高通量離體活性測定方法在殺蟲活性研究方面的應用細胞毒理學在殺蟲課件

第九章

殺蟲劑毒理學研究新方法高通量離體活性測定方法在殺蟲活性研究方面的應用細胞毒理學在殺蟲劑作用機理方面的應用電生理測定方法在殺蟲劑作用機理方面的應用QSAR分析方法分子生物學研究方法在殺蟲劑作用機理方面的應用高通量篩選（highthroughputscreening，HTS）就是以玻璃片、膜片或培養(yǎng)板為載體，用高密度、微量自動化加樣的方法，實現(xiàn)短時間內分析大量樣本的篩選方法。采用傳統(tǒng)方法，一年內僅能篩選75000個樣品。采用高通量篩選，每天的篩選量可高達100000種化合物。高通量離體活性測定方法高通量篩選的組成自動化操作系統(tǒng)高靈敏度的檢測系統(tǒng)分子、細胞水平的高特異性體外篩選模型被篩樣品管理庫數(shù)據采集傳輸處理系統(tǒng)高通量篩選的應用對樣品成分進行大規(guī)模的生物活性篩選，是高通量篩選的最主要的應用。高通量篩選流程圖趙元弟，杜磊，陳同生，曾紹群，駱清銘.高通量藥物篩選技術的研究現(xiàn)狀及光編碼技術在其中的應用.激光生物學報，2003（03）.高通量篩選的應用從分子水平、細胞水平認識藥物的作用和作用機理。MTT法與細胞毒性流式細胞術細胞毒理學方法MTT法原理MTT法（MTT比色法），是一種檢測細胞存活和生長的方法。其原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲瓚，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數(shù)成正比。MTT法操作流程實例流式細胞術流式細胞術（FlowCytometry,FCM）是一種在液流系統(tǒng)中，快速測定單個細胞或細胞器的生物學性質，并把特定的細胞或細胞器從群體中加以分類收集的技術。流式細胞術的原理流式細胞術的應用其特點是通過快速測定庫爾特電阻、熒光、光散射和光吸收來定量測定細胞DNA含量、細胞體積、蛋白質含量、酶活性、細胞膜受體和表面抗原等許多重要參數(shù)。根據這些參數(shù)將不同性質的細胞分開，以獲得供生物學和醫(yī)學研究用的純細胞群體。目前最高分選速度已達到每秒鐘3萬個細胞。流式細胞術檢測細胞凋亡圖1791年，Galvanin發(fā)現(xiàn)動物的肌肉電位1849年，Dubois等改進刺激技術和記錄技術，發(fā)現(xiàn)生物電的兩種基本形式——靜息電位和動作電位，使電生理學逐漸成為一門獨立的學科。隨著近代電子技術和分子生物學的發(fā)展和應用，電生理學成為研究昆蟲生理功能的一項專門技術和方法。電生理測定方法電生理學在昆蟲毒理學上的應用研究殺蟲劑的毒理機制研究殺蟲劑的抗藥性和選擇性目前的研究主要是感覺神經器官和神經系統(tǒng)的電活動。觸角電位儀原理圖觸角電位圖張龍.飛蝗嗅覺的細胞與分子機制研究進展.生命科學，2010（12）.膜片鉗技術膜片鉗技術(patch-clamptechnique)是在電壓鉗基礎上發(fā)展起來的一種新技術,可在很小膜面積上進行電壓鉗制,即可將細胞膜上一個通道的電位固定在一定水平,觀察流過通道的離子電流。膜片鉗技術原理圖（Quantitativestructure-activityrelationships，QSAR）——定量結構活性相關性QSAR的原理是基于設想農藥分子進入生物體內，通過一系列的生物膜，經過多種細胞及細胞器的貯存、釋放，最終到達作用部位，與靶標作用，從而產生活性反應。QSAR分析方法QASR是對已知先導化合物的一系列衍生物進行定量的生物活性測定，分析衍生物的主要物理化學參數(shù)和生物活性之間的關系，建立結構——活性數(shù)學模型，并以這種數(shù)學模型來指導藥物分子設計，克服盲目大量合成篩選的弊端。天然除蟲菊酯結構式它以電子計算機為處理工具，來分析化合物結構與活性之間的關系，從而確定一個化合物分子式中哪一部位為其活性部位，然后在農藥活性測定及電腦分析的指導下，設計出結構新穎的具有高的生物活性的化合物。擬除蟲菊酯類結構式分子生物學研究方法DNA基本操作技術RNA基本操作技術基因克隆技術蛋白質組和蛋白質組