml結(jié)果高氯酸滴定液滴定以空白試驗(yàn)校正第68頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

(三)問(wèn)題討論1.適用范圍

主要用于pKb>8的有機(jī)堿鹽的含量測(cè)定。對(duì)堿性較弱的雜環(huán)類藥物，只要選擇合適的溶劑、滴定劑和終點(diǎn)指示的方法，可使pKb為8～13的弱堿性藥物采用本法滴定。

一般來(lái)說(shuō)：pKb為8～10時(shí)，宜選冰醋酸作為溶劑；

pKb為10～12時(shí)，宜選冰醋酸與醋酐的混合溶液；pKb>12時(shí)，應(yīng)用醋酐作為溶劑。

另外，在冰醋酸中加入不同量的甲酸，也能使滴定突躍顯著增大，使一些堿性極弱的雜環(huán)類藥物獲得滿意測(cè)定結(jié)果。

第69頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

2.酸根的影響：無(wú)機(jī)酸類，在醋酸介質(zhì)中的酸性以下列排序遞減：

高氯酸＞氫溴酸＞硫酸＞鹽酸＞硝酸

消除HX干擾的方法：加Hg(Ac)2

量不足終點(diǎn)不明顯，結(jié)果偏低。

2B·HX+Hg(Ac)2→2B·HAc+HgX2

過(guò)量(1～3倍)不影響測(cè)定結(jié)果第70頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3.滴定劑的穩(wěn)定性非水溶液滴定法所用的溶劑為醋酸，具有揮發(fā)性，膨脹系數(shù)較大，溫度和貯存條件都影響滴定劑的濃度。若滴定樣品與標(biāo)定HClO4溶液時(shí)的溫度不一致，溫差未超過(guò)10℃時(shí)，應(yīng)將高氯酸滴定液的濃度用下列公式加以校正：

4.終點(diǎn)指示方法常用電位法和指示劑法。Ch.P收載的本類藥物大多采用結(jié)晶紫指示劑指示終點(diǎn)，少數(shù)采用電位法指示終點(diǎn)。另外，橙黃Ⅳ、萘酚苯甲醇、喹哪啶紅、孔雀綠第71頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月(四)應(yīng)用實(shí)例

1.游離弱堿性藥物測(cè)定

異煙肼、尼可剎米、地西泮及氯氮卓等?；谶@些藥物分子結(jié)構(gòu)中氮原子的弱堿性，可用非水溶液滴定法直接測(cè)定其含量。由于這些藥物的堿性強(qiáng)弱不同，測(cè)定時(shí)所采用溶劑、指示劑及其指示終點(diǎn)的方法也不盡相同。

藥物名稱取樣量(g)溶劑指示劑終點(diǎn)顏色

尼可剎米0.15冰醋酸10ml結(jié)晶紫藍(lán)綠色地西泮0.2冰醋酸、酸酐10ml結(jié)晶紫綠色氯氮卓0.3冰醋酸10ml結(jié)晶紫藍(lán)色第72頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

2.氫鹵酸鹽類藥物測(cè)定

當(dāng)這些藥物溶于冰醋酸時(shí)，由于氫鹵酸在冰醋酸中酸性較強(qiáng)，對(duì)測(cè)定有干擾，必須先加入過(guò)量的醋酸汞冰醋酸溶液，使其形成難以電離的鹵化汞，而氫鹵酸鹽藥物，則轉(zhuǎn)變成可測(cè)定的醋酸鹽。然后再用高氯酸滴定液滴定，并可獲得滿意的結(jié)果。應(yīng)用示例如下：

藥物名稱取樣量(g)溶劑加入醋酸汞試液(ml)指示劑終點(diǎn)顏色鹽酸氯丙嗪0.2醋酐10ml5橙黃Ⅳ玫瑰紅色鹽酸異丙嗪0.3冰醋酸10ml4結(jié)晶紫藍(lán)色鹽酸氟奮乃靜0.3冰醋酸20ml5結(jié)晶紫藍(lán)綠色鹽酸環(huán)丙沙星0.2冰醋酸25ml5橙黃Ⅳ粉紅色氫溴酸東莨菪堿0.3冰醋酸20ml5結(jié)晶紫純藍(lán)色鹽酸硫利達(dá)嗪0.3丙酮100ml5電位滴定法

第73頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3.硫酸鹽類藥物測(cè)定

硫酸是二元酸，在水溶液中能完成二級(jí)解離，生成SO42-，但在非水介質(zhì)中，只顯示一元酸解離為HSO4-，即只供給一個(gè)H+，所以硫酸鹽類藥物在冰醋酸中，只能滴定至硫酸氫鹽，因此可以用高氯酸滴定液直接滴定。第74頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（1）硫酸阿托品測(cè)定：阿托品為堿性較強(qiáng)的

一元堿藥物，因而硫酸阿托品的化學(xué)結(jié)構(gòu)式可以簡(jiǎn)寫(xiě)為(BH+)2·SO42-，用高氯酸直接滴定時(shí)的反應(yīng)式為：(BH+)2·SO42-+HClO4→(BH+)·ClO4-+(BH+)·HSO4-可根據(jù)1mol的硫酸阿托品消耗1mol高氯酸的關(guān)系計(jì)算其含量。第75頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（2）硫酸奎寧測(cè)定：奎寧為二元堿，其中喹核堿的堿性較強(qiáng)，可與硫酸生成鹽；而喹啉環(huán)的堿性極弱，不能與硫酸成鹽，而保持游離狀態(tài)。當(dāng)用高氯酸直接滴定硫酸奎寧時(shí)，1mol的硫酸奎寧消耗3mol的高氯酸。其反應(yīng)式如下：(C20H24N2·H+)2SO4+3HClO4→(C20H24N2·2H+)·2ClO4-

+(C20H24N2·2H+)·HSO4-·ClO4-

Ch.P和USP(24)都采用此法測(cè)定硫酸奎寧和硫酸奎尼丁的含量。第76頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月(3)硫酸奎寧片的測(cè)定：

硫酸奎寧片劑堿化處理，生成奎寧游離堿，然后再用高氯酸標(biāo)準(zhǔn)溶液直接滴定。此時(shí)1摩爾的硫酸奎寧可消耗4摩爾的高氯酸，因此片劑分析的滴定度與原料藥分析的滴定度不同。

第77頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月4.硝酸鹽的測(cè)定

硝酸在冰醋酸介質(zhì)中酸性不強(qiáng)，滴定反應(yīng)可以進(jìn)行完全。但是硝酸具有氧化性可以破壞指示劑使其變色，使指示劑無(wú)法指示終點(diǎn)。因此采用非水溶液滴定法測(cè)定硝酸鹽時(shí)，一般不用指示劑法而用電位法指示終點(diǎn)。第78頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月5.磷酸鹽與有機(jī)酸鹽

磷酸與有機(jī)酸在冰醋酸介質(zhì)中酸性極弱，不影響滴定反應(yīng)的定量完成，可以按常規(guī)方法直接滴定。第79頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（一）硝苯地平的測(cè)定

基本原理硝苯地平的測(cè)定原理，可用下列反應(yīng)式表示：

終點(diǎn)時(shí):微過(guò)量的Ce4+將指示劑中的Fe2+氧化成Fe3+，使橙紅色配合物離子呈淡藍(lán)色或無(wú)色，以指示終點(diǎn)的到達(dá)。二、鈰量法第80頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）吩噻嗪類藥物的測(cè)定藥物Ce(SO4),-e紅色Ce(SO4),-2e紅色消退自身指示終點(diǎn)或電位法、永停法指示終點(diǎn)第81頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月溴酸鉀法－異煙肼類藥物的含測(cè)定利用在酸性溶液中，異煙肼具有較強(qiáng)的還原性，可以與溴酸鉀發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，用甲基橙指示劑，粉紅色消失為終點(diǎn)，反應(yīng)的mol比為3：2第82頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月(一）酸性染料比色法

1.基本原理三、比色法

是利用堿性藥物在一定的pH條件下與某些酸性染料結(jié)合顯色，進(jìn)而用分光光度法測(cè)定藥物含量的方法第83頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

2.影響因素

(1)水相最佳pH值的選擇：本法中水相的pH應(yīng)使有機(jī)堿性藥物均成陽(yáng)離子(BH+)，而酸性染料應(yīng)電離足夠的陰離子(In-),陰陽(yáng)離子才能定量生成離子對(duì)，并完全溶于有機(jī)溶劑中，而過(guò)量的染料完全保留在水相中，才能保證定量的測(cè)定。

(2)酸性染料及其濃度：常用酸性染料有溴麝香草酚藍(lán)、甲基橙、溴甲酚綠等。酸性染料濃度，對(duì)測(cè)定影響不大，有足夠量即可。增加染料濃度可提高靈敏度，如果太高，則容易乳化

根據(jù)有機(jī)藥物和酸性染料的pK值及兩相中的分配系數(shù)來(lái)確定第84頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月(3)有機(jī)溶劑的選擇

有機(jī)堿藥物應(yīng)對(duì)離子對(duì)提取率高，不與水混溶，或能與離子對(duì)形成氫鍵的有機(jī)溶劑。常用的有機(jī)溶劑有氯仿、二氯甲烷、二氯乙烯、苯、甲苯、四氯化碳等。(4)水分的影響：嚴(yán)防水分混入有機(jī)溶劑中，水相中過(guò)量有色酸性染料，而影響測(cè)定結(jié)果；水分的混入使氯仿混濁，而影響比色測(cè)定。一般加入脫水劑，或?yàn)V紙過(guò)濾的方法，除去混入的水分。第85頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3.應(yīng)用示例

Ch.P中硫酸阿托品片、氫溴酸東莨菪堿片和氫溴酸山莨菪堿片等，采用本法測(cè)定含量測(cè)定。

紫外吸收弱、標(biāo)示量低第86頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1、配制對(duì)照品溶液－氫溴酸東莨菪堿2、供試品溶液－樣品→研細(xì)→稱細(xì)粉→溶解過(guò)濾3、測(cè)定－精密取對(duì)照品和樣品加入分液漏斗，加入氯仿和溴甲酚綠，振搖后分層，分取氯仿層進(jìn)行UV法，在420nm處測(cè)定第87頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（一）直接分光光度法

供試品不需提取分離，溶于適當(dāng)?shù)娜軇┲屑纯蛇M(jìn)行含量測(cè)定。

1.奧沙西泮原料的測(cè)定在229nm，采用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法測(cè)定。

2.鹽酸異丙嗪片的測(cè)定在249nm，采用E1cm1%＝910測(cè)定。

3.鹽酸異丙嗪注射液的測(cè)定

測(cè)定波長(zhǎng)的選擇：注射液處方加VC作抗氧劑，可還原異丙嗪紅色氧化產(chǎn)物，從而防止異丙嗪氧化變色。VC在鹽酸異丙嗪最大吸收波長(zhǎng)249nm處有吸收，干擾注測(cè)定。因此選用299nm波長(zhǎng)測(cè)定鹽酸異丙嗪注射液的含量時(shí)，維生素C在此波長(zhǎng)處則不產(chǎn)生干擾,但E1cm1%＝108。四、紫外分光光度法第88頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月(二)萃取后分光光度法鹽酸氯丙嗪注射液鹽酸氯丙嗪氨水堿化氯丙嗪乙醚提取乙醚層鹽酸提取鹽酸氯丙嗪max254±1nm處測(cè)定A，E1cm1%＝915第89頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（三）萃取-雙波長(zhǎng)分光光度法

本法是USP（24）收載的方法，用于鹽酸氯丙嗪注射液的含量測(cè)定，主要用來(lái)校正樣品中氧化物對(duì)測(cè)定的干擾。測(cè)定原理利用氯丙嗪的最λmax為254nm，其氧化物在此波長(zhǎng)也有吸收，同時(shí)在277nm氧化物也有吸收，且其A254=A277.而氯丙嗪在此波長(zhǎng)無(wú)吸收。因此，可由兩波長(zhǎng)處測(cè)得△A計(jì)算氯丙嗪含量。第90頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第91頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（四）二階導(dǎo)數(shù)分光光度法鹽酸氯丙嗪注射液抗氧劑維生素C的二階導(dǎo)數(shù)光譜近似為接近基線的一條直線，不干擾鹽酸氯丙嗪的測(cè)定。因此鹽酸氯丙嗪可從其二階導(dǎo)數(shù)光譜量取峰266nm～谷254nm距離，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量

其測(cè)定方法如下：

第92頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月1.光譜繪制

測(cè)繪條件：波長(zhǎng)范圍為200nm～320nm；狹縫為12nm；紙速為120mm/min。2.線性關(guān)系精取鹽酸氯丙嗪對(duì)照液(50μg/ml)制得標(biāo)準(zhǔn)系列，以HCI(0.1mol/L)為空白，按光譜繪制項(xiàng)下分別測(cè)定。用尺量取不同濃度系列溶液光譜266nm-谷254nm距離（DL），并以峰谷距離為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.供試品測(cè)定精密量取鹽酸氯丙嗪注射液2.0ml，按光譜繪制項(xiàng)下的方法，測(cè)得二階導(dǎo)數(shù)光譜，量取光譜峰-谷(266nm～254nm)距離，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求出濃度，計(jì)算百分含量。第93頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第94頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月五、氣相色譜法*

對(duì)熱穩(wěn)定可氣化的有機(jī)堿，先堿化得游離堿后測(cè)定（一）硫酸阿托品片的含量測(cè)定

USP(24)采用的方法。以后馬托品作為內(nèi)標(biāo),采用標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法。

測(cè)定方法

(1)內(nèi)標(biāo)溶液的制備：(2)供試品溶液與對(duì)照品溶液的制備：(3)色譜系統(tǒng)：色譜柱為1.8m×2mm的玻璃柱；擔(dān)體為與碳酸鈉混合于900℃熔融后，經(jīng)酸和堿處理的硅烷化藻土；固定相為3%的OV-17（即50%甲基，50%苯基的聚硅氧烷）；載氣為氮?dú)?，流速?5ml/min；檢測(cè)器為氫火焰離子化檢測(cè)器。第95頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

(4)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取對(duì)照品溶液1μl，進(jìn)樣6次，所得的對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)峰面積之比的RSD不大于2.0%；對(duì)照品峰和內(nèi)標(biāo)峰的分辨率Rs≥4.0；拖尾因子T≤2.0。[T(拖尾因子)=W0.05h/2d1，d1為峰頂點(diǎn)至峰前沿之間的距離]

(5)測(cè)定方法：取供試液和對(duì)照液各進(jìn)樣1μl，記錄各峰面積，用下式計(jì)算所取片粉中硫酸阿托品[(C17H23NO3)2·H2SO4·H2O]的重(mg)第96頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）人血漿中硝苯地平的氣相色譜法測(cè)定及藥代動(dòng)力學(xué)研究血漿樣品處理：血漿→加入內(nèi)標(biāo)→加入乙醚：環(huán)已烷（1：2）＋NaOH→窩旋提取→離心→分取有機(jī)相→吹干→丙酮溶解→GC分析GC-ECD測(cè)定：DB-1（25×0.32×0.5），氮?dú)鉃檩d氣，分流比50：1，氣化室溫度：250℃，檢測(cè)器溫度：300℃，程序升溫：第97頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月色譜系統(tǒng)適用性：硝苯地平tR=9.4min，n≥39000,內(nèi)標(biāo)tR=12min，n≥30000，內(nèi)源性物質(zhì)不干擾測(cè)定（專屬性），LOD=0.5ng/ml，線性范圍：1.0～100ng/ml，高、中、低的絕對(duì)回收率≥75％第98頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第99頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

(一)反相高效液相色譜法

1.地西泮注射液的反相HPLC法

地西泮注射液曾用萃取后分光光度法測(cè)定含量，因萃取不完全，及有關(guān)物質(zhì)和分解產(chǎn)物等對(duì)測(cè)定有干擾，故中國(guó)藥典自1995版改用HPLC法。此法操作簡(jiǎn)便，可消除干擾。注射液中地西泮的平均回收率為99.4%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.8%。

(1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：ODSC18；流動(dòng)相為甲醇-水(70:30)；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。n＞1500，R＞1.5。

(2)內(nèi)標(biāo)溶液的制備：取萘50mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。六、高效液相色譜法第100頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

(3)測(cè)定方法：取地西泮對(duì)照品約25mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取該溶液與內(nèi)標(biāo)溶液各5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。吸取5μl～10μl進(jìn)樣，記錄色譜圖；另取本品適量(約相當(dāng)于地西泮5mg），同法測(cè)定，按內(nèi)標(biāo)法以峰面積計(jì)算，即得。第101頁(yè)，課件共114頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.