第九章化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件

第九章化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)第九章化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)1優(yōu)選第九章化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)優(yōu)選第九章化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)2發(fā)光免疫分析:

是將發(fā)光分析和免疫反應(yīng)相結(jié)合而建立起來(lái)的一種新的檢測(cè)微量抗原或抗體的新型標(biāo)記免疫分析技術(shù)。全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光分析儀發(fā)光免疫分析:

是將發(fā)光分析和免疫反應(yīng)相結(jié)合而建立起來(lái)的一種3第一節(jié)概述一、發(fā)光的分類是指一種物質(zhì)由電子激發(fā)態(tài)回復(fù)到基態(tài)時(shí)，釋放出的能量表現(xiàn)為光的發(fā)射，稱為發(fā)光。根據(jù)形成激發(fā)態(tài)分子的能量來(lái)源不同，可將發(fā)光分為三種光照發(fā)光、生物發(fā)光和化學(xué)發(fā)光。第一節(jié)概述一、發(fā)光的分類4（一）光照發(fā)光是指發(fā)光劑經(jīng)短波長(zhǎng)入射光照后進(jìn)入激發(fā)態(tài)，回至基態(tài)時(shí)發(fā)出較長(zhǎng)的可見光。（一）光照發(fā)光是指發(fā)光劑經(jīng)短波長(zhǎng)入射光照后進(jìn)入激發(fā)態(tài)，回至基5（二）生物發(fā)光典型例子為熒火蟲發(fā)光。熒火蟲發(fā)光素光ATP、O2、Mｇ2+熒光素酶（二）生物發(fā)光典型例子為熒火蟲發(fā)光。ATP、O2、Mｇ2+熒6（三）化學(xué)發(fā)光是指常溫下經(jīng)化學(xué)反應(yīng)所產(chǎn)生的發(fā)射光。化學(xué)發(fā)光是一個(gè)多步驟的過程。（三）化學(xué)發(fā)光是指常溫下經(jīng)化學(xué)反應(yīng)所產(chǎn)生的發(fā)射光。71928年，化學(xué)家首次發(fā)現(xiàn)這種化合物有一個(gè)奇妙的特性，它被氧化時(shí)能發(fā)出藍(lán)光。在檢驗(yàn)血痕時(shí)，魯米諾與血紅蛋白發(fā)生反應(yīng)，顯出藍(lán)綠色的熒光。在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中參與能量轉(zhuǎn)移并最終以發(fā)射光子的形式釋放能量的化合物，稱為化學(xué)發(fā)光劑或發(fā)光底物。五、化學(xué)發(fā)光免疫的非均相分離方式RT3反三碘甲狀腺原氨酸二、化學(xué)發(fā)光產(chǎn)生的條件MyoglobinI肌紅蛋白2、這些化學(xué)能必須能被某種物質(zhì)分子吸收而產(chǎn)生電子激發(fā)，并且有足夠的光量子產(chǎn)生。二、發(fā)光劑的標(biāo)記技術(shù)（自學(xué)）FSH促卵泡激素TPA組織多肽抗原E2，Estradiol雌二醇RT3反三碘甲狀腺原氨酸第九章化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)AFP甲胎蛋白一、直接化學(xué)發(fā)光免疫分析二、發(fā)光劑的標(biāo)記技術(shù)（自學(xué)）熒火蟲發(fā)光素光四、化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的分類TMA甲狀腺微粒體抗體二、化學(xué)發(fā)光產(chǎn)生的條件1、反應(yīng)必須提供足夠的能量（170300KJ/mol）2、這些化學(xué)能必須能被某種物質(zhì)分子吸收而產(chǎn)生電子激發(fā)，并且有足夠的光量子產(chǎn)生。1928年，化學(xué)家首次發(fā)現(xiàn)這種化合物有一個(gè)奇妙的特性，它被氧8直接化學(xué)發(fā)光間接化學(xué)發(fā)光直接化學(xué)發(fā)光9三、化學(xué)發(fā)光效率三、化學(xué)發(fā)光效率10AFP甲胎蛋白3、電化學(xué)發(fā)光免疫分析4、魯米諾氧途徑免疫分析LH黃體生成素MyoglobinI肌紅蛋白五、化學(xué)發(fā)光免疫的非均相分離方式2、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析TPA組織多肽抗原PSA前列腺特異性抗原在檢驗(yàn)血痕時(shí)，魯米諾與血紅蛋白發(fā)生反應(yīng)，顯出藍(lán)綠色的熒光。在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中參與能量轉(zhuǎn)移并最終以發(fā)射光子的形式釋放能量的化合物，稱為化學(xué)發(fā)光劑或發(fā)光底物。四、化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的分類魯米諾早在1853年就被合成出來(lái)了。FSH促卵泡激素TPA組織多肽抗原第九章化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)四、化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的分類1、直接化學(xué)發(fā)光免疫分析2、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析3、電化學(xué)發(fā)光免疫分析4、魯米諾氧途徑免疫分析常用化學(xué)發(fā)光劑：（1）吖啶酯類直接標(biāo)記發(fā)光劑（2）三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光劑（3）酶促反應(yīng)發(fā)光劑：魯米諾AMPPD(金剛烷)AFP甲胎蛋白四、化學(xué)發(fā)11（一）固相分離——板式或管式（二）過濾分離——過濾杯（膜）（三）珠式分離——與丙烯酰胺小珠子（四）順磁珠性顆粒分離——順磁性顆粒五、化學(xué)發(fā)光免疫的非均相分離方式（一）固相分離——板式或管式五、化學(xué)發(fā)光免疫的非均相分離方式12一、化學(xué)發(fā)光劑在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中參與能量轉(zhuǎn)移并最終以發(fā)射光子的形式釋放能量的化合物，稱為化學(xué)發(fā)光劑或發(fā)光底物。第二節(jié)化學(xué)發(fā)光劑和標(biāo)記技術(shù)一、化學(xué)發(fā)光劑在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中參與能量轉(zhuǎn)移并最終以發(fā)射光子的13第九章化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件14第九章化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件15第九章化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件16五、化學(xué)發(fā)光免疫的非均相分離方式三、電化學(xué)發(fā)光免疫分析五、化學(xué)發(fā)光免疫的非均相分離方式FTEST游離睪酮TroponinI肌鈣蛋白I化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)因標(biāo)記物為非放射性物質(zhì)，且易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏、特異等特點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于各種激素、腫瘤標(biāo)志物、藥物及其化微量生物活性物質(zhì)測(cè)定。TroponinI肌鈣蛋白I五、化學(xué)發(fā)光免疫的非均相分離方式CEA癌胚抗原四、化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的分類PSA前列腺特異性抗原在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中參與能量轉(zhuǎn)移并最終以發(fā)射光子的形式釋放能量的化合物，稱為化學(xué)發(fā)光劑或發(fā)光底物。（四）順磁珠性顆粒分離——順磁性顆粒熒火蟲發(fā)光素光在檢驗(yàn)血痕時(shí)，魯米諾與血紅蛋白發(fā)生反應(yīng)，顯出藍(lán)綠色的熒光。熒火蟲發(fā)光素光（3）酶促反應(yīng)發(fā)光劑：魯米諾化學(xué)名稱為3氨基鄰苯二甲酰肼。3、電化學(xué)發(fā)光免疫分析五、化學(xué)發(fā)光免疫的非均相分離方式17第九章化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件18第九章化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件19魯米諾早在1853年就被合成出來(lái)了。1928年，化學(xué)家首次發(fā)現(xiàn)這種化合物有一個(gè)奇妙的特性，它被氧化時(shí)能發(fā)出藍(lán)光?；瘜W(xué)名稱為3氨基鄰苯二甲酰肼。刑偵學(xué)應(yīng)用在檢驗(yàn)血痕時(shí)，魯米諾與血紅蛋白發(fā)生反應(yīng)，顯出藍(lán)綠色的熒光。這種檢測(cè)方法極為靈敏，能檢測(cè)只有百萬(wàn)分之一含量的血。魯米諾早在1853年就被合成出來(lái)了。1928年，化學(xué)家首次發(fā)20第九章化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件21第九章化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件22二、發(fā)光劑的標(biāo)記技術(shù)（自學(xué)）

二、發(fā)光劑的標(biāo)記技術(shù)（自學(xué)）

23第三節(jié)化學(xué)發(fā)光免疫分析的類型一、直接化學(xué)發(fā)光免疫分析第三節(jié)化學(xué)發(fā)光免疫分析的類型一、直接化學(xué)發(fā)光免疫分析24五、化學(xué)發(fā)光免疫的非均相分離方式PrenatalScreening產(chǎn)前篩查TumorMakers腫瘤標(biāo)志物（四）順磁珠性顆粒分離——順磁性顆粒2、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析保證了臨床應(yīng)用中的簡(jiǎn)便性，避免了試驗(yàn)中的稀釋誤差。HCG/βHCG絨毛膜促性腺激素1、直接化學(xué)發(fā)光免疫分析（3）酶促反應(yīng)發(fā)光劑：魯米諾優(yōu)選第九章化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)Thyroid甲狀腺四、化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的分類化學(xué)名稱為3氨基鄰苯二甲酰肼。TPA組織多肽抗原CKMB肌酸激酶同工酶五、化學(xué)發(fā)光免疫的非均相分離方式AMPPD(金剛烷)2、這些化學(xué)能必須能被某種物質(zhì)分子吸收而產(chǎn)生電子激發(fā)，并且有足夠的光量子產(chǎn)生。2、這些化學(xué)能必須能被某種物質(zhì)分子吸收而產(chǎn)生電子激發(fā)，并且有足夠的光量子產(chǎn)生。二、發(fā)光劑的標(biāo)記技術(shù)（自學(xué)）四、化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的分類五、化學(xué)發(fā)光免疫的非均相分離方式25二、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析發(fā)光酶免疫分析(LEIA):是用參與催化某一發(fā)光反應(yīng)的酶來(lái)標(biāo)記抗原或抗體，在抗原抗體反應(yīng)結(jié)束后，加入底物，通過酶催化底物發(fā)光反應(yīng)，發(fā)出的光在特定儀器上進(jìn)行測(cè)定。二、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析發(fā)光酶免疫分析(LEIA):是用參與催26HRP標(biāo)記的LEIA（一）辣根過氧化酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析HRP標(biāo)記的LEIA（一）辣根過氧化酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析27（二）堿性磷酸酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析ALP標(biāo)記的LEIA（二）堿性磷酸酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析ALP標(biāo)記的LEIA28第九章化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件29三、電化學(xué)發(fā)光免疫分析電化學(xué)發(fā)光免疫分析（ECLIA）是電化學(xué)發(fā)光和免疫測(cè)定相結(jié)合的產(chǎn)物。三、電化學(xué)發(fā)光免疫分析電化學(xué)發(fā)光免疫分析（ECLIA）是電化30第九章化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)課件31第四節(jié)化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定的臨床應(yīng)用化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)因標(biāo)記物為非放射性物質(zhì)，且易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏、特異等特點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于各種激素、腫瘤標(biāo)志物、藥物及其化微量生物活性物質(zhì)測(cè)定。第四節(jié)化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定的臨床應(yīng)用化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)因標(biāo)記物為32臨床應(yīng)用特點(diǎn)1、靈敏度高，特異性強(qiáng)可實(shí)現(xiàn)ng甚至pg級(jí)微量待測(cè)物的定量檢測(cè)，保證了各種激素、病毒抗原抗體等微量物質(zhì)的準(zhǔn)確定量測(cè)定。臨床應(yīng)用特點(diǎn)1、靈敏度高，特異性強(qiáng)332、線性范圍寬可滿足103106數(shù)量級(jí)的絕對(duì)定量檢測(cè)需要。保證了臨床應(yīng)用中的簡(jiǎn)便性，避免了試驗(yàn)中的稀釋誤差。2、線性范圍寬343、標(biāo)記物穩(wěn)定，試劑有效期長(zhǎng)有效期可長(zhǎng)達(dá)一年3、標(biāo)記物穩(wěn)定，試劑有效期長(zhǎng)354、自動(dòng)化程度高，檢測(cè)菜單齊全4、自動(dòng)化程度高，檢測(cè)菜單齊全36Thyroid甲狀腺T3三碘甲狀腺原氨酸T4四碘甲狀腺原氨酸FT3游離三碘甲狀腺原氨酸FT4游離四碘甲狀腺原氨酸RT3反三碘甲狀腺原氨酸TRAB促甲狀腺受體抗體TGA甲狀腺球蛋白抗體TMA甲狀腺微粒體抗體TG甲狀腺球蛋白TSH(3rdGen)促甲狀腺激素(第三代超敏)Thyroid甲狀腺37Fertility生育FSH促卵泡激素LH黃體生成素PRL催乳素E2，Estradiol雌二醇PRG孕酮TEST睪酮FTEST游離睪酮HCG/βHCG絨毛膜促性腺激素BHCG絨毛膜促性腺激素B亞單位FE3游離雌三醇PAPPA妊娠相關(guān)血漿蛋白DHEAS脫氫表雄酮Fertility生育38Cardiac心血管及心肌標(biāo)志物類TroponinI肌鈣蛋白IMyoglobinI肌紅蛋白CKMB肌酸激酶同工酶AI血管緊張素IAII血管緊張素IIAldosterone醛固酮腦自然肽N端前體蛋白Cardiac心血管及心肌標(biāo)志物類39TumorMakers腫瘤標(biāo)志物AFP甲胎蛋白CEA癌胚抗原Ferritin鐵蛋白TPA組織多肽抗原PAP前列腺酸性磷酸酶PSA前列腺特異性抗原FPSA游離前列腺特異性抗原CA125糖類抗原125TumorMakers腫瘤標(biāo)志物40TGA甲狀腺球蛋白抗體CA125糖類抗原125PAPPA妊娠相關(guān)血漿蛋白1、直接化學(xué)發(fā)光免疫分析FE3游離雌三醇是指發(fā)光劑經(jīng)短波長(zhǎng)入射光照后進(jìn)入激發(fā)態(tài)，回至基態(tài)時(shí)發(fā)出較長(zhǎng)的可見光。（一）辣根過氧化酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析保證了臨床應(yīng)用中的簡(jiǎn)便性，避免了試驗(yàn)中的稀釋誤差。2、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析TumorMakers腫瘤標(biāo)志物五、化學(xué)發(fā)光免疫的非均相分離方式TRAB促甲狀腺受體抗體FSH促卵泡激素1、反應(yīng)必須提供足夠的能量（170300KJ/mol）（四）順磁珠性顆粒分離——順磁性顆粒四、化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的分類熒火蟲發(fā)光素光（一）固相分離——板式或管式FT4游離四碘甲狀腺原氨酸第二節(jié)化學(xué)發(fā)光劑和標(biāo)記技術(shù)（2）三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光劑AFP甲胎蛋白ATP、O2、Mｇ2+AFP甲胎蛋白BHCG絨毛膜促性腺激素B亞單位MyoglobinI肌紅蛋白在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中參與能量轉(zhuǎn)移并最終以發(fā)射光子的形式釋放能量的化合物，稱為化學(xué)發(fā)光劑或發(fā)光底物。FTEST游離睪酮保證了臨床應(yīng)用中的簡(jiǎn)便性，避免了試驗(yàn)中的稀釋誤差。優(yōu)選第九章化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)CKMB肌酸激酶同工酶是指常溫下經(jīng)化學(xué)反應(yīng)所產(chǎn)生的發(fā)射光?；瘜W(xué)發(fā)光是一個(gè)多步驟的過程?；瘜W(xué)名稱為3氨基鄰苯二甲酰肼。1、直接化學(xué)發(fā)光免疫分析五、化學(xué)發(fā)光免疫的非均相分離方式五、化學(xué)發(fā)光免疫的非均相分離方式AMPPD(金剛烷)1、反應(yīng)必須提供足夠的能量（170300KJ/mol）熒火蟲發(fā)光素光（2）三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光劑四、化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)的分類ATP、O2、Mｇ2+在檢驗(yàn)血痕時(shí)，魯米諾與血紅蛋白發(fā)生反應(yīng)，顯出藍(lán)綠色的熒光。第九章化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)2、這些化學(xué)能必須能被某種物質(zhì)分子吸收而產(chǎn)生電子激發(fā)，并且有足夠的光量子產(chǎn)生。4、自動(dòng)化程度高，檢測(cè)菜單齊全化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)因標(biāo)記物為非放射性物質(zhì)，且易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，具有快速、簡(jiǎn)便、靈敏、特異等特點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于各種激素、腫瘤標(biāo)志物、藥物及其化微量生物活性物質(zhì)測(cè)定。AFP甲胎蛋白E2，Estradiol雌二醇（一）固相分離——板式或管式AFP甲胎蛋白優(yōu)選第九章化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)FPSA游離前列腺特異性抗原在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中參與能量轉(zhuǎn)移并最終以發(fā)射光子的形式釋放能量的化合物，稱為化學(xué)發(fā)光劑或發(fā)光底物。（3）酶促反應(yīng)發(fā)光劑：魯米諾熒火蟲