無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)培訓(xùn)課件

培訓(xùn)目的評(píng)估無菌生產(chǎn)模擬試驗(yàn)（培養(yǎng)基灌裝或肉湯灌裝）了解在培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)過程中的關(guān)鍵點(diǎn)，以符合法規(guī)要求

學(xué)會(huì)如何對(duì)失敗進(jìn)行評(píng)估，以及可能帶來的后果

在團(tuán)隊(duì)中進(jìn)行討論1無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023無菌生產(chǎn)工藝:培訓(xùn)目的2無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023培養(yǎng)基灌裝的原則為什么無菌工藝的驗(yàn)證必須符合制藥行業(yè)的規(guī)范？

“無菌藥品”的含義是“沒有活體微生物”

在無菌檢測過程中，實(shí)際上并沒有對(duì)每個(gè)產(chǎn)品進(jìn)行檢測，所以應(yīng)采取所有努力減少污染的風(fēng)險(xiǎn)(潔凈廠房、HVAC、壓差、清洗程序、監(jiān)測計(jì)劃)

盡管采取這些措施，但污染永遠(yuǎn)是一個(gè)潛在的風(fēng)險(xiǎn)，因?yàn)闊o菌工藝操作是在一個(gè)受控但是非滅菌的環(huán)境中進(jìn)行的，并且樣品取樣數(shù)量太小，所以只有嚴(yán)重污染才可能被發(fā)現(xiàn)。3無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023培養(yǎng)基灌裝的原則制藥相關(guān)法規(guī): -法規(guī)：FDA“,無菌生產(chǎn)工藝生產(chǎn)無菌藥品的行業(yè)指南–cGMP”- -EUGMPPartI附錄1– -PIC/SPI007-2“無菌生產(chǎn)工藝驗(yàn)證指南”雖然培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)必須復(fù)制無菌生產(chǎn)條件，但是模擬試驗(yàn)與藥品實(shí)際生產(chǎn)過程采取完全相同的方式是不可能的。

什么培養(yǎng)基？灌裝多少數(shù)量？多長時(shí)間？

4無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023培養(yǎng)基灌裝的原則在無菌生產(chǎn)工藝中，最大的風(fēng)險(xiǎn)來源于潔凈室中人員的操作，所以操作人員必須參加培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)。

操作人員需要什么樣的資質(zhì)？以及什么時(shí)候可以確認(rèn)操作人員的合格性？

在無菌灌裝操作中，應(yīng)進(jìn)行環(huán)境監(jiān)測。

是否需要額外的監(jiān)測措施？

5無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023培養(yǎng)基灌裝的原則通常情況下，應(yīng)該包括產(chǎn)品實(shí)際操作過程中可能發(fā)生的“最差條件”

必須考慮可能采取那些干預(yù)措施?6無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023清洗設(shè)備隧道烘箱灌裝設(shè)備壓塞機(jī)壓蓋機(jī)模擬試驗(yàn):液體無菌灌裝生產(chǎn)線7無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023模擬試驗(yàn):培養(yǎng)基灌裝方案需要考慮的關(guān)鍵因素:

試驗(yàn)的數(shù)量和頻率

培養(yǎng)基(產(chǎn)品的替代品)

灌裝的數(shù)量

容器(玻璃瓶)體積

灌裝體積

生產(chǎn)速度(或灌裝速度)

灌裝過程的持續(xù)時(shí)間

工作班次

監(jiān)測措施

干預(yù)措施–常規(guī)的和非常規(guī)的

培養(yǎng)方法

可接受標(biāo)準(zhǔn)8無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023模擬試驗(yàn):培養(yǎng)基灌裝方案9無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023關(guān)鍵因素:試驗(yàn)的次數(shù)和頻率

培養(yǎng)基模擬試驗(yàn)的初始驗(yàn)證，至少需要成功的連續(xù)進(jìn)行3次獨(dú)立的模擬試驗(yàn)（建議在不同的工作日進(jìn)行試驗(yàn)）。

首次驗(yàn)證后，培養(yǎng)基模擬試驗(yàn)通常每年進(jìn)行2次。

當(dāng)生產(chǎn)線發(fā)生變更，并且經(jīng)過評(píng)估可能對(duì)無菌生產(chǎn)工藝有潛在危險(xiǎn)時(shí)，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行額外的培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)。

培養(yǎng)基灌裝方案10無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023關(guān)鍵因素:培養(yǎng)基(1/3)

培養(yǎng)基必須適應(yīng)廣譜微生物的生長，包括需氧菌、酵母菌和霉菌（非選擇性培養(yǎng)基）。

推薦使用大豆消化酪素瓊脂培養(yǎng)基(SCD)，以及大豆胰蛋白胨肉湯(TSB).

如果產(chǎn)品在缺氧條件、通常在氮?dú)獗Ｗo(hù)下灌裝時(shí)，需要使用厭氧培養(yǎng)基:液體硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基(FTM).

培養(yǎng)基灌裝方案11無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023關(guān)鍵因素:培養(yǎng)基(2/3)

培養(yǎng)基必須適應(yīng)微生物的生長（促生長試驗(yàn)）。被試驗(yàn)的微生物可以從藥典(美國、歐盟、日本)中選擇。另外推薦使用1~2種最常見的環(huán)境分離菌。通常情況，在培養(yǎng)結(jié)束后，一些玻璃瓶（從生產(chǎn)開始、中間、結(jié)束時(shí)取樣）進(jìn)行微生物接種，接種量＜100CFU，分別培養(yǎng)3天（細(xì)菌）和5天（酵母菌和霉菌）。培養(yǎng)基灌裝方案12無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023關(guān)鍵因素:培養(yǎng)基(3/3)

如果培養(yǎng)基中含有動(dòng)物源性成分，可能導(dǎo)致朊蛋白污染。那么很重要的是，培養(yǎng)基供應(yīng)商能夠提供證明，確認(rèn)相關(guān)物質(zhì)來源于沒有牛海綿狀腦病（BSE-free）的國家

。

另一種方法是可以使用從植物中提取的TSB培養(yǎng)基。

SDC粉末通常遭受支原體的污染，并且無法在無菌過濾中去除。在這種情況下，可以在粉末灌裝前，對(duì)粉末進(jìn)行滅菌（使用γ射線）。培養(yǎng)基灌裝方案13無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023關(guān)鍵因素:灌裝數(shù)量

灌裝的數(shù)量應(yīng)該能夠真實(shí)的反應(yīng)批量；但允許根據(jù)需要，采取最低灌裝數(shù)量，前提是應(yīng)足以反應(yīng)操作員工疲勞時(shí)對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量潛在的影響，并且足以體現(xiàn)了盡可能發(fā)生的干預(yù)措施。

一些法規(guī)中建議應(yīng)該根據(jù)批量確定灌裝的數(shù)量。

培養(yǎng)基灌裝方案14無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023關(guān)鍵因素:容器體積(1/2)

應(yīng)該考慮到灌裝容器的極端尺寸。

最大的容器（通常由于充填體積較大而導(dǎo)致最小的充填速度）通常開口較大，所以從環(huán)境中微生物侵入的潛在風(fēng)險(xiǎn)是最大的。

最小的容器（通常由于充填體積較小而導(dǎo)致最大的充填速度）體現(xiàn)了最大的操作難度；小的容器更容易破碎，穩(wěn)定性差，在設(shè)備中更容易破裂或堵塞。

培養(yǎng)基灌裝方案15無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023關(guān)鍵因素:容器體積(2/2)

在最初的驗(yàn)證中，可以二次選用最大的容器，第三次選用最小的容器。

在日常的評(píng)估中，其它規(guī)格尺寸的容器也應(yīng)該包括在驗(yàn)證計(jì)劃中。

不能使用琥珀色的容器，而應(yīng)該使用透明的容器，保證可以目視檢測到微生物的生長。

培養(yǎng)基灌裝方案16無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023關(guān)鍵因素:灌裝體積

培養(yǎng)基灌裝體積不需要與現(xiàn)實(shí)中常規(guī)的灌裝體積一致。

應(yīng)確定足夠的灌裝體積，保證可以充分接觸到容器密封部位的表面(當(dāng)它倒置和旋轉(zhuǎn)時(shí))，并且足以目視檢測到微生物在培養(yǎng)后的生長情況。

較小的容器不能灌裝的太滿，因?yàn)槿萜魃喜康目臻g中應(yīng)保持足夠的空氣，以支持需氧微生物的生長（通常應(yīng)該保留25%的空間）。培養(yǎng)基灌裝方案17無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023關(guān)鍵因素:生產(chǎn)線(或灌裝)速度

培養(yǎng)基灌裝的速度，應(yīng)符合實(shí)際生產(chǎn)的灌裝速度范圍。如果超過了限度，應(yīng)該進(jìn)行評(píng)估。

每次模擬試驗(yàn)中確定的速度應(yīng)該是符合要求的。

較高的生產(chǎn)速度，可以適用于生產(chǎn)過程中經(jīng)常受到干擾或手工操作較多的生產(chǎn)工藝。較低的生產(chǎn)速度，可以應(yīng)用于在無菌區(qū)域中無菌部件長時(shí)間暴露的生產(chǎn)工藝。

在灌裝生產(chǎn)線的起始驗(yàn)證中，一次可以選用最低速度，另外二次可以選用最高速度。

在生產(chǎn)線的日常評(píng)估中，模擬試驗(yàn)的速度應(yīng)該進(jìn)行變換。

培養(yǎng)基灌裝方案18無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023關(guān)鍵因素:灌裝的持續(xù)時(shí)間

即使使用最精確的模型模擬實(shí)際生產(chǎn)運(yùn)行，其他的因素也需要考慮，以確保其合理性。

通常情況，培養(yǎng)基灌裝的時(shí)間應(yīng)該足夠長，能夠包括所有的必需的干擾、生產(chǎn)中斷，以及反應(yīng)出潛在的人員疲勞，一個(gè)典型的培養(yǎng)基灌裝可以至少是3-4小時(shí)。一次理想的培養(yǎng)基灌裝應(yīng)該灌裝比實(shí)際產(chǎn)品生產(chǎn)時(shí)更多的數(shù)量（所有的批次均應(yīng)大于5000個(gè)單位）。對(duì)于非常大的批量或較長的生產(chǎn)過程，通常使用一些空白樣品（空的或者灌水）以維持模擬試驗(yàn)的動(dòng)態(tài)環(huán)境。這些技術(shù)可以應(yīng)用于持續(xù)多個(gè)工作日的工藝驗(yàn)證，用于驗(yàn)證可以批準(zhǔn)的最長的生產(chǎn)周期。

培養(yǎng)基灌裝方案

19無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023關(guān)鍵因素:工作班次

需要進(jìn)行無菌工藝操作的每個(gè)操作員工都必須參與培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)。

設(shè)備和生產(chǎn)線的操作員工應(yīng)該每年參加不少于一次的模擬試驗(yàn)；其它操作員工比如設(shè)備工程師和環(huán)境取樣人員也應(yīng)該采取相同的方式。

應(yīng)該確定無菌操作間可以最多容納的操作人員數(shù)量。

當(dāng)一個(gè)公司有多個(gè)班次工作時(shí)，第二個(gè)班次、第三個(gè)班次也應(yīng)該包括在培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)的計(jì)劃中。

如果手工操作（灌裝），每條生產(chǎn)線的員工都應(yīng)該參加開始的三次驗(yàn)證；在再驗(yàn)證（每6個(gè)月1次）過程中，至少有一條生產(chǎn)線的員工參加。

培養(yǎng)基灌裝方案

20無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023關(guān)鍵因素:環(huán)境監(jiān)測措施

在許多法規(guī)和制藥規(guī)范中，都提出了對(duì)微生物的要求。

在試驗(yàn)過程中，可以使用主動(dòng)采樣或被動(dòng)采樣的方法進(jìn)行空氣采樣；表面采樣最好在無菌操作結(jié)束后進(jìn)行。另外還應(yīng)該對(duì)操作人員進(jìn)行監(jiān)測。

在培養(yǎng)灌裝過程中，微生物監(jiān)測（空氣、表面、人員）和懸浮粒子監(jiān)測應(yīng)該按照各自的操作規(guī)程有效的進(jìn)行。

有時(shí)候，取樣點(diǎn)的數(shù)量可以較日常監(jiān)測適當(dāng)增加。培養(yǎng)基灌裝方案

21無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023關(guān)鍵因素:干預(yù)措施–常規(guī)的和非常規(guī)的-

干預(yù)措施應(yīng)該模擬實(shí)際運(yùn)行時(shí)可能發(fā)生的情況；培養(yǎng)基灌裝記錄中應(yīng)該記錄所有發(fā)生的干預(yù)措施，以及被移走產(chǎn)品的數(shù)量。

常規(guī)的干預(yù)措施：對(duì)于無菌生產(chǎn)線的安裝，如果已經(jīng)滅菌的部件脫離保護(hù)措施而被安裝的話，是一個(gè)潛在危險(xiǎn)。因此，開始灌裝的容器更容易反映出無菌設(shè)備裝配的潛在問題。

其它的常規(guī)干預(yù)措施：膠塞供給，

移走掉落的玻璃瓶,移走堵塞的膠塞，人員的停頓，換手套，環(huán)境的監(jiān)測。

非常規(guī)的干預(yù)措施（意外發(fā)生）：玻璃瓶破裂，灌裝針頭的更換或重新安裝，稱量調(diào)整的干預(yù)，傳感器故障，傳輸帶的調(diào)整。

培養(yǎng)基灌裝方案

22無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023關(guān)鍵因素:培養(yǎng)方法

任何灌裝的產(chǎn)品都應(yīng)該在培養(yǎng)前進(jìn)行檢查，發(fā)現(xiàn)任何不合格品（如容器密封性存在問題或完整性不好）時(shí)，都應(yīng)該被剔除并記錄。

行業(yè)規(guī)范中不同的要求:全部樣品應(yīng)在20-35℃(±2.5℃)下培養(yǎng)14天。通常在20-25℃下培養(yǎng)7天，然后在30-35℃下培養(yǎng)7天；或者在30-35℃培養(yǎng)7天后，再轉(zhuǎn)移到20-25℃培養(yǎng)7天。

關(guān)于培養(yǎng)條件的選擇，補(bǔ)充一個(gè)沒有形成共識(shí)的建議，在培養(yǎng)過程的前半個(gè)周期，將所有產(chǎn)品進(jìn)行倒置后培養(yǎng)；然后在剩余時(shí)間內(nèi)，將產(chǎn)品恢復(fù)直立位置后進(jìn)行培養(yǎng)。

培養(yǎng)基灌裝方案

23無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023關(guān)鍵因素:可接受標(biāo)準(zhǔn)

試驗(yàn)的目標(biāo)是不出現(xiàn)長菌（陽性為0），但置信度為95％時(shí)，污染率應(yīng)小于0.1%

(在5000個(gè)灌裝單位中，大約有1個(gè)被污染)。 FDA和PDA要求，不管試驗(yàn)的數(shù)量，被污染的產(chǎn)品數(shù)量都應(yīng)該是0。

很重要的一點(diǎn)，培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)的失敗是十分罕見的。

發(fā)生任何微生物污染時(shí)，均應(yīng)進(jìn)行調(diào)查。培養(yǎng)基灌裝方案

24無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023關(guān)鍵因素:可接受標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基灌裝方案

FilledunitsperrunContaminatedunitspermitted(actionlevel)30000475016300277503915041051051184061315071443081571091696010表格顯示了培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)中，不同灌裝數(shù)量時(shí)，按照置信度為95％、污染率應(yīng)小于0.1%計(jì)算，可以允許的最大污染數(shù)。加拿大衛(wèi)生部HealthCanada25無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023污染發(fā)生失敗(污染)時(shí)，必須確定最根本的原因，或者至少是最可能的原因。能夠?qū)ξ⑸镞M(jìn)行分離和鑒別（鑒定到種），這一點(diǎn)非常重要。

實(shí)施適當(dāng)?shù)募m偏措施和預(yù)防措施

必須評(píng)估失敗對(duì)已經(jīng)放行批次（如果有的話）的影響

當(dāng)糾偏措施實(shí)施后，應(yīng)該進(jìn)行一次新的培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)，以確認(rèn)其有效性

26無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023污染

率灌裝過程(時(shí)間或灌裝量)污染在灌裝過程中污染率上升

這表明污染可能來源于液體培養(yǎng)基(如與培養(yǎng)基貯罐非無菌連接，在循環(huán)管路中受到污染)。很重要的是，在灌裝結(jié)束后，保持培養(yǎng)基貯罐處于無菌狀態(tài)，當(dāng)?shù)鹊脚囵B(yǎng)基灌裝結(jié)果時(shí)，可以核實(shí)這樣的假設(shè)。27無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023污染率灌裝過程(時(shí)間或灌裝量)污染在灌裝過程中污染率下降這表明污染發(fā)生于生產(chǎn)設(shè)備中（

膠塞容器/軌道,

計(jì)量泵/針頭)，在灌裝過程中污染被部分或全部“清洗掉”。28無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023污染率灌裝過程(時(shí)間或灌裝量)污染在灌裝過程中污染率出現(xiàn)尖峰一個(gè)尖峰（在短時(shí)段的一些產(chǎn)品被污染）可能與在灌裝過程中不正確操作導(dǎo)致的關(guān)鍵失誤有關(guān)。對(duì)于這個(gè)原因，很關(guān)鍵的是必須知道被污染產(chǎn)品灌裝的準(zhǔn)確時(shí)間，以及當(dāng)時(shí)實(shí)施的干預(yù)措施（灌裝操作過程的錄像是非常有用的）29無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023污染率灌裝過程(時(shí)間或灌裝量)污染污染率出現(xiàn)尖峰后，呈上升趨勢

與前面的例子相同，但如果錯(cuò)誤的干預(yù)措施能夠影響到液體的管路/回路時(shí)（如培養(yǎng)基貯罐的變化，泵或針的替換）30無菌工藝驗(yàn)證培養(yǎng)基模擬灌裝試驗(yàn)7/21/2023污染率灌裝過程(時(shí)間或灌裝量)污染孤立事件(試驗(yàn)中少數(shù)污染)不幸的是，這