紫外和熒光分光光度計詳解課件

紫外和熒光分光光度計工作原理紫外和熒光分光光度計工作原理1

紫外—可見分光光度計

基本結構：六個基本部分組成光源單色器比色室檢測器放大器顯示裝置紫外—可見分光光度計基本結構：六個基本部分組2光源：發(fā)出所需波長范圍內連續(xù)光譜，有足夠光強度,穩(wěn)定；所用燈的不同提供光的區(qū)間范圍也不同?？梢姽鈪^(qū)：鎢燈，碘鎢燈(320～2500nm) 紫外區(qū)：氫燈，氘燈(180～375nm)紫外可見光區(qū)：氙燈（190-800nm）光源：3單色器：核心部件

將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為單色光的裝置。棱鏡:玻璃350～3200nm石英185～4000nm色散原理：依據(jù)不同波長光通過棱鏡時折射率不同；特點：色散均勻，譜帶寬窄不同；入射狹縫準直透鏡棱鏡聚焦透鏡出射狹縫白光紅紫λ1λ2單色器：核心部件入射狹縫準直透鏡棱鏡聚焦透鏡出射狹縫白光紅紫4光柵：在鍍鋁玻璃表面刻有數(shù)量很大的等寬度等間距條痕(600、1200、2400條/mm)特點：波長范圍寬、色散均勻、分辨性能好、使用方便。M1M2出射狹縫光屏透鏡平面透射光柵光柵衍射示意圖分光原理：光通過光柵，發(fā)生衍射和干涉而分光光柵：M1光屏透鏡平面透射光柵光柵衍射示意圖分光原理：5樣品室樣品室：容納各種光徑的吸收池的裝置和附件。

比色池：如：普通比色池、微量池、流動池等。 紫外區(qū)一定要用石英杯，可見區(qū)可用玻璃杯。檢測器：（光電檢測器）

常見：光電池、光電管、光電倍增管和光電二極管陣列。放大裝置、轉換器和記錄儀：

將測量信息放大、顯示并輸出的裝置。樣品室6

單光束紫外可見分光光度計：單光束紫外可見分光光度計：7

雙光束紫外可見分光光度計：雙光束紫外可見分光光度計：8光源—吸收池—單色器—DAD檢測器—數(shù)據(jù)轉換記錄全譜分析光源—吸收池—單色器—DAD檢測器—數(shù)據(jù)轉換記錄全譜分9

偏離朗伯—比爾定律的因素：

1、譜帶寬度和溶液本身性質

溶劑的選擇：1、在測定的波長范圍內吸收較少2、不會與溶質（被測樣品）起化學反應3、揮發(fā)性較小特殊樣品：1、會發(fā)射熒光的被測樣品2、非常混濁的一片偏離朗伯—比爾定律的因素：1、譜帶寬度和溶液10

2、儀器性能與測量誤差儀器性能：儀器誤差，雜散光干擾等，系統(tǒng)誤差誤差引起透光率（T）產(chǎn)生誤差△T，濃度（C）也隨之產(chǎn)生誤差△C。什么情況下濃度的相對誤差△C/C最小？當T%=36.8%（A=0.456）時,測量所引起的相對誤差最小。T=20%-65%，A=0.2~0.8之間進行測量,相對測量誤差較小.減少誤差的方法采取調節(jié)光徑與濃度C的辦法減少誤差

差示光譜法（低濃度、高濃度）T2、儀器性能與測量誤差T11

3、光的反射朗伯—比爾定律在推導過程中，曾經(jīng)忽略了溶液對光的反射作用。如果溶液和溶劑對光的反射有較大的差異，就會引起比爾定律的偏離。為了消除誤差，要盡可能地使參比溶液與樣品溶液的組成接近。

3、光的反射12

4、其它因素的影響：檢測器非線性響應、溶液pH值、光分解、水解、溫度等對吸光度產(chǎn)生影響；在選擇參比溶液和顯色劑時也要注意。

4、其它因素的影響：13DAD（PAD）檢測器分光光度計二極管陣列檢測器（DAD）又稱光電二極管列陣檢測器（PAD）PDA（photo-diodearray）PDAD（photo-diodearraydetector）Diodearraydetector，DAD20世紀80年代出現(xiàn)的一種光學多通道檢測器。一個二極管對應接受光譜上一個納米譜帶寬的單色光每一個二極管相當于一個單色器的出口狹縫DAD檢測器的靈敏度比通常的UA檢測器約低一個數(shù)量級。單純用于含量測定或雜質檢查時，還是采用UA檢測器為好。DAD（PAD）檢測器分光光度計14紫外和熒光分光光度計詳解ppt課件15F-4500熒光分光光譜儀（日本Hitachi）F-4500熒光分光光譜儀（日本Hitachi）16熒光分光光譜儀工作原理：光源的激發(fā)光照射到樣品池中，激發(fā)樣品中的熒光物質發(fā)出熒光，被光電倍增管接受，最后以圖或數(shù)字的形式顯示出來。光源：高壓汞燈或氙燈，在190nM-800nM范圍，發(fā)射強度較大的連續(xù)光譜。激發(fā)單色器：置于光源和樣品室之間的單色器（第一單色器）發(fā)射單色器：置于樣品室和檢測器之間的為單色器（第二單色器。樣品室：石英池(液體樣品用)或固體樣品架(粉末或片狀樣品)組成。光源與檢測器成直角安排，測量固體時，光源與檢測器成直角。檢測器：光電管或光電倍增管?？蓪⒐庑盘柗糯蟛⑥D為電信號。熒光分光光譜儀工作原理：光源的激發(fā)光照射到樣品池中，激發(fā)樣品17熒光光譜儀工作原理示意圖相對應該強度熒光光譜儀工作原理示意圖相對應該強度18紫外和熒光分光光度計詳解ppt課件19

紫外-可見與熒光分光光度計工作原理區(qū)別：紫外-可見與熒光分光光度計工作原理區(qū)別：20其它附屬設施控溫系統(tǒng)和裝置停留裝置固體樣品架其它附屬設施控溫系統(tǒng)和裝置21儀器功能VU—Vis儀光譜掃描（吸收、透光率、能量）定波長或多波長測定時間掃描擬合運算功能輸出（強大的Excel表格輸出）液體樣品熒光光譜儀光譜掃描（Em、Ex）時間掃描同步熒光和共振熒光磷光分析時間分辨（熒光壽命）擬合運算功能輸出（強大的Excel表格輸出）液體、固體樣品儀器功能VU—Vis儀熒光光譜儀22紫外和熒光分光光度計詳解ppt課件23熒光猝滅猝滅：非光輻射躍遷