血型的鑒定方法及操作課件

紅細胞血型系統(tǒng)及其檢測重慶醫(yī)科大學(xué)臨床血液教研室1A紅細胞血型系統(tǒng)及其檢測重慶醫(yī)科大學(xué)臨床血液教研室1A血型的發(fā)現(xiàn)1900年，ABO血型系統(tǒng)1940年，Rh血型系統(tǒng)

KarlLandsteiner2A血型的發(fā)現(xiàn)1900年，ABO血型系統(tǒng)2A血型（bloodtype)狹義地講，存在于紅細胞上的特異性同種抗原。廣義地講，是人類遺傳多態(tài)性的一種表現(xiàn)，血液中各種成分都有其各自型別。3A血型（bloodtype)3A紅細胞血型（系統(tǒng)，抗原）是存在于紅細胞上的化學(xué)結(jié)構(gòu)，化學(xué)本質(zhì)是糖和多肽，是紅細胞膜上的跨膜蛋白。存在于紅細胞膜上（完全抗原），也存在于上皮細胞以及各種體液和分泌液中（半抗原）。RBC存在于體液、分泌液中4A紅細胞血型（系統(tǒng)，抗原）RBC存在于體液、分泌液中4A紅細胞血型抗體天然抗體、免疫抗體規(guī)則抗體、不規(guī)則抗體完全抗體，不完全抗體同種抗體，自身抗體5A紅細胞血型抗體天然抗體、免疫抗體5A天然抗體和免疫抗體天然抗體：ABO血型系統(tǒng)中，A型個體血漿中天然存在抗B，B型個體血漿中存在抗A。多數(shù)天然抗體是IgM型，最佳反應(yīng)溫度為室溫或更低。免疫抗體：一般通過輸血、妊娠、注射三種方式接受抗原刺激，多數(shù)免疫抗體是IgG型，最佳反應(yīng)溫度是37oC。6A天然抗體和免疫抗體天然抗體：ABO血型系統(tǒng)中，A型個體血漿中天然抗體和免疫抗體特性比較7A天然抗體和免疫抗體特性比較7A8A8A規(guī)則抗體和不規(guī)則抗體規(guī)則抗體：ABO系統(tǒng)產(chǎn)生抗Ａ、抗Ｂ是有規(guī)律的。

Landsteiner規(guī)律：Ａ型－抗Ｂ，Ｂ型－抗Ａ，Ｏ型－抗Ａ，抗Ｂ不規(guī)則抗體：除ABO系統(tǒng)外，其他系統(tǒng)產(chǎn)生的抗體均不符合上述規(guī)律。

正常人血液中一般沒有不規(guī)則抗體，又稱為意外抗體（unexpectedantibody）。

9A規(guī)則抗體和不規(guī)則抗體規(guī)則抗體：ABO系統(tǒng)產(chǎn)生抗Ａ、抗Ｂ是有規(guī)完全抗體和不完全抗體完全抗體：在鹽水介質(zhì)中能凝集紅細胞抗體，多為IgM抗體。不完全抗體：能使紅細胞致敏，但在鹽水質(zhì)中不能凝集紅細胞，需要通過抗球蛋白法或其他非鹽水介質(zhì)法進行檢測，多為IgG抗體?？笽gG10A完全抗體和不完全抗體完全抗體：在鹽水介質(zhì)中能凝集紅細胞抗體，同種抗體、自身抗體同種抗體：針對患者缺乏的抗原所產(chǎn)生的抗體即為同種抗體，如Rh陰性者輸血后產(chǎn)生的抗Ｄ抗體。自身抗體：針對自身抗原產(chǎn)生的抗體，如引起自身免疫型溶血性貧血。11A同種抗體、自身抗體11A紅細胞血型紅細胞血型分類：

ISBT（TheInternationalSocietyofBloodTransfusion)2002年，29個系統(tǒng)，200多個抗原目前，30個系統(tǒng)，300多個抗原12A紅細胞血型紅細胞血型分類：12A一、ABO血型系統(tǒng)

1.ABO血型抗原和抗體特性13A一、ABO血型系統(tǒng)

1.ABO血型抗原和抗體特性13A2.ABO血型的遺傳與生化（1）ABO基因型與表型

A型——AA，AOB型——BB，BOAB型——ABO型——O

A，B是顯性基因，O是隱性基因

ABO基因不是產(chǎn)生ABO抗原的遺傳密碼14A2.ABO血型的遺傳與生化（1）ABO基因型與表型14A（2）ABO血型的生化合成H基因——

α

–L-fucocyltransferase，19chr

A基因——

α–N-acetyl-0-galactosaminyltransferase，9chrB基因——galactosyltransferase,9chrO基因——無效基因，不產(chǎn)生轉(zhuǎn)移酶，O型紅細胞含有H物質(zhì)基因酶合成抗原15A（2）ABO血型的生化合成H基因——α–L-fucocy思考：A、B、AB型紅細胞是否存在H物質(zhì)？16A思考：A、B、AB型紅細胞是否存在H物質(zhì)？16A（3）ABH可溶性抗原形成分泌型血型物質(zhì)：ABH抗原存在于紅細胞、內(nèi)皮細胞、血小板、淋巴細胞、上皮細胞等，也可出現(xiàn)在除腦脊液外的分泌液中，唾液中最豐富。Se，se基因——與體液分泌有關(guān)，Se編碼α–L-fucocyltransferase，形成分泌液中的H抗原，H也可轉(zhuǎn)化為A或B抗原，Se不影響紅細胞上ABH形成，Se為分泌型；se為非分泌型；19chr。17A（3）ABH可溶性抗原形成分泌型血型物質(zhì)：ABH抗原存在于紅分泌型血型物質(zhì)的意義：在RBC抗原弱表達個體中確定ABO血型。檢測唾液、羊水中的血型物質(zhì)，輔助鑒定血型和預(yù)測胎兒血型。能中和天然抗體（IgM），有助鑒別Ab性質(zhì)。18A分泌型血型物質(zhì)的意義：18A3.ABO亞型：亞型：同一血型抗原的結(jié)構(gòu)、性能（質(zhì)）或抗原位點數(shù)（量）存在一定差異。A亞型：A1，A2，A3，Ax，Ay，AmB亞型：B1，B2，B3，Bx，Bm19A3.ABO亞型：19A二、Rh血型系統(tǒng)1940年，Landerstein和Wiener用恒河猴（rhesus）RBC免疫家兔或豚鼠，得到一種抗體，可與85%白種人紅細胞發(fā)生反應(yīng)。Rh系統(tǒng)有50個抗原，最復(fù)雜，重要性僅次于ABO血型。20A二、Rh血型系統(tǒng)20A1.遺傳與發(fā)育規(guī)律胎兒早期充分發(fā)育，臍帶血/新生兒紅細胞同成人?；蛭挥?chr，分別命名為RHD，RHCE，RHD編碼D抗原，RHCE編碼不同組合的CE抗原，ce，cE，Ce，CE。21A1.遺傳與發(fā)育規(guī)律21A22A22A2.命名和種類三種命名方式

Fisher-Race、數(shù)字命名法、現(xiàn)代命名法23A2.命名和種類三種命名方式23AFisher-Race命名法（CDE命名法）24AFisher-Race命名法（CDE命名法）24A3.Rh血型種類D、E、C、e、c抗原的強弱次序

D>E>C>c>e25A3.Rh血型種類25A5.Rh抗體Rh抗體產(chǎn)生天然抗體罕見主要通過輸血和妊娠免疫產(chǎn)生IgG

初次免疫后3~6月出現(xiàn)，再次免疫后3周達高峰Rh抗體種類抗D，抗E，抗C，抗c，抗e26A5.Rh抗體Rh抗體產(chǎn)生26AABO和Rh血型系統(tǒng)的臨床意義安全輸血的主要保證新生兒溶血病的診斷器官移植的必要條件其他：遺傳學(xué)研究，法醫(yī)學(xué)鑒定27AABO和Rh血型系統(tǒng)的臨床意義安全輸血的主要保證27A四、ABO和Rh血型鑒定常用方法：鹽水介質(zhì)法、酶介質(zhì)法、抗人球蛋白法、聚凝胺法試管法、玻片法、微柱凝膠法28A四、ABO和Rh血型鑒定常用方法：28A1.鹽水介質(zhì)法（saltmediumtest）原理：根據(jù)IgM類抗體與紅細胞膜上特異性抗原能發(fā)生凝集反應(yīng)。正定型：已知血型抗體試劑+紅細胞

反定型：已知標準紅細胞+血清鑒定紅細胞上血型抗原鑒定血清中抗體29A1.鹽水介質(zhì)法（saltmediumtest）原理：根據(jù)反應(yīng)條件：生理鹽水介質(zhì)，室溫，肉眼可見凝集反應(yīng)平板法，試管法，微孔板法，試管離心法最可信賴。應(yīng)用：ABO血型定型、RhD抗原定型（IgG+IgM，IgM單克隆抗體），交叉合血30A反應(yīng)條件：生理鹽水介質(zhì)，室溫，肉眼可見凝集反應(yīng)30A結(jié)果判斷31A結(jié)果判斷31A注意事項（一）：標準血清：健康壯年人混合血清，培養(yǎng)細胞株的單克隆抗體要求：高效價：抗A、抗B≥1：128

高親和性：15s內(nèi)出現(xiàn)凝集，3min后凝集塊>

1mm2

單克隆抗體具有檢出A2，A2B的能力冷凝集素效價<

1：4

無菌，病毒滅活32A注意事項（一）：標準血清：健康壯年人混合血清，培養(yǎng)細胞株的單注意事項（二）：紅細胞試劑：三個健康者同型新鮮紅細胞混合，用生理鹽水洗滌三次。紅細胞懸液不能過濃或過淡，5%生理鹽水紅細胞懸液33A注意事項（二）：紅細胞試劑：三個健康者同型新鮮紅細胞混合，用注意事項（三）：所有器材清潔干燥一般先加血清，后加紅細胞反應(yīng)溫度：IgM抗體反應(yīng)最適溫度為40C，為防止冷凝集素干擾，采用室溫，370C反應(yīng)減弱離心時間和速度：3000g,30s反定型不宜用玻片法結(jié)果核對，避免筆誤正、反定型結(jié)果一致才能報告，否則查找原因34A注意事項（三）：所有器材清潔干燥34A正反定型不一致的可能原因（一）：操作技術(shù)上的錯誤：主要原因

離心過度或不足細胞與血清反應(yīng)比例不適當陽性反應(yīng)產(chǎn)生溶血現(xiàn)象而未能識別漏加試劑、結(jié)果判讀錯誤等

35A正反定型不一致的可能原因（一）：操作技術(shù)上的錯誤：主要原因3正反定型不一致的可能原因（二）：出現(xiàn)假陰性的常見原因：

某些白血病患者和難治性貧血等導(dǎo)致ABO抗原減弱；免疫系統(tǒng)尚未健全的新生兒、4月~6月內(nèi)嬰兒、抗體水平下降的老人；亞型紅細胞抗原性弱，難以檢出；低丙種球蛋白血癥患者，血清定型時不凝集或弱凝集。

36A正反定型不一致的可能原因（二）：出現(xiàn)假陰性的常見原因：36A正反定型不一致的可能原因（三）出現(xiàn)假陽性的常見原因：

紅細胞出現(xiàn)多凝集現(xiàn)象；嚴重腸道革蘭氏陰性桿菌感染，可使紅細胞獲得類B現(xiàn)象；異常的血漿蛋白升高、白蛋白/球蛋白異常，高濃度纖維蛋白原造成假凝集現(xiàn)象；待檢血清中有不規(guī)則抗體存在；右旋糖酐、靜脈注射某些造影劑等引起紅細胞類似凝集。37A正反定型不一致的可能原因（三）出現(xiàn)假陽性的常見原因：37A方法學(xué)評價簡單，靈敏度低，只適合IgM抗體試管法：需時短，離心增強凝集，可發(fā)現(xiàn)亞型和較弱的反應(yīng)，正、反定型皆適合玻片法：適合大規(guī)模血型普查，反應(yīng)時間長，有時漏掉弱反應(yīng)，反定型不適合。38A方法學(xué)評價簡單，靈敏度低，只適合IgM抗體38A2.酶介質(zhì)法（enzymicmediumtest）：原理和方法：主要用于Rh血型鑒定（IgG抗體）蛋白水解酶增強IgG抗體的凝集作用39A2.酶介質(zhì)法（enzymicmediumtest）：原理注意事項：Rh血型不需作反定型每次實驗均需作陽性、陰性對照40A注意事項：Rh血型不需作反定型40A方法學(xué)評價簡單經(jīng)濟穩(wěn)定性、準確性較差，不能檢出MN、Duffy血型系統(tǒng)41A方法學(xué)評價簡單經(jīng)濟41A3.抗人球蛋白實驗（Coomb’stest）原理和方法抗IgG待測紅細胞+抗RhD（IgG）+抗人球蛋白紅細胞凝集42A3.抗人球蛋白實驗（Coomb’stest）原理和方法抗I應(yīng)用延伸：檢測紅細胞同種抗體的經(jīng)典方法，新生兒溶血、病、溶血性輸血反應(yīng)、自身免疫性溶血性貧血直接Coomb’s（directantiglobulintest,DAT）間接Coomb’s（indirectantiglobulintest,IDAT）43A應(yīng)用延伸：檢測紅細胞同種抗體的經(jīng)典方法，新生兒溶血、病、溶血DAT：檢查紅細胞是否致敏

44ADAT：檢查紅細胞是否致敏

44AIDAT：檢測血清中不完全抗體

45AIDAT：檢測血清中不完全抗體

45A4.聚凝胺介質(zhì)法（polybrenetest）原理和方法

低離子強度鹽溶液（lowionicstrengthsaltsolution,LISS)：降低介質(zhì)離子強度，增加抗原抗體結(jié)合

聚凝胺：中和紅細胞表面負電荷，使紅細胞發(fā)生非特異性凝集。

重懸液（resuspension)46A4.聚凝胺介質(zhì)法（polybrenetest）原理和方法4方法學(xué)評價適于各類抗體（IgM，IgG）快速、靈敏、可靠對檢測Kell血型系統(tǒng)抗體不理想，不能用肝素抗凝。47A方法學(xué)評價適于各類抗體（IgM，IgG）47A5.微柱凝膠法(gelcardswithmicrotubes)1986年法國人Dr.YvesLappierre發(fā)明1994年，獲美國FDA認證48A5.微柱凝膠法(gelcardswithmicrotu原理和方法葡聚糖做成微型凝膠柱，上端為反應(yīng)室，下端凝膠柱為抗原抗體凝集反應(yīng)的介質(zhì)?？乖c抗體結(jié)合后離心，經(jīng)過凝膠分子篩作用，游離紅細胞在凝膠底部，而與抗體結(jié)合凝集的紅細胞位于凝膠上部或懸浮于凝膠中。

反應(yīng)室凝膠柱49A原理和方法葡聚糖做成微型凝膠柱，上端為反應(yīng)室，下端凝膠柱為抗結(jié)果判讀：陽性結(jié)果：紅細胞凝集塊位于凝膠表面或凝膠中，和（或）出現(xiàn)溶血。50A結(jié)果判讀：陽性結(jié)果：紅細胞凝集塊位于凝膠表面或凝膠中，和（或注意事項：專用水平離心機假陽性：鐮型紅細胞、巨幼紅細胞白細胞過多