飼料中脂肪酸含量的測(cè)定

飼料中脂肪酸含量的測(cè)定第1頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第五章飼料中脂肪酸含量的測(cè)定2第2頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月脂類是一類不溶于水而易溶于乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑的有機(jī)化合物以液態(tài)或固態(tài)形式普遍存在生物界正常情況下，人體中占14～20%＜14%為消瘦＞20%則為肥胖，＞60%為極度肥胖3第3頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月脂類在近代被認(rèn)識(shí)的發(fā)展過程年代人物觀點(diǎn)1918Aron脂肪對(duì)動(dòng)物的生長(zhǎng)發(fā)育是必需的1927Evans/Burr脂肪缺乏會(huì)嚴(yán)重影響動(dòng)物的生長(zhǎng)和繁殖1929Burr脂肪缺乏會(huì)引起動(dòng)物皮膚損害和死亡率↑1938-花生四烯酸是必需脂肪酸1958-發(fā)現(xiàn)人類必需脂肪酸缺乏癥(首例嬰兒)1982Halman報(bào)道第一例亞麻酸缺乏病人1984Neuringes發(fā)現(xiàn)缺乏亞麻酸的恒河猴子代視力損害4第4頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

神經(jīng)鞘脂類醇類膽固醇腦苷脂類脂肪酸糖脂磷酸甘油酯甘油三脂脂類的形式5第5頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月脂類的分類及其主要功能脂類脂肪類脂(5%)磷脂膽固醇甘油三酯儲(chǔ)存和提供能量(可變脂)提供必需脂肪酸構(gòu)成生物膜合成脂蛋白合成激素等同磷脂6第6頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月脂類的分類及其主要功能

食物與人體內(nèi)脂肪的最重要組成形式3份脂肪酸與1個(gè)甘油分子以酯鍵連接

根據(jù)脂肪酸不同，分為中鏈三酰甘油(MCT)長(zhǎng)鏈三酰甘油(LCT)三酰甘油=甘油+3份脂肪酸7第7頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月脂類的分類及其主要功能LCTandMCT-aphysicalmixtureGlycerolLCT-Long-ChainTriglycerides(asinIntralipid)GlycerolMCT-Medium-ChainTriglycerides8第8頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月脂類的分類及其主要功能Reesterification(再酯化) STGSTG-structuredtriglyceridesinStructolipid?9第9頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月脂類的分類及其主要功能供能:9(kcal/g)能量?jī)?chǔ)存(脂肪組織內(nèi)三酰甘油)轉(zhuǎn)運(yùn)形式(脂蛋白,游離脂肪酸)絕緣層：器官保護(hù)層膜的組成成分(脂、蛋白共同構(gòu)成)細(xì)胞膜、神經(jīng)髓鞘(絕緣體)、細(xì)胞表面(磷酸甘油酯)、抗原性(糖脂類)免疫調(diào)節(jié)類花生酸如前列腺素(刺激平滑肌細(xì)胞收縮)前體固醇類激素、膽鹽、維生素D前體脂肪的功能10第10頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月脂類的分類及其主要功能決定脂肪酸的熔點(diǎn)鏈長(zhǎng)：C原子數(shù)---熔點(diǎn)飽和性/雙鍵數(shù)：雙鍵數(shù)---熔點(diǎn)脂肪酸–特征11第11頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月脂類的分類及其主要功能（一）甘油三酯功能

1)體內(nèi)貯存和提供能量

2)維持體溫正常

3)保護(hù)作用

4)內(nèi)分泌作用

5)有效地利用碳水化合物和節(jié)約蛋白質(zhì)作用

6)機(jī)體重要的構(gòu)成成分甘油三酯在營(yíng)養(yǎng)學(xué)上的功能

1.增加飽腹感；2.改善食物的感官性狀

3.提供脂溶性維生素12第12頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月（二）磷脂

1.磷脂：指甘油三酯中一個(gè)或兩個(gè)脂肪酸被含磷酸的其它基團(tuán)所取代的一類脂類物質(zhì)。其中最重要的磷脂是卵磷脂(1ecithin)，它是由一個(gè)含磷酸膽堿基團(tuán)取代甘油三酯中一個(gè)脂肪酸而形成的。

脂類的分類及其主要功能13第13頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.磷脂功能：

1）提供能量

2）細(xì)胞膜的構(gòu)成成分，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)外的物質(zhì)交流作為乳化劑有利于脂肪的吸收、轉(zhuǎn)運(yùn)和代謝。脂類的分類及其主要功能14第14頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3.磷脂的缺乏：造成細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)受損，毛細(xì)血管的脆性和通透性增加，引起水代謝紊亂，產(chǎn)生皮疹。脂類的分類及其主要功能15第15頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月一、按其碳鏈長(zhǎng)短分類

長(zhǎng)鏈脂肪酸(14碳以上)

中鏈脂肪酸(含8～12碳)

短鏈脂肪酸(6碳以下)脂肪酸(fattyacid)的分類16第16頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月二、按其飽和程度分類

飽和脂肪酸單不飽和脂肪酸多不飽和脂肪酸脂肪酸(fattyacid)的分類17第17頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月脂肪酸(fattyacid)的分類

飽和、單不飽和、多不飽和脂肪酸的結(jié)構(gòu)18第18頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月脂肪酸(fattyacid)的分類不飽和脂肪酸的類別注：每類包含一系列脂肪酸，各脂肪酸能從母體脂肪酸合成如花生四稀酸（C20:4,n-6）由亞油酸（C18:2,n-6）合成母體脂肪酸類別棕櫚油酸n-7（-7）油酸n-9（-9）亞油酸n-6（-6）亞麻酸n-3（-3）19第19頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月體內(nèi)多不飽和脂肪酸(n-3，n-6類)合成途徑摘自ModernNutritioninHealthandDisease,第9版，第82頁(yè)，1999年。脂肪酸(fattyacid)的分類20第20頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月脂肪酸(fattyacid)的分類21第21頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月三、按其空間結(jié)構(gòu)不同分類

順式脂肪酸(cis-fattyacid)

反式脂肪酸(trans-fattyacid)脂肪酸(fattyacid)的分類22第22頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月四、營(yíng)養(yǎng)學(xué)上最具價(jià)值的脂肪酸有兩類

n-3(或ω-3)系列不飽和脂肪酸,即從甲基端數(shù)，第一個(gè)不飽和鍵在第三和第四碳原子之間的各種不飽和脂肪酸；

n-6(或ω-6)系列不飽和脂肪酸，從甲基端數(shù)，第一個(gè)雙鍵在第六和第七碳之間。

CH3－(CH2)n－CH2－COOH甲基端羧基端脂肪酸(fattyacid)的分類23第23頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

名稱

代號(hào)丁酸(butyricacid)己酸(caproicacid)辛酸(caprylicacid)癸酸(capricacid)月桂酸(1auricacid)肉豆蔻酸(myristicacid)棕櫚酸(palmiticacid)棕櫚油酸(palmitoleicacid)硬脂酸(stearicacid)油酸(oleicacid)反油酸(elaidicacid)C4：0C6：0C8：0C10：0C12：0C14：0C16：0C16：1，n-7cisC18：0C18：1，n-9cisC18：1，n-9trans摘自ModernNutritioninHealthandDisease，第9版,第68頁(yè)，1999年。常見的脂肪酸24第24頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月名稱代號(hào)亞油酸(1inoleicacid)α-亞麻酸(α-1inolenicacid)γ-亞麻酸(γ-1inolenicacid)花生酸(arachidicacid)花生四烯酸(arachidonicacid)二十碳五烯酸(timnodonicacid，EPA)芥子酸(erucicacid)二十二碳五烯酸(鰶魚酸)(clupanodonicacid)二十二碳六烯酸(docosahexenoicacid，DHA)二十四碳單烯酸(神經(jīng)酸)(nervonicacid)C18：2，n-6,9,allcisC18：3，n-3，6，9，allcisC18：3，n-6，9，12allcisC20：0C20：4，n-6,9,12,15allcisC20：5，n-3，6，9,12，15allcisC22：1，n-9cisC22：5，n-3，6，9，12，15allcisC22：6，n-3，6，9，12，15，18allcisC24：1，n-9cis常見的脂肪酸25第25頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月必需脂肪酸(essentialfattyacid，EFA)：

是指人體不可缺少而自身又不能合成，必須通過食物供給的脂肪酸。

n-6系列中的亞油酸和n-3系列中的α-亞麻酸是人體必需的兩種脂肪酸。

必需脂肪酸及其功能26第26頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月必需脂肪酸功能

1）是磷脂的重要組成成分

2）與精子形成有關(guān)

3）是合成前列腺素的前體

4）有利于組織修復(fù)

5）與膽固醇的代謝有關(guān)必需脂肪酸及其功能27第27頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月脂肪酸(fattyacid)的分類和命名按碳鏈長(zhǎng)度長(zhǎng)鏈脂肪酸（14~26C）中鏈脂肪酸（8~12C）短鏈脂肪酸（2~6C）從結(jié)構(gòu)飽和脂肪酸（不含雙鍵）不飽和脂肪酸（含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵）單不飽和脂肪酸多不飽和脂肪酸

按營(yíng)養(yǎng)角度必需脂肪酸:不飽和/高度不飽和脂肪酸亞油酸、亞麻酸和花生四烯酸非必需脂肪酸：飽和/低度不飽和脂肪酸按其空間結(jié)構(gòu)不同分類順式脂肪酸(cis-fattyacid)反式脂肪酸(trans-fattyacid)28第28頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月粗脂肪分析方法

Soxhlet

(索氏)萃取法

:最一般的脂類定量方法

Weibull-Stoldt法(酸分解法):碳水化合物和蛋白質(zhì)的影響下脂類提取困難時(shí)

-其他

:RoseGottlieb法(氨基酸分解法),Gerber法,NIR,超聲波法

常規(guī)脂肪提取方法29第29頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月常規(guī)脂肪提取方法1.Soxhlet(索氏)萃取法-從1879年介紹以至今廣范圍使用的方法

-最廣范圍使用的脂肪分析法

用Petroleumether,diethylether等低沸點(diǎn)溶液提取樣品中的脂肪

提取→干燥→重量差值→確定脂肪含量

-分析步驟

?樣品前處理

:干燥,粉碎,Na2SO4脫水,Cu(OH)2沉淀→提取→溶液揮發(fā)→干燥到適當(dāng)→確定粗脂肪含量

?干燥后重(g)×100/樣品重(g)30第30頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月常規(guī)脂肪提取方法1.Soxhlet(索氏)萃取法的優(yōu)缺點(diǎn)-優(yōu)缺點(diǎn)

不需要加水分解節(jié)省時(shí)間

儀器價(jià)格低廉

廣范圍的應(yīng)用

蛋白質(zhì)、碳水化合物含量高時(shí)不適用

隨溶劑的種類、提取時(shí)間的變化結(jié)果不同

其他親水性物質(zhì)也一塊提取

磷脂只能部分提取需要大量的溶劑，制動(dòng)化不易-應(yīng)用分支

一般食品行業(yè)

為其他分析而除去脂肪31第31頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2.酸水解(acidhydrolysis)酸水解的必要性直接用Soxhlet(索氏)提取法不能把所有的脂肪提取出來(lái)碳水化合物、蛋白質(zhì)等把脂肪包裹的情況

植物細(xì)胞或starch-membrane(淀粉膜)中摻雜的情況

非溶性膠質(zhì)把脂肪包裹的情況(牛奶、乳酪、奶油)乳制品、谷類、面包、蛋類、魚類、肉類、豆腐原理試樣經(jīng)酸水解后用乙醚提取，除去溶劑即得總脂肪含量。酸水解法測(cè)得的為游離及結(jié)合脂肪的總量-酸分解過程

加入4MHCl時(shí)樣品的matrix成分分解

過濾后脂肪分離

用熱水洗滌

干燥之后提取,干燥后測(cè)量重量變化計(jì)算脂肪含量

常規(guī)脂肪提取方法32第32頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月3.其他

fat分析方法

Phospho-,di-,monoglyceride(磷脂、甘油二酯、甘油單酯)比起一般只有三個(gè)脂肪酸的甘油三酯具有低的熱量

各脂肪含有磷脂(Phosphatide)的混合物時(shí)磷脂可以分離為脂肪但是在提取過程中會(huì)有部分的損失因此完美的提取很困難原理試樣經(jīng)酸水解后用乙醚提取，除去溶劑即得總脂肪含量。酸水解法測(cè)得的為游離及結(jié)合脂肪的總量

用高沸點(diǎn)的溶劑提取→KOH???→加入酸溶液→轉(zhuǎn)換為脂肪酸→決定脂肪含量常規(guī)脂肪提取方法33第33頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月原理

為了脂肪樣品的氣象色譜分析，首先要分離為單一的脂肪酸狀態(tài)脂肪(或者脂類、不溶于水但是溶于有機(jī)溶劑的特性的物質(zhì))大概分為單純脂肪(Triglycerides,diglycerides,monoglycerides,freefattyacidscholesterolesters,cholesterolandwaxesesters)和極性或者復(fù)合脂肪(磷脂及糖脂)脂肪可以通過多種有機(jī)溶劑從組織中提取但是對(duì)于組織的酶類和非活性化的脂肪要完全提取出需要注意脂肪酸提取方法34第34頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月具有細(xì)胞壁的復(fù)合脂肪具有hydrogenbond或

hydrophobicforces及ionicbond的蛋白質(zhì)及碳水化合物的細(xì)胞內(nèi)的其他化合物連接，因此不容易提取從組織中提取脂肪需要用像chloroform(氯仿)一樣可以溶解脂肪還可以與

methanol一起把脂肪和組織之間的matrix之間的相互作用給分解的溶劑糖(sugars)、氨基酸及鹽(salts)等non-lipidcontaminants需要通過washingprocedure從提取物中剔除掉，這樣的方法可以參考Folch,Lees及

Stanley(1957)的建議脂肪酸提取方法35第35頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月用chloroform-methanol(2:1,v/v)把提取物進(jìn)行搖蕩后加入占?體積的salinesolution(0.88%inwater)進(jìn)行平衡這時(shí)混合物分成2個(gè)層,下層為氯仿層包含所有脂肪，上層為methanol-waterphase包含non-lipidcontaminants方法:2.脂肪提取樣品:flaxseed(亞麻籽),margarine(人造黃油),groundbeef,Blank(不含所測(cè)物質(zhì))

試劑:1)Folchsolution:chloroform:methanol(2:1,V/V)2)0.88%NaCl提取步驟:1)準(zhǔn)確稱取1.0ggroundbeef,0.2g的flaxseed或

0.1g的

margarine放入50mlTeflonlinedscrewcaptube后加入

20ml的

Folchsolution。脂肪酸提取方法36第36頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月2)Homogenizing3)擰緊蓋子并在

在室溫1~2h搖晃(必要時(shí)加入

N2)加入

4ml的0.88%NaCl，并充分混合

1500rpm，4℃，10mincentrifuge.

分2層.記下Chlorform層的體積，并把上層(methane+water)吸取掉，下層則包含所要提取的脂肪這樣分離的脂肪用于分析如下:TotalcrudelipidanalysisFattyacidanalysisLipidclassseparationbyTLCandtheirfattyacidcompostionLipidclassquantitationby

Iatroscan脂肪酸提取方法37第37頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月A.TotalCrudeLipidanalysisa.把下層即chloroform層用吸管移入到

glassvialb.在加入N2gas的情況下?lián)]發(fā)溶劑(chloroform)。要充分揮發(fā)后承重。c.計(jì)算:%lipid=(lipid,wt–blank)XtotalchloformvoloumAliquantofchloformXwt.sampleX100B.脂肪酸(fattyacid)分析

通過氣象色譜儀識(shí)別波峰并且利用面積(%)計(jì)算樣品中脂肪酸的成分理論利用GC分析脂肪的脂肪酸成分需要把脂肪酸進(jìn)行甲酯化(methylester)，轉(zhuǎn)換成低分子亮的非極性(non-polar)誘導(dǎo)體。為了把樣品變成揮發(fā)性變成誘導(dǎo)體可以增加安全性，減少活性，變化成可分理性改善測(cè)定效率。根據(jù)這個(gè)原理可以改善波峰的色譜性脂肪酸提取方法38第38頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月Methylester(甲酯化)方法:EsterificationFreefattyacidMethanolAcidHClorBF3Methylester+H2OMethanolTransesterificationGlyceridemixtureMethylester+-C-OH-C-OH-C-OHGlycerol脂肪酸提取方法BF3+methanolmixture(35%BF3/methanol(14%)+45%methanol+20%hexane)2ml39第39頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月加入N2gas，把Chloroform層揮發(fā)

(50~60℃)加入

BF3+methanolmixture(35%BF3/methanol(14%)+45%methanol+20%hexane)2ml并加入N2gas后擰緊蓋子.vortexing.在100℃加熱30~60min,隔15min進(jìn)行shaking(vortexing).室溫靜置，加入1~2mlhexane(己烷)和1ml0.88%NaCl混合離心取上層液轉(zhuǎn)入小玻璃瓶蓋上蓋子GC分析

脂肪酸提取方法Methylester(甲酯化)步驟:40第40頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月41第41頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月42第42頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月TheAgilent7890AGasChromatograph飼料中脂肪酸分析43第43頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月44第44頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月飼料中脂肪酸分析45第45頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月Filters/TrapsAirHydrogenGasCarrierColumnGasChromatographygassysteminletcolumndetectordatasystemDatasystemSyringe/SamplerInletsDetectorsRegulatorsHRESET飼料中脂肪酸分析46第46頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月GasChromatography原理示意圖飼料中脂肪酸分析47第47頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月飼料中脂肪酸分析48第48頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月49第49頁(yè)，課件共59頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月GC探測(cè)器燃燒性探測(cè)器(1)FlameIonizationDetectors(FID)(2)NitrogenPhosphorousDetector(NPD)(3)FlamePhotometricDetector(FPD)-非燃燒性探測(cè)器(4)ThermalConductivityDetector(TCD)(5)ElectronCaptureDetector(ECD)(6)PhotoIonizationDetector(PID)※注意事項(xiàng)燃燒性探測(cè)器(