抗體（免疫學(xué)檢驗(yàn)課件）

第五章抗體概念：抗體（antibody，Ab）機(jī)體受抗原刺激后B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞，由漿細(xì)胞分泌的一種能與抗原特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白。免疫球蛋白（immunoglobuin，Ig）具有抗體活性或化學(xué)結(jié)構(gòu)與抗體相似的球蛋白

所有的抗體都是免疫球蛋白；而免疫球蛋白不都是抗體。免疫球蛋白與抗體的區(qū)別：第一節(jié)抗體的結(jié)構(gòu)一、基本結(jié)構(gòu)經(jīng)二硫鍵共價(jià)結(jié)合2條重鏈(H鏈）和2條輕鏈（L鏈）：四肽鏈結(jié)構(gòu)-S-S-S-SS-SN端C端LLHH（以IgG為例）

1.重鏈（heavychain)：簡(jiǎn)稱H鏈，由440～550個(gè)氨基酸組成，分子量約55KD～75KD。H鏈含有少量糖類，所以Ig屬于糖蛋白。根據(jù)H鏈的抗原性不同，可將免疫球蛋白（Ig)分為五類。IgG

的H鏈：γ鏈（gamma)IgA

的H鏈：α鏈(alpha)IgM

的H鏈：μ鏈(mu)IgD的H鏈：δ鏈(delta)IgE的H鏈：ε鏈(epsilon)二、重鏈和輕鏈五類免疫球蛋白結(jié)構(gòu)示意圖

2.輕鏈（lightchain）：簡(jiǎn)稱L鏈，由211～217個(gè)氨基酸組成，分子量約25KD。根據(jù)L鏈的抗原性不同，把L鏈分成二型：κ型，λ型。同一個(gè)Ig分子上H鏈同類，L鏈同型，把Ig分子分成五類十型。（一）可變區(qū)（variableregion，V區(qū)）位于L鏈靠近N端的1/2和H鏈的1/4，這個(gè)區(qū)段的氨基酸組成、排列順序是可以變化的。超變區(qū)（hypervariableregion，HVR）或互補(bǔ)決定區(qū)（CDR）可分為CDR1，CDR2，CDR3是V區(qū)中氨基酸的組成和排列順序變化頻率更高的區(qū)域，也是抗體與抗原決定簇結(jié)合的部位。二、抗體的功能區(qū)高變區(qū)（互補(bǔ)決定區(qū)CDR）、抗原結(jié)合點(diǎn)、獨(dú)特型決定簇統(tǒng)一在此基礎(chǔ)上。（二）恒定區(qū)（constantregion，C區(qū)）

位于L鏈靠近C端的1/2和H鏈靠近C端的3/4區(qū)域，這一區(qū)域的氨基酸組成和排列順序比較穩(wěn)定，所以叫恒定區(qū)，H鏈和L鏈的恒定區(qū)分別稱為CH和CL。重鏈輕鏈N端C端可變區(qū)恒定區(qū)鉸鏈區(qū)二硫鍵（H鏈）（L鏈）(V區(qū))(C區(qū))抗原結(jié)合部位

一、免疫球蛋白的基本結(jié)構(gòu)：抗原（三）功能區(qū)輕鏈VL、

CL（二個(gè)）重鏈IgG、IgA、IgD：VH、

CH1

、CH2

、CH3

（四個(gè)），IgM、IgE：多了一個(gè)CH4功能區(qū)。

（以IgG為例）VL、VH：

結(jié)合抗原CL、CH1：部分遺傳標(biāo)志CH2：結(jié)合補(bǔ)體、

通過(guò)胎盤(pán)CH3：結(jié)合細(xì)胞（FcR）

含有較大量的Pro，具有柔韌性，可折疊，分別形成T型和Y型;有利于Ig與不同距離的抗原決定簇結(jié)合。-S-S-S-SS-SNNCLHVHCH1CH2CH3（四）鉸鏈區(qū)（Hinge

region）（一）連接鏈（joiningchain，J鏈)(1)化學(xué)本質(zhì)：漿細(xì)胞分泌的多肽鏈(2)存在：IgM（五聚體）,SIgA（雙體），以二硫鍵的形式結(jié)合在Ig的H鏈上。連接5個(gè)單體IgM成五聚體，2個(gè)IgA成雙聚體，故J鏈起穩(wěn)定多聚體的作用。

三、抗體的其它結(jié)構(gòu)（二）分泌片（secretorypiece,SP）

1.化學(xué)本質(zhì):多肽鏈(70kD)2.來(lái)源：黏膜上皮細(xì)胞3.作用：

a.幫助IgA穿越黏膜

b.保護(hù)sIgA抵抗蛋白酶的水解作用J鏈J鏈分泌片Ig的其他成分木瓜蛋白酶四、抗體的水解片段（一）木瓜蛋白酶水解片段Fab段Fc段木瓜蛋白酶水解片段

IgG→2Fab+1Fc胃蛋白酶（二）胃蛋白酶水解片段F（ab’）2段pFc’段胃蛋白酶水解片段

IgG→F（ab′）2+pFc′第二節(jié)抗體分子的抗原表位指同一種屬內(nèi)所有個(gè)體Ig共有的抗原特異性，其抗原表位主要存在于Ig的C區(qū)（CH和CL）。一、同種型

1.類和亞類（根據(jù)H鏈的抗原性不同）

IgG—

γ(gamma)IgA—α(alpha)IgM—μ(mu)IgD—δ(delta)IgE—ε(epsilon)(1)類

(2)亞類

IgG：IgG1，IgG2，IgG3，IgG4

IgA：IgA1，IgA22.型和亞型(根據(jù)輕鏈C區(qū)抗原特異性不同分型)(1)型κ(kappa)型

λ(lambda)型(2)亞型(λ鏈)：

OZ(+)(或λ1)：第190位(亮氨酸)OZ(-)(或λ2)：第190位(精氨酸)Kern(+)(或λ3)：第154位(甘氨酸)Kern(-)(或λ4)：第154位(絲氨酸)

同一種屬內(nèi)不同個(gè)體的Ig分子抗原性不同，在同種異體間免疫可誘導(dǎo)免疫反應(yīng)。這種抗原決定簇主要位于CH和CL。由個(gè)體遺傳基因所決定的，故稱為遺傳標(biāo)記。1.IgG1、IgG2、IgG3的遺傳標(biāo)記稱Gm,分別稱G1m,G2m,G3m。

2.IgA2的遺傳標(biāo)記稱Am,分別稱A2m1、A2m2。

3.κ鏈的遺傳標(biāo)記稱Km,分別稱Km1、Km2、Km2二、同種異型

同一個(gè)體不同B細(xì)胞克?。贵w形成細(xì)胞克?。┧a(chǎn)生的Ig分子，其V區(qū)的抗原特異性也不同。獨(dú)特型抗原決定簇存在Ig的V區(qū)，不同特異性的抗體其獨(dú)特型也不同除血清中的Ig外，淋巴細(xì)胞（T、B細(xì)胞）表面的抗原受體也具有獨(dú)特型決定簇。三、獨(dú)特型

病毒毒素結(jié)合毒素結(jié)合病毒使毒素失去毒性結(jié)合細(xì)菌阻止病毒感染細(xì)胞抑制細(xì)菌吸附第三節(jié)抗體分子的生物學(xué)作用一、特異性識(shí)別抗原二、通過(guò)經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體Ab（IgM、IgG）+Ag→C1q→補(bǔ)體經(jīng)典途徑IgG4、IgA和IgE的凝聚物→

補(bǔ)體旁路途徑

(1)介導(dǎo)Ⅰ型超敏反應(yīng)；(2)調(diào)理作用（opsonization）：IgG+抗原(顆粒性)→FcγR（單核、巨噬細(xì)胞及中性粒細(xì)胞）→促吞噬細(xì)胞吞噬；(3)ADCC：IgG+抗原(靶細(xì)胞)→FcγR（NK細(xì)胞→

殺傷靶細(xì)胞。

三、結(jié)合Fc受體單核吞噬細(xì)胞抗原吞噬細(xì)胞的調(diào)理作用Fc受體單核吞噬細(xì)胞抗原吞噬細(xì)胞的調(diào)理作用G表面抗原ADCCADCC效應(yīng)FNK細(xì)胞Fc受體IgGADCC效應(yīng)ADCC效應(yīng)NK細(xì)胞FADCC效應(yīng)ADCC效應(yīng)四、結(jié)合細(xì)菌蛋白五、穿過(guò)胎盤(pán)和黏膜人IgGFc段+葡萄菌A蛋白（SPA)；人IgGFc段+鏈球菌(A、C和G群)G蛋白；而其Fab段活性不變(1)IgA介導(dǎo)的黏膜免疫作用(2)IgG通過(guò)胎盤(pán)特性：人類的IgG有四種亞型：IgG1、IgG2、IgG3、IgG41.血清中含量最多，占Ig總量的75%；

2.唯一能通過(guò)胎盤(pán)的抗體（在新生兒抗感染中起重要作用）；第四節(jié)抗體分子的特性和功能一、IgG

3.出生后3個(gè)月開(kāi)始合成，3～5歲達(dá)成人水平

(8.0mg/ml～17mg/ml)；4.半衰期長(zhǎng)，約23天?？垢腥镜闹饕贵w功能：抗菌抗體抗病毒抗體抗毒素抗體二、IgＭ

1.五聚體，分子量最大，又稱巨球蛋白；

2.人類發(fā)育過(guò)程中最早合成的Ig；

3.體液免疫應(yīng)答最先產(chǎn)生的Ig：感染早期免疫；

4.半衰期5天—血清中特異性IgM水平增高提示有近期感染；

5.IgM不能通過(guò)胎盤(pán)→臍帶血或新生兒血清中IgM；水平升高表明胎兒有宮內(nèi)感染

6.B細(xì)胞膜IgM（mIgM）→體液免疫應(yīng)答；

特性：1.分兩型血清型：占血清Ig10%~20%分泌型（SIgA）：主要分布于唾液、乳汁等分泌液中2.嬰兒可從母乳中獲得SIgA3.出生后4～6個(gè)月合成，青少年時(shí)期達(dá)成年人水平。功能：SIgA是黏膜局部抗感染的重要抗體。三、IgＡ1.由1個(gè)單體構(gòu)成，血清中含量極少；2.作為B細(xì)胞上的表面標(biāo)志。IgD是B細(xì)胞的重要表面標(biāo)志B細(xì)胞的分化過(guò)程中首先出現(xiàn)SmIgM，后來(lái)出現(xiàn)SmIgD它的出現(xiàn)標(biāo)志著B(niǎo)細(xì)胞成熟了。四、IgＤ特性：1.血清中含量極微；2.具親細(xì)胞性（親細(xì)胞抗體）功能：與I型超敏反應(yīng)有關(guān)。C4五、IgＥIgGIgMIgA/SIgAIgDIgE存在形式單體五聚體單體/二聚體單體單體相對(duì)分子質(zhì)量(×1000)146970160/385184188血清中總Ig百分含量70~755~1015~20＜10.002半衰期235633出現(xiàn)時(shí)間出生后三個(gè)月出生前出生后四個(gè)月晚晚五類抗體的特性比較第五節(jié)單克隆抗體定義：

由一個(gè)B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞系產(chǎn)生的只識(shí)別抗原分子上一種抗原決定簇的抗體。一、單克隆抗體技術(shù)的基本原理骨髓瘤細(xì)胞—無(wú)限增殖；小鼠脾B細(xì)胞—合成、分泌特異性抗體。二、單克隆抗體制備的基本方法抗原非分泌性小鼠骨髓瘤細(xì)胞脾細(xì)胞在PFG作用下細(xì)胞融合轉(zhuǎn)移到HAT培養(yǎng)基骨髓瘤細(xì)胞被HAT殺死，脾細(xì)胞逐漸死亡，融合細(xì)胞存活雜交瘤細(xì)胞的篩選和克隆建株篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞單克隆抗體的制備示意圖廣泛用于生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。如：作為診斷試劑用于許多血清學(xué)檢測(cè)，用于治療腫瘤，自身免疫性疾病，抑制同種異體移植排斥反應(yīng)。

三、單克隆抗體醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用第六節(jié)基因工程抗體

又稱重組抗體,是指利用重組DNA及蛋白質(zhì)工程技術(shù)對(duì)編碼抗體的基因按不同需要進(jìn)行加工改造和重新裝配，經(jīng)轉(zhuǎn)染適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞所表達(dá)的抗體分子。已被廣泛應(yīng)用于疾病的臨床診斷、預(yù)防和治療及基礎(chǔ)理論研究等領(lǐng)域。

一、人源化抗體

以基因克隆及DNA重組技術(shù)改造鼠源性單克隆抗體，使其大部分氨基酸序列被人源序列所取代，這樣既保留了親本鼠克隆抗體的親合力和特異性，又降低了鼠單克隆抗體的異源性。如：人-鼠嵌合抗體二、全人源化抗體最理想的抗體分子,不含任何鼠源成分。此種抗體不僅完全避免了HAMA的產(chǎn)生，且特異性、親和力不受影響，毒副作用小，已成為治療性抗體藥物發(fā)展的必然趨勢(shì)。三、小分子抗體由抗體分子中抗原結(jié)合部位片段組建而成的抗體稱為小分子抗體。（一）單區(qū)抗體

；（二）單鏈抗體

；（三）二硫鍵穩(wěn)定抗體；（四）Fab片段

；四、特殊基因工程抗體（一）雙特異性抗體；（二）催化抗體；（三）抗體融合蛋白；小結(jié)掌握抗體與免疫球蛋白的區(qū)別。掌握抗體的結(jié)構(gòu)與特性免疫檢驗(yàn)質(zhì)量控制包括定量實(shí)驗(yàn)、半定量實(shí)驗(yàn)和定性實(shí)驗(yàn)三個(gè)方面。掌握五類抗體的功能。解釋各類抗體的功能。解釋抗體在人體免疫中所起的作用。習(xí)題1產(chǎn)婦初乳中含量最多的Ig是

A．slgAB．IgM

C．IgGD．IgAE．IgE2抗體主要存在于血清瓊脂電泳的

A。α球蛋白區(qū)

B．α球蛋白區(qū)

Cγ球蛋白區(qū)

D巨球蛋白區(qū)

E．白蛋白區(qū)3天然ABO血型抗體屬于

A．IgGD．IgAC．IgMD．IgDE．IgE4下列說(shuō)法正確的是

A免疫球蛋白就是抗體

B．免疫球蛋白不是抗體

C免疫球蛋白與抗體無(wú)關(guān)

D抗體不——定是免疫球蛋白

E．免疫球蛋白不一定是抗體，抗體都是免疫球蛋白5在機(jī)體早期免疫防御中發(fā)揮重要作用的Ig是

A．IgMB．IgAC．IgDD．IgGE．1gE6關(guān)于免疫球蛋白的生物學(xué)功能，下列錯(cuò)誤的是

A與抗原特異性結(jié)合

B激活補(bǔ)體

C形成攻膜復(fù)合體

D．介導(dǎo)ADCCE親細(xì)胞作用7關(guān)于IgM的特性，下列正確的是

A是分子量最小的IgB有鉸鏈區(qū)

C主要在血液中發(fā)揮抗感染作用

D在血內(nèi)含量高、半衰期長(zhǎng)

E．激活補(bǔ)體的能力比IgG弱8．血清內(nèi)五類免疫球蛋白的含量由少到多的順序是

AIgD、IgG、IgM、ISE、IgAB．IgA、IgG、IgD、IgE、IgMC．IgG、IgA、IgM、IgD、IgEDISE、IgD、IgM、IgA、IgGE．IgM、IgG、IgA、IgE、IgD9膜表面免疫球蛋白(Smlg)指的是A、T細(xì)胞抗原受體B、B細(xì)胞抗原受體C、T細(xì)胞表面受體D、B細(xì)胞補(bǔ)體受體E、免疫活性細(xì)胞的抗原受體10免疫球蛋白肽鏈與抗原結(jié)合的功能區(qū)是A、CL、CH1B、CH2C、CH3D、CH3、

E、VH、VL11．木瓜蛋白酶可將IgG水解成何片段A、F(ab’)2B、FCC、FabD、FC及FabE、PEC’11能與肥大細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞結(jié)合的Ig，是

A．IgMB．IgGC．IgAD．IgDE．IgE12能通過(guò)胎盤(pán)，又能與葡萄球菌A蛋白結(jié)合的免疫球蛋白是A.IgAB．IgGCIgMD.lgEE.IgD13新生兒臍血中哪類Ig水平增高表示有宮內(nèi)感染AIgGBIgMCIgADIgEEIgD14主要在粘膜局部抗感染的Ig是AIgGBIgECIgDDSIgAEIgM15．人類IgG開(kāi)始合成的時(shí)間是

A胚胎15周B新生兒期C出生后3個(gè)月D出生后4-6個(gè)月E胚胎末期16．免疫接種后首先產(chǎn)生的抗體是AIgMBIgGCIgADIgDE