基金申請(qǐng)的策略和技巧

基金申請(qǐng)的策略和技巧第1頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月基金申請(qǐng)選題撰寫申請(qǐng)書答辯第2頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月撰寫前的準(zhǔn)備好心情、好身體邊想邊寫3h/天讀指南、讀通知注意截止期讀標(biāo)書、讀高手、讀同行讀自己賣點(diǎn)??？選題創(chuàng)新性工作基礎(chǔ)想法變文字一氣呵成“立項(xiàng)依據(jù)”溝通科研科87330567、醫(yī)科處

87333055

第3頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月摘要

研究?jī)?nèi)容和意義（限400字）1.基礎(chǔ)：繼續(xù)和深入發(fā)表和未發(fā)表創(chuàng)新2.問(wèn)題中肯3.預(yù)實(shí)驗(yàn)針對(duì)“問(wèn)題”的預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果4.假設(shè)思想性、創(chuàng)新性5.方法可靠性第一先進(jìn)性第二6.目標(biāo)明確、具體7.意義理論性和應(yīng)用性第4頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月立項(xiàng)依據(jù)1.關(guān)鍵!占50%文筆流暢、層次分明、邏輯性強(qiáng)2.要求：充分的理由和意義思想性與摘要呼應(yīng)3.自己的工作為依據(jù)圖文并茂規(guī)范4.參考文獻(xiàn)時(shí)效性自己的文章規(guī)范化5.深入淺出內(nèi)行、外行讀得懂6.人文文化素質(zhì)精神動(dòng)人的故事第5頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月神經(jīng)元凋亡時(shí)SP1對(duì)BH3-only蛋白Bim的轉(zhuǎn)錄調(diào)控細(xì)胞凋亡時(shí)SP1對(duì)BH3-only蛋白Bim的轉(zhuǎn)錄調(diào)控神經(jīng)元凋亡時(shí)BH3-only蛋白Bim的轉(zhuǎn)錄調(diào)控神經(jīng)元凋亡時(shí)SP1對(duì)BH3-only蛋白Bim的調(diào)控

SP1對(duì)BH3-only蛋白Bim的轉(zhuǎn)錄調(diào)控

SP1對(duì)神經(jīng)元凋亡的調(diào)控作用關(guān)鍵詞：SP1/Bim/基因調(diào)控/信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)/神經(jīng)元凋亡項(xiàng)目名稱第6頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月研究?jī)?nèi)容、研究目標(biāo)與

擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題第7頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月研究目標(biāo)

獲得SP1直接調(diào)控bim基因表達(dá)的可靠證據(jù)，闡明促凋亡蛋白Bim由SP1轉(zhuǎn)錄調(diào)控的新機(jī)制，為確立SP1作為神經(jīng)退行性疾病治療的新靶點(diǎn)提供更充分的科學(xué)依據(jù)。要求：明確、具體解決學(xué)術(shù)問(wèn)題神經(jīng)元凋亡時(shí)SP1對(duì)BH3-only蛋白Bim的轉(zhuǎn)錄調(diào)控與題目相呼應(yīng)第8頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

研究?jī)?nèi)容

（緊緊圍繞研究目標(biāo)）

1.

證明bim啟動(dòng)子核心區(qū)的SP1結(jié)合序列是否介導(dǎo)了bim基因的上調(diào)為了證實(shí)bim啟動(dòng)子核心區(qū)的SP1結(jié)合序列是否介導(dǎo)了bim基因的上調(diào)，將其中的SP1結(jié)合序列進(jìn)行點(diǎn)突變，使其不能結(jié)合SP1；確定這一突變是否能夠消除bim啟動(dòng)子的撤鉀反應(yīng)。

2.

分析SP1是否能夠與bim啟動(dòng)子核心區(qū)的SP1結(jié)合序列結(jié)合

應(yīng)用EMSA(ElectrophoreticMobilityShiftAssay)技術(shù)，證實(shí)bim啟動(dòng)子核心區(qū)的SP1結(jié)合序列是否能夠與SP1結(jié)合；進(jìn)一步采用CHIP(Chromatinimmunoprecipitation)方法，獲得SP1與bim啟動(dòng)子核心區(qū)在細(xì)胞內(nèi)結(jié)合的證據(jù)。

3.

從bim的mRNA和蛋白質(zhì)水平，觀察負(fù)顯性SP1是否能夠抑制撤鉀誘導(dǎo)的bim基因的上調(diào)

質(zhì)粒轉(zhuǎn)染CGNs的轉(zhuǎn)染率只能達(dá)到0.1-1.0%，腺病毒的感染率可達(dá)70－80%[1]。因此，構(gòu)建dnSP1的腺病毒載體Ad-dnSP1，感染CGNs才能達(dá)到可靠分析bim的mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)水平改變的目的。

4.分析SP1誘導(dǎo)Bim這一機(jī)制對(duì)神經(jīng)元凋亡的調(diào)控作用

確立SP1轉(zhuǎn)錄激活bim這一機(jī)制后，進(jìn)一步分析這一機(jī)制對(duì)神經(jīng)元凋亡的調(diào)控作用。

第9頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題

獲得SP1直接調(diào)控bim基因表達(dá)的可靠依據(jù)。

什么是關(guān)鍵問(wèn)題？

—研究過(guò)程中對(duì)達(dá)到預(yù)期目標(biāo)有重要影響的某些研究?jī)?nèi)容或因素。

—為達(dá)到預(yù)期目標(biāo)所必須掌握的關(guān)鍵技術(shù)或研究手段。撰寫要求：找出關(guān)鍵問(wèn)題，問(wèn)題清晰，分析透徹，合理的解決方法。第10頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

研究方案項(xiàng)目需求為前提；可靠性第一，先進(jìn)性第二；參考文獻(xiàn)；突出關(guān)鍵技術(shù)的描述；不主張使用流程圖，建議開頭：“有關(guān)方法、技術(shù)路線、試驗(yàn)手段、關(guān)鍵技術(shù)綜述如下……”。

第11頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月可行性分析

－從學(xué)術(shù)思想角度提出

1.工作基礎(chǔ)（學(xué)術(shù)思想）

2.科研梯隊(duì)

3.實(shí)驗(yàn)條件

4.實(shí)驗(yàn)技術(shù)

5.交流與合作（國(guó)內(nèi)、國(guó)外）第12頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

創(chuàng)新性

對(duì)創(chuàng)新的理解：創(chuàng)新性與先進(jìn)性是有根本區(qū)別的。

原始創(chuàng)新：填補(bǔ)空白或修改傳統(tǒng)的理論；新技術(shù)、新方法的發(fā)明創(chuàng)造。

跟蹤創(chuàng)新：

在前人工作基礎(chǔ)上補(bǔ)充、完善現(xiàn)有理論；對(duì)原有技術(shù)、方法進(jìn)行修改后產(chǎn)生1＋1＞2的效果。第13頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月本項(xiàng)目的特色與創(chuàng)新之處：申請(qǐng)人首次報(bào)道了神經(jīng)元凋亡時(shí)促凋亡蛋白Bim上調(diào)是不依賴于JNK/c-Jun通路(LeyuShi,etal,NeurosciLett.2005)一觀察之后，又以可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明PI3K/Akt/FKHRL1信號(hào)通路也不參與bim的上調(diào)（見立項(xiàng)依據(jù)）。bim上調(diào)的轉(zhuǎn)錄機(jī)制是什么？我們率先對(duì)bim啟動(dòng)子進(jìn)行了5‘末端序列續(xù)減分析，確立了誘導(dǎo)bim表達(dá)的啟動(dòng)子核心區(qū)，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)一個(gè)典型的轉(zhuǎn)錄因子SP1結(jié)合序列位于其中。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)顯示：神經(jīng)元凋亡時(shí)SP1被激活；負(fù)顯性SP1突變體和SP1-DNA結(jié)合抑制劑mithramycinA可抑制bim的上調(diào)。根據(jù)以上生物信息學(xué)分析和實(shí)驗(yàn)觀察，我們首次提出了SP1介導(dǎo)bim上調(diào)這一新的bim轉(zhuǎn)錄機(jī)制：神經(jīng)元凋亡時(shí)轉(zhuǎn)錄因子SP1被激活，激活的SP1與bim啟動(dòng)子核心區(qū)的SP1結(jié)合序列結(jié)合，從而轉(zhuǎn)錄激活bim的表達(dá)。本項(xiàng)目擬進(jìn)一步采用負(fù)顯性SP1突變體的腺病毒表達(dá)技術(shù)以及啟動(dòng)子點(diǎn)突變、EMSA和CHIP方法，旨在獲得SP1直接調(diào)控bim基因的可靠證據(jù)，為闡明SP1對(duì)促凋亡蛋白Bim的調(diào)控作用和機(jī)制并進(jìn)一步確立SP1作為神經(jīng)退行性疾病治療的新靶點(diǎn)提供更充分的科學(xué)依據(jù)。

第14頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月研究基礎(chǔ)與工作條件

—突出與項(xiàng)目相關(guān)的工作積累研究基礎(chǔ)

已取得的研究工作成績(jī)及與本項(xiàng)目有關(guān)的研究工作積累(對(duì)于自由申請(qǐng)項(xiàng)目，著重填寫申請(qǐng)人近期的主要工作業(yè)績(jī)；對(duì)于重點(diǎn)項(xiàng)目，請(qǐng)著重填寫本課題組與本項(xiàng)目相關(guān)的研究工作積累和近五年的主要研究業(yè)績(jī))工作條件

已具備的實(shí)驗(yàn)條件，尚缺少的實(shí)驗(yàn)條件和擬解決的途徑(包括利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室和部門開放實(shí)驗(yàn)室的計(jì)劃與落實(shí)情況)第15頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月研究基礎(chǔ)

在國(guó)家自然科學(xué)基金(已結(jié)題三項(xiàng)、正進(jìn)行一項(xiàng))的資助下，近五年有如下工作積累和成績(jī)：

1.

SCI論文近五年發(fā)表了14篇SCI論文；其中與神經(jīng)元凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和基因調(diào)控有關(guān)的論文，作為第一作者的有2篇，作為通訊作者的有4篇(見后)，作為共同作者的有8篇。

2.Bim轉(zhuǎn)錄機(jī)制的前期工作我們首次報(bào)道了神經(jīng)元凋亡時(shí)JNK/c-Jun不參與bim的上調(diào)[1]，隨后，我們又以可靠的證據(jù)揭示了PI3K/Akt/FKHRL1也不介導(dǎo)bim的上調(diào)(未發(fā)表資料)。這些研究工作改變了以往的觀點(diǎn),也是本項(xiàng)目重要的立項(xiàng)依據(jù)之一。

第16頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

3.

Bim啟動(dòng)子核心區(qū)確立

啟動(dòng)子5‘末端序列續(xù)減分析確立了誘導(dǎo)Bim表達(dá)的啟動(dòng)子核心區(qū)，并發(fā)現(xiàn)一個(gè)典型的轉(zhuǎn)錄因子SP1結(jié)合序列位于其中。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)顯示：神經(jīng)元凋亡時(shí)SP1被激活；負(fù)顯性SP1突變體和SP1-DNA結(jié)合抑制劑均可抑制Bim的上調(diào)。這些實(shí)驗(yàn)資料揭示了SP1介導(dǎo)bim轉(zhuǎn)錄調(diào)控的新機(jī)制，也為本項(xiàng)目申請(qǐng)?zhí)峁┝俗罡镜膶?shí)驗(yàn)依據(jù)。

4.

轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控神經(jīng)元凋亡的工作基礎(chǔ)

另一項(xiàng)轉(zhuǎn)錄因子MEF2抗神經(jīng)元凋亡的工作也顯示了申請(qǐng)人與本項(xiàng)目相關(guān)的較扎實(shí)的研究工作積累。本人首次報(bào)道(MingtaoLi,etal,JofNeurosci.2001,21:6544-6552)、隨后被他人證實(shí)(Shu-ichiOkamoto,etal,PNAS2002,99:3974-3979)，神經(jīng)元凋亡時(shí)轉(zhuǎn)錄因子MEF2A和MEF2D不僅活性降低和失去抗凋亡作用，而且被凋亡殺手caspase剪切，其N-末端產(chǎn)物反而具有促凋亡活性。這一MEF2調(diào)控凋亡機(jī)制的發(fā)現(xiàn)，不僅對(duì)于我們理解神經(jīng)元存活或凋亡具有重要的意義，而且也為神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和分化的研究開拓了一條嶄新的思路，具有創(chuàng)新性。第17頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

5.

信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的工作基礎(chǔ)

較早的一項(xiàng)對(duì)cAMP/PKA抗神經(jīng)元凋亡機(jī)制的研究也反映了本人在神經(jīng)元凋亡信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究方面有較厚實(shí)的工作積累。申請(qǐng)者首次發(fā)現(xiàn)促凋亡激酶GSK-3

和GSK-3β是PKA的天然底物；闡明cAMP/PKA通過(guò)磷酸化并抑制GSK-3β發(fā)揮其促神經(jīng)元存活的作用，此內(nèi)容發(fā)表在《分子細(xì)胞生物學(xué)》(MingtaoLi,etal,MolCellBiol.2000,20:9356-9363)。

6.JNK/c-Jun通路的工作基礎(chǔ)

我們首次以JNK/c-Jun為直接靶點(diǎn)、用小分子JNK抑制劑(SP600125)治療帕金森病動(dòng)物，證實(shí)JNK是有效的治療靶點(diǎn)。此工作發(fā)表后(NeuroscienceResearch,2004;48:195-202)，得到了國(guó)際同行的認(rèn)可。SCI期刊DrugNewsPerspectives邀請(qǐng)本人撰寫了有關(guān)“以JNK為靶點(diǎn)治療帕金森病”的專題綜述“JNKInhibitionasaPotentialStrategyinTreatingParkinson’sDisease”(DrugNewsPerspect.2004;17:646-54)。

第18頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月SCI文章1.LeyuShi

,ShoufangGong,ZhongminYuan

,ChiMa,YanlingLiu,ChuanfuWang

,WenmingLi,RongbiaoPi,ShoujianHuang,RuzhuChen

,YifanHan

,ZixuMao,andMingtaoLi(通訊作者).Activitydeprivation-dependentinductionoftheproapoptoticBH3-onlyproteinBimisindependentofJNK/c-Junactivationduringapoptosisincerebellargranuleneurons.NeurosciLett.2005,375：7－12.2.WenyaWang,ChiMa,ZixuMaoandMingtaoLi.(通訊作者).JNKinhibitionasapotentialstrategyintreatingParkinsons’sdisease.DrugNewsPerspect,2004,17(10):646-54.3.WenyaWang,LeyuShi,YuanbinXie,ChiMa,WenmingLi,XingwenSu,ShoujianHuang,RuzhuChen,ZhenyuZhu,ZixuMao,YifanHanandMingtao

Li.(通訊作者).SP600125,anewJNKinhibitor,protectsdopaminergicneuronsintheMPTPmodelofParkinson’sdisease.NeurosciRes2004；48:195-202

4.YuanbinXie,YanlingLiu,ChiMa,ZhongminYuan,WenyaWang,ZhenyuZhu,,GuoquanGao,XianguoLiu,HengxinYuan,RuzhuChen,ShoujianHuang,XuelanWang,XiaonanZhu,XueminWang,ZixuMao

andMingtaoLi(通訊作者).Indirubin-3′-oximeinhibitsc-JunNH2-terminalkinase:anti-apoptoticeffectincerebellargranuleneurons.NeurosciLett.2004,367:355-359.第19頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月5.RongbiaoPi,WenmingLiNelsonT.K.Lee,HughH.N.Chan,YongmeiPu,LingNgaChan,NikolausJ.Sucher,DoanldC.Chang,MingtaoLiandYifanHan.Minocyclinepreventsglutamate-inducedapoptosisofcerebellargranuleneuronsbydifferentialregulationofp38andAktpathways.JNeurochem.2004,91:1212-1230.WenyaWang,ChiMa,ZixuMaoandMingtaoLi.(通訊作者).JNKinhibitionasapotentialstrategyintreatingParkinsons’sdisease.DrugNewsPerspect,2004,17(10):646-54.6.WenmingLi,RongbiaoPi,HughH.N.Chan,HongjunFu,NelsonT.K.Lee,HingWaiTsang,YongmeiPu,DonaldC.Chang,ChaoyingLi,JialieLuo,KemingXiong,ZhiwangLi,HongXue,PaulR.Carlier,YuanpingPang,KarlW.K.Tsim,MingtaoLiandYifanHan.NoveldimericAChEinhibitorBis(7)-tacrine,butnotDonepezil,preventsglutamate-inducedneuronalapoptosisbyblockingNMDAreceptors.JBiolChem.2005,280(18):18179-88.7.XueminWang,XiaoliTang,MingtaoLi,JohnMarshall,ZixuMao.Regulationofneuroprotectiveactivityofmyocyteenhancerfactor2bycAMP-PKAsignalingpathwayinneuronalsurvival.JBiolChem.2005,280(17):16705-13.8.MarcusWiedmann,XueminWang,X.iaoliTang,MingtaoLi,ZixuMao.PI3K/Akt-dependentregulationofthetranscriptionfactormyocyteenhancerfactor-2ininsulin-likegrowthfactor-1-andmembranedepolarization-mediatedsurvivalofcerebellargranuleneurons.JNeurosciRes.2005200581(2):226-234.第20頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月9.MingtaoLi，XiaominWang，MaryKayMeintzer，TraceyLaessig，MorrisJ.BirnbaumandKimA.Heidenreich.CyclicAMPpromotesneuronalsurvivalbyphosphorylationofglycogensynthasekinase3β.MolCellBiol.2000,20（24）：9356-9363.10.MingtaoLi，DanielA.Linsenman，MelissaP.Allen，MaryKayMeintzer，XiaominWang，TraceyLaessig，MargaretE.Wierman&KimA.Heidenreich.MEF2AandMEF2Dundergophosphorylationandcaspase-mediateddegradationduringapoptosisofratcerebellargranuleneurons.J.Neurosci.2001;21(17):6544-6552.11.DanielA.Linseman,ChristopherM.Bartley,ShoshonaS.Le,TraceyA.Laessig,RonJ.Bouchard,MaryKayMeintzer,MingtaoLiandKimA.Heidenreich

.InactivationoftheMyocyteEnhancerFactor-2RepressorHistoneDeacetylase-5byEndogenousCa2/Calmodulin-dependentKinaseIIPromotesDepolarization-mediatedCerebellarGranuleNeuronSurvival.JBiolChem2003,278:41472–41481.12.Jing-PingYun,Choong-TsekLiew,EngChingChew,Xiao-YuYin,PaulBoSanLai,YamHinFai,H.K.RichardLi,Mei-LinJin,Ming-XiaoDing,MingtaoLi,Han-LiangLin,andWanYeeLau.NuclearMatrixProteinExpressionsinHepatocytesofNormalandCirrhoticRatLiversUnderNormalandRegeneratingConditions.

JCellBiochem.

2004,91:1269–1279.第21頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月13.HongweiYang,XiaodongHu,HongmeiZhang,WenjunXin,

MingtaoLi,TongZhang,LijunZhouandXianguoLiu.RolesofCaMKII,PKA,andPKCintheinductionandmainternanceofLTPofC-fiber-evokedfieldpotentialsinratspinaldorsalhorn.JNeurophysiol.2004,91:1122-1133.14.NengweiHu,HongmeiZhang,XiaodongHu,MingtaoLi,TongZhang,LijunZhouandXianguoLiu.ProteinSynthesisInhibitionBlockstheLate-PhaseLTPofC-FiberEvokedFieldPotentialsinRatSpinalDorsalHorn.JNeurophysiol,2003;89:2354-235915.

JuanSun,

MingtaoLi,JiahuaiHanandJunGu.SensitizationofdifferentiatedPC12cellstoapoptosisbypresenilin-2ismediatedbyp38.Biochem.Biophy.Res.Commun.,2001,287:536-541.

16.WeibinCai,JianfangMa,ChaoyangLi,ZhonghanYang,XiaYang,WeiLiu,ZuguoLiu,MingtaoLi,GuoquanGao.Enhancedanti-angiogeniceffectofadeletionmutantofplasminogenkringle5onneovascularization.JCellBiochem.2005Sep15;(inpress).17.MingYANG,Cun-youWAGN,FengZHOU,JingTAO,TaoLIU,Hai-yanWEI,WeiLIU,Ming-taoLi,Xian-songFENG.ProteomicAnalysisintheEarlyProcessofPancreaticRegenerationinthePancreatectomizedRat.ActaPharmacologicaSinica2005(inpress)第22頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月工作條件

2001年回國(guó)，獲得211基金180萬(wàn)元，組建了一流的分子、細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室。2002年，作為負(fù)責(zé)人獲得一期985學(xué)科建設(shè)經(jīng)費(fèi)700萬(wàn)元，籌建了一流的蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)室并正在主持開展蛋白質(zhì)科學(xué)的前沿性工作。近三年，培養(yǎng)和匯聚了一支從事分子神經(jīng)生物學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)研究的科研隊(duì)伍。這些建設(shè)性工作為解決細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因調(diào)控以及本項(xiàng)目的核心問(wèn)題奠定了扎實(shí)的基礎(chǔ)。項(xiàng)目負(fù)責(zé)人黎明濤所在單位——中山大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理教研室是211項(xiàng)目資助學(xué)科和國(guó)家重點(diǎn)學(xué)科。人才濟(jì)濟(jì)，科研裝備精良。近三年，藥理教研室獲得學(xué)科建設(shè)資金3000萬(wàn)元，已購(gòu)置大型儀器如質(zhì)譜儀、激光共聚焦顯微鏡、超速離心機(jī)、流式細(xì)胞儀、高效液相和蛋白質(zhì)分離純化系統(tǒng)等。這是申請(qǐng)者視為非?？少F的研究工作環(huán)境。

第23頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月申請(qǐng)者簡(jiǎn)歷申請(qǐng)者和項(xiàng)目組主要成員

學(xué)歷研究工作簡(jiǎn)歷近期已發(fā)表與本項(xiàng)目有關(guān)的文章目錄獲得學(xué)術(shù)獎(jiǎng)勵(lì)情況在本項(xiàng)目中承擔(dān)的任務(wù)。

第24頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

黎明濤(LiMingtao)項(xiàng)目負(fù)責(zé)人，中山大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院藥理教研室教授，博士生導(dǎo)師，中山醫(yī)學(xué)院蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn)室主任。于1984年、1989年和1996年分別獲得醫(yī)學(xué)學(xué)士、碩士和博士學(xué)位。主要研究領(lǐng)域是神經(jīng)元凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因調(diào)控和蛋白質(zhì)組學(xué)。在美國(guó)DepartmentofPharmacology,UniversityofColoradoHealthSciencesCenter從事兩年博士后研究（1999-2001），主攻凋亡的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、基因調(diào)控和蛋白質(zhì)組學(xué)。近五年發(fā)表了14篇SCI論文，其中：作為第一作者，在國(guó)際核心雜志MolecularandCellularBiology(ImpactFactor,10.03)和JournalofNeuroscience(IF,8.4)發(fā)表了具有創(chuàng)新性的文章；作為通訊作者，最近在NeurosciRes(IF,2.4)和NeurosciLett（IF，2.2）等期刊上發(fā)表了開拓性的文章。近五年（1998－2004）作為第一主持人獲得13項(xiàng)基金，包括：4項(xiàng)國(guó)家自然科學(xué)基金；5項(xiàng)省自然科學(xué)基金；3項(xiàng)市基金；1項(xiàng)教育部基金。發(fā)表的相關(guān)論文1.

LeyuShi

,ShoufangGong,ZhongminYuan

,ChiMa,YanlingLiu,ChuanfuWang

,WenmingLi,RongbiaoPi,ShoujianHuang,RuzhuChen

,YifanHan

,ZixuMao,andMingtaoLi(通訊作者).Activitydeprivation-dependentinductionoftheproapoptoticBH3-onlyproteinBimisindependentofJNK/c-Junactivationduringapoptosisincerebellargranuleneurons.NeurosciLett.2005,375:7－12.2.……3.……第25頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

皮榮標(biāo)(PiRongbiao)33歲，博士學(xué)位，講師。2002年畢業(yè)于中山大學(xué)，獲神經(jīng)藥理學(xué)博士。同年赴香港科技大學(xué)生物化學(xué)系從事博士后研究，現(xiàn)在中山大學(xué)藥學(xué)院任講師。主要研究興趣涉及神經(jīng)保護(hù)藥物的作用及其機(jī)制的研究。曾負(fù)責(zé)或參加包括國(guó)家自然科學(xué)基金等多項(xiàng)研究。已發(fā)表或待發(fā)表論著近20篇，其中SCI論文5篇。皮博士與本人合作達(dá)11年，有共同的研究趣向，作為共同作者發(fā)表多篇SCI論文。他掌握了本項(xiàng)目涉及的大部分實(shí)驗(yàn)方法和技術(shù)，尤其在腺病毒載體構(gòu)建方面積累了經(jīng)驗(yàn)（見文章）。主要負(fù)責(zé)腺病毒載體構(gòu)建等工作。發(fā)表的相關(guān)論文

1.RongbiaoPi,WenmingLi,NelsonT.K.Lee,HughH.N.Chan,YongmeiPu,LingNgaChan,NikolausJ.Sucher,DoanldC.Chang,MingtaoLiandYifanHan.Minocyclinepreventsglutamate-inducedapoptosisofcerebellargranuleneuronsbydifferentialregulationofp38andAktpathways.JNeurochem.2004,91:1212-1230.2.……3.……第26頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月項(xiàng)目組主要成員第27頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月經(jīng)費(fèi)申請(qǐng)表第28頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月申請(qǐng)項(xiàng)目同行評(píng)議意見反饋信

黎明濤先生：

您好！您申請(qǐng)的項(xiàng)目經(jīng)專家投票表決，同意資助。關(guān)于你的項(xiàng)目的同行評(píng)議意見如下：

1.本項(xiàng)目在小腦顆粒細(xì)胞撤鉀的離體凋亡模型中，發(fā)現(xiàn)了一種直接調(diào)節(jié)Bim的新轉(zhuǎn)錄因子SP1，申請(qǐng)人試圖采用腺病毒轉(zhuǎn)染技術(shù)、基因突變以及分子生物學(xué)方法進(jìn)一步論證SP1是直接調(diào)控bim基因的這一假說(shuō)。立項(xiàng)具有前言性，申請(qǐng)人工作基礎(chǔ)好，并與美國(guó)Emory大學(xué)、香港大學(xué)有長(zhǎng)期的合作條件，完全能夠完成本項(xiàng)課題。建議優(yōu)先資助。

2.本項(xiàng)課題的立項(xiàng)依據(jù)較為充分，具有一定的學(xué)術(shù)創(chuàng)新及科學(xué)意義。研究?jī)?nèi)容明確、技術(shù)路線清晰、研究方法和方案可行。申請(qǐng)者有較高的學(xué)術(shù)水平，以及多次主持國(guó)家自然科學(xué)基金課題的經(jīng)驗(yàn)。同時(shí)，申請(qǐng)者所在單位又有比較好的實(shí)驗(yàn)室及條件。建議給予資助。

3.課題研究具有較好的工作基礎(chǔ)，研究具有較高的學(xué)術(shù)價(jià)值，建議資助。

4.同意資助。理由：該項(xiàng)目立論依據(jù)充分，其重要的意義表現(xiàn)在澄清撤鉀誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡時(shí)，Bim上調(diào)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。申請(qǐng)者有較好的研究基礎(chǔ)和研究能力，項(xiàng)目的內(nèi)容設(shè)置合適，重點(diǎn)突出，總體方案合理，技術(shù)路線可行，可資助。

5.Thisisanicelywritenproposalwithaclearaimandpracticalapproaches.Further,thegrouphaspublishedresultsrelatedtothecurrentproposal,indicatingtheabilityofthegrouptoperformtheexperiments.

第29頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月獲得資助的決定因素工作基礎(chǔ)好學(xué)術(shù)創(chuàng)新性及學(xué)術(shù)價(jià)值立項(xiàng)依據(jù)充分研究?jī)?nèi)容明確技術(shù)路線清晰重點(diǎn)突出、方案合理國(guó)際合作第30頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月祝大家新年快樂(lè)！

在新的一年獲得更多基金！第31頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月基金答辯充滿自信、激情儀表和體語(yǔ)特點(diǎn)：專家心理？按提前結(jié)束做準(zhǔn)備！準(zhǔn)備充分幻燈小道具口頭表達(dá)準(zhǔn)確性、情感性、可信性和簡(jiǎn)明性開門見山、突出主題做什么？為什么？怎樣做？突出特色和創(chuàng)新第32頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月帕金森病治療的新靶點(diǎn)及靛玉紅衍生物的研究與開發(fā)黎明濤中山大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院第33頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月立論依據(jù)現(xiàn)狀：

1.發(fā)病情況：世界性；中國(guó)>100萬(wàn)；美國(guó)100萬(wàn)

2.病理特征：黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元凋亡紋狀體多巴胺含量

3.治療現(xiàn)狀：左旋多巴—對(duì)癥治療：療效不理想、安全性受到質(zhì)疑第34頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月以JNK為新靶點(diǎn)治療PD2002年省重點(diǎn)項(xiàng)目（15萬(wàn)元）資助

MLK

↓

JNK

SP600125

↓c-Jun

↓凋亡

第35頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月以JNK為靶治療PD1.保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元2.改善行為學(xué)指標(biāo)3.提高黑質(zhì)多巴胺濃度第36頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第37頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月第38頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

結(jié)題情況1.四篇SCI文章，通訊作者2.人才培養(yǎng)：1名博士2名碩士第39頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月以JNK/CDK5/GSK3β為靶治療PD

JNKNeurosciRes2004,48:195-202DrugNewsPerspect.200417(10):646-54GSK3βMingtaoLi,etal,unpublisheddata

CDK5PNASUSA2003,100(23):13650-5第40頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月抑制JNK/CDK5/GSK3β的方案

1.三種抑制劑聯(lián)合

2.一種抑制劑，“一石三鳥”

第41頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月

Indirubin-3'-oxime（靛玉紅衍生物）是CDK5、GSK-3β的抑制劑

NatCellBiol.19991(1):60-7JBiolChem.2001,5;276(1):251-60第42頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月靛玉紅直接抑制JNK活性第43頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月靛玉紅直接抑制JNK,保護(hù)神經(jīng)元第44頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月Indirubin-3'-oximeinhibitedMPP+-inducedapoptosisincultureddopaminerbicneurons.(a)control,(redforTH-positiveneurons),(b)10μMMPP+decreasedTH-positivecellsandreducedcytoplasmicvolume;indirubin-3'-oxime3μM(c)and5μM(d)rescuedTH-positivecells

第45頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月Indirubin-3'-oximepreventedlossofdopamineneuronsafterMPTPadministration.(a)vehicletreated(control);(b)MPTPtreated;MPTPalongwithIndirubin-3'-oxime5mg/kg(c);10mg/kg(d)and30mg/kg(e).NoteIndirubin-3'-oximerescuedthedopaminergicneuronslossinadose-dependentmanner(c-e).第46頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月研究目標(biāo)以JNK/CDK5/GSK3β為明確靶點(diǎn)，以靛玉紅衍生物為抑制劑,研發(fā)出一類毒性小、特異性高、作用強(qiáng)的治療PD的新藥物第47頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月研究?jī)?nèi)容1.篩選對(duì)JNK具有特異性抑制作用的靛玉紅衍生物(11個(gè)）2.篩選對(duì)黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元凋亡具有保護(hù)性干預(yù)作用的靛玉紅衍生物（8個(gè)）3.篩選對(duì)PD具有治療作用的衍生物（4個(gè)）4.藥理、毒理研究第48頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月研究基礎(chǔ)1.首次證實(shí)JNK是治療PD的有效靶點(diǎn)2.證實(shí)GSK-3β是治療PD的靶點(diǎn)之一3.發(fā)現(xiàn)靛玉紅衍生物能夠抑制JNK，對(duì)PD具有治療作用4.15篇相關(guān)SCI文章第49頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月發(fā)表文章補(bǔ)充WiedmannM,WangX,TangX,HanM,LiM,MaoZ.JNeurosciRes.2005Jun1[Epubaheadofprint]WangX,TangX,LiM,MarshallJ,MaoZ.JBiolChem.2005,280(17):16705-13.LiW,PiR,ChanHH,FuH,LeeNT,TsangHW,PuY,ChangDC,LiC,LuoJ,XiongK,LiZ,XueH,CarlierPR,PangY,TsimKW,LiM,HanY.JBiolChem.2005,280(18):18179-88.第50頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月創(chuàng)新點(diǎn)

1.首次證實(shí)JNK是治療PD的有效靶點(diǎn)

2.證實(shí)GSK-3β是治療PD的靶點(diǎn)之一

3.發(fā)現(xiàn)靛玉紅能夠抑制JNK，對(duì)PD具有治療作用

4.JNK/CDK5/GSK-3β為靶治療PD5.用一種化合物抑制JNK/CDK5/GSK-3β

第51頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月我們對(duì)完成此項(xiàng)目充滿信心！謝謝！第52頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月Fig.6MithramycinA,aSP1-DNAbindinginhibitor,attenuatesbimupreguationbyactivitydeprivationinCGNs.(A)

MithramycinAattenuatestheupregulationofBimELinducedbyactivitydeprivationinadosedependentmanner.CGNswereplacedin25Kor5KmediaintheabsenceorpresenceofmithramycinAattheindicatedconcentrationsfor6h.BimELexpressionwasassessedbyWesternblotasdescribedinFig.1(A).Resultsshownarerepresentativeoffourseparateexperiments.(B)MithramycinAinhibitstheincreaseinbimmRNAlevelinadose-dependentmanner.Neuronsweretreatedasdescribedin(A),bimandactinmRNAsweredeterminedbyRT-PCR,Resultsshownarerepresentativeoffiveseparateexperiments.(C)MithramycinAsuppressestheactivationofbimpromoterinducedbyactivitydeprivation.Neuronswereco-transfectedwithbim-LucandpEF-RLfor8hr.LuciferaseactivitiesweremeasuredasdescribedinFig.2,Theexperimentswererepeatedthreetimeswithduplicatesforeachtreatment.Thedatarepresent±S.E.M.ofthreeexperiments.第53頁(yè)，課件共60頁(yè)，創(chuàng)作于2023年2月參考文獻(xiàn)1.LeyuShi

,ShoufangGong,ZhongminYuan

,ChiMa,YanlingLiu,ChuanfuWang

,WenmingLi,RongbiaoPi,ShoujianHuang,RuzhuChen

,YifanHan

,ZixuMao,andMingtaoLi.Activitydeprivation-dependentinductionoftheproapoptoticBH3-onlyproteinBimisindependentofJNK/c-Junactivationduringapoptosisincerebellargranuleneurons.NeurosciLett.2005,375：7－12.2.WenyaWang,LeyuShi,YuanbinXie,ChiMa,WenmingLi,XingwenSu,ShoujianHuang,RuzhuChen,ZhenyuZhu,ZixuMao,YifanHanandMingtao

Li.SP600125,anewJNKinhibitor,protectsdopaminergicneuronsintheM