病原微生物病毒感染的檢查方法與防治原則課件

第一節(jié)病毒感染的檢查方法第一節(jié)病毒感染的檢查方法1病毒感染的檢查

一般原則：特異、敏感、快速、簡便方法1．根據(jù)流行病學(xué)和臨床特點(diǎn)初步判定可能感染的病毒。2．根據(jù)可疑病毒的生物學(xué)性狀，機(jī)體免疫應(yīng)答和臨床過程以及病人當(dāng)前所處的時(shí)機(jī)，確定實(shí)驗(yàn)診斷方法。

病毒感染的檢查一般原則：特異、敏感、快速、簡便2病毒感染的檢查檢測(cè)內(nèi)容查病毒查特異性抗體病毒顆粒病毒抗原病毒核酸病毒酶類：如逆轉(zhuǎn)錄酶電鏡直接觀察光鏡檢查包含體分離培養(yǎng)病毒感染的檢查檢測(cè)內(nèi)容查病毒查特異性抗體病毒顆粒電鏡3一、標(biāo)本的采集與送檢原則基本與細(xì)菌相似，但應(yīng)注意：

1.標(biāo)本用“雙抗”或兩性霉素B處理

2.低溫保存，盡快送檢

3.血清學(xué)診斷采雙份血清一、標(biāo)本的采集與送檢原則基本與細(xì)菌相似，但應(yīng)注意：4二、病毒的分離與鑒定一般程序：標(biāo)本無菌處理動(dòng)物接種雞胚培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)指標(biāo)陽性指標(biāo)陰性

病毒鑒定

盲傳2～3代指標(biāo)陰性病毒陰性二、病毒的分離與鑒定一般程序：標(biāo)本無菌處理動(dòng)物接種指標(biāo)陽性5（一）病毒的分離培養(yǎng)

1.細(xì)胞培養(yǎng)

單層細(xì)胞培養(yǎng)

分類懸浮細(xì)胞培養(yǎng)原代細(xì)胞細(xì)胞種類二倍體細(xì)胞傳代細(xì)胞系（一）病毒的分離培養(yǎng)6病毒的細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶單層細(xì)胞病毒的細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)瓶單層細(xì)胞7微生物及其代謝產(chǎn)物抗原變異病毒基因的鑒定微生物及其代謝產(chǎn)物干擾素和干擾素誘生劑動(dòng)物：兔、鼠、黑猩猩、猴等（三）病毒感染的血清學(xué)診斷核酸雜交技術(shù)血清丙種球蛋白基因產(chǎn)物（如乙肝疫苗）免疫細(xì)胞羊膜腔（amnioticcavity）可激發(fā)HI，安全、方便；(1)細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect,CPE）第三節(jié)病毒感染的治療除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。(3)凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)細(xì)胞種類二倍體細(xì)胞優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低病毒＋雞紅細(xì)胞＝凝集（血凝試驗(yàn)）微生物及其代謝產(chǎn)物8病原微生物病毒感染的檢查方法與防治原則課件9對(duì)一般病毒檢測(cè)意義不大病毒性感染的快速診斷方法有哪些？二、人工被動(dòng)免疫常用生物制品③為證實(shí)所分離的病毒的臨床意義治療性疫苗動(dòng)物：兔、鼠、黑猩猩、猴等④進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查等IFN-α、β、γEBV早期抗原抗體②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；病毒＋雞紅細(xì)胞＝凝集（血凝試驗(yàn)）除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。1．根據(jù)流行病學(xué)和臨床特點(diǎn)初步判定可能感染的病毒。卵黃囊（yolksac）病毒＋中和抗體病毒失去感染性EBV早期抗原抗體接種部位流感病毒、腮腺炎病毒微生物及其代謝產(chǎn)物2.雞胚培養(yǎng)

采用孵化9～14天的雞胚

絨毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人類皰疹病毒尿囊腔（allantoiccavity）接種部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分離卵黃囊（yolksac）

嗜神經(jīng)病毒

對(duì)一般病毒檢測(cè)意義不大2.雞胚培養(yǎng)10病原微生物病毒感染的檢查方法與防治原則課件112、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低缺點(diǎn)：操作程序復(fù)雜2、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低12病原微生物病毒感染的檢查方法與防治原則課件133.動(dòng)物接種

應(yīng)用：尚無敏感細(xì)胞的病毒培養(yǎng)

動(dòng)物：兔、鼠、黑猩猩、猴等

優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果易觀察，可建立動(dòng)物模型缺點(diǎn)：有飼養(yǎng)條件要求，費(fèi)用高，動(dòng)物體內(nèi)常帶有潛伏病毒3.動(dòng)物接種141．病毒增殖鑒定

(1)細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect,

CPE）

①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；

②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；

③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。

（二）病毒的鑒定

1．病毒增殖鑒定（二）病毒的鑒定15病原微生物病毒感染的檢查方法與防治原則課件162.病毒形態(tài)學(xué)鑒定電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限光學(xué)顯微鏡：可見大病毒（痘類病毒），對(duì)一般病毒檢測(cè)意義不大2.病毒形態(tài)學(xué)鑒定電子顯微鏡：設(shè)備、操作復(fù)雜，應(yīng)用受限173.病毒血清學(xué)鑒定

鑒定病毒種、型、亞型

(1)血凝抑制試驗(yàn)—正粘病毒型與亞型鑒定

病毒＋雞紅細(xì)胞＝凝集（血凝試驗(yàn)）

病毒＋特異性抗體＋雞紅細(xì)胞＝不凝集

（血凝抑制試驗(yàn)）

3.病毒血清學(xué)鑒定鑒定病毒種、型、亞型18(2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA、RIA）——多種病毒鑒定(3)凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)

——多種病毒鑒定(2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA、RIA）194.病毒分子生物學(xué)鑒定抗原變異病毒基因的鑒定核酸擴(kuò)增核酸雜交基因芯片基因測(cè)序4.病毒分子生物學(xué)鑒定抗原變異病毒基因的鑒定20（三）病毒數(shù)量與感染性測(cè)定1.血凝試驗(yàn)：病毒總量（活病毒＋死病毒）2.蝕斑形成試驗(yàn)

3.50％組織細(xì)胞感染量

感染性病毒量（三）病毒數(shù)量與感染性測(cè)定1.血凝試驗(yàn)：病毒總量（活病毒＋死21卵黃囊（yolksac）(3)凝膠免疫擴(kuò)散試驗(yàn)如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。接種部位流感病毒、腮腺炎病毒生物制品動(dòng)物免疫血清可診斷急性感染如食用西紅柿，獲得乙肝疫苗的接種。嗜神經(jīng)病毒痘苗病毒、人類皰疹病毒可診斷急性感染將編碼某一病原體保護(hù)性抗原的基因轉(zhuǎn)入植物并在植物中表達(dá)，人們食用植物時(shí)，就完成了預(yù)防接種。四、病毒感染的快速診斷缺點(diǎn)是免疫原性弱、只激發(fā)B細(xì)胞引起HI，因?yàn)榭共《疽蕾嘋MI）。采用孵化9～14天的雞胚除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。葡萄球菌的自身疫苗治療葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治療乙肝帶毒者。羊膜腔（amnioticcavity）優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低采用孵化9～14天的雞胚③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。特點(diǎn)：特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快(四)新病毒的鑒定核酸類型的測(cè)定理化性狀的檢測(cè)形態(tài)學(xué)鑒定血清學(xué)鑒定基因測(cè)序和生物對(duì)比卵黃囊（yolksac）(四)新病毒的鑒定核酸類型的測(cè)定22四、病毒感染的快速診斷數(shù)小時(shí)內(nèi)出結(jié)果病毒顆粒病毒成分（抗原或核酸）早期抗體檢測(cè)（IgM）四、病毒感染的快速診斷數(shù)小時(shí)內(nèi)出結(jié)果23（一）形態(tài)學(xué)檢查電鏡和免疫電鏡檢查普通光學(xué)顯微鏡檢查

包涵體（一）形態(tài)學(xué)檢查電鏡和免疫電鏡檢查24（二）病毒成分檢測(cè)1.病毒蛋白抗原檢測(cè)免疫標(biāo)記技術(shù)2.病毒核酸檢測(cè)核酸擴(kuò)增技術(shù)核酸雜交技術(shù)基因芯片技術(shù)

基因測(cè)序（二）病毒成分檢測(cè)1.病毒蛋白抗原檢測(cè)25（三）病毒感染的血清學(xué)診斷應(yīng)用：①采取標(biāo)本分離病毒為時(shí)已晚②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒③為證實(shí)所分離的病毒的臨床意義④進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查等（三）病毒感染的血清學(xué)診斷應(yīng)用：261.中和試驗(yàn)（neutralizingtest）病毒＋中和抗體

病毒失去感染性

特點(diǎn)：特異性高，抗體維持時(shí)間長應(yīng)用：人群免疫情況的調(diào)查臨床診斷少用1.中和試驗(yàn)（neutralizingtest）病毒＋中和272.補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)

用已知病毒可溶性補(bǔ)體抗原檢測(cè)病人血清中相應(yīng)的補(bǔ)體抗體

特點(diǎn)：特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快

應(yīng)用：近期感染指標(biāo)。3.血凝抑制試驗(yàn)

流感疫苗接種后效果觀察及流感流行病學(xué)調(diào)查2.補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)用已知病毒可溶性補(bǔ)體抗原檢測(cè)病人28早期抗體檢測(cè)（IgM）特點(diǎn)：特異性高，抗體維持時(shí)間長可激發(fā)HI，安全、方便；二、人工被動(dòng)免疫常用生物制品對(duì)一般病毒檢測(cè)意義不大可激發(fā)HI，安全、方便；①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；分離培養(yǎng)病毒的方法有那些?除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；基因芯片技術(shù)二、人工被動(dòng)免疫常用生物制品基因整合基因產(chǎn)物疫苗中草藥血凝試驗(yàn)：病毒總量（活病毒＋死病毒）四、病毒感染的快速診斷病毒＋雞紅細(xì)胞＝凝集（血凝試驗(yàn)）嗜神經(jīng)病毒4、早期抗體檢測(cè)可診斷急性感染

特異性IgM抗體：孕婦感染風(fēng)疹病毒

EBV早期抗原抗體

EAV核心抗原抗體

早期抗原的抗體

EAV衣殼抗原抗體早期抗體檢測(cè)（IgM）4、早期抗體檢測(cè)可診斷急29(2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA、RIA）細(xì)胞因子IL-2、IL-6、IL-12葡萄球菌的自身疫苗治療葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治療乙肝帶毒者。臨床診斷少用尿囊腔（allantoiccavity）流感病毒的初次分離①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；特點(diǎn)：特異性低，抗體出現(xiàn)早，消失快基因產(chǎn)物（如乙肝疫苗）除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。多由減毒病原菌制成；基因芯片技術(shù)如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。偶可發(fā)生回復(fù)突變，毒力回升，接種后發(fā)病。二、人工被動(dòng)免疫常用生物制品蛋白質(zhì)抗原基因減毒的病毒或細(xì)菌第一節(jié)病毒感染的檢查方法懸浮細(xì)胞培養(yǎng)1．根據(jù)流行病學(xué)和臨床特點(diǎn)初步判定可能感染的病毒。②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒第二節(jié)病毒感染的特異性預(yù)防微生物及其代謝產(chǎn)物生物制品動(dòng)物免疫血清

免疫細(xì)胞細(xì)胞因子

防治和診斷感染性疾病(2)免疫標(biāo)記法（FIA、EIA、RIA）第二節(jié)病毒感染的30疫苗:死疫苗(killedvaccine)如白百破、傷寒、流腦、乙腦、流感、鉤端螺旋體等?？杉ぐl(fā)HI，安全、方便；但抗原性改變，效果差，需多次注射；反應(yīng)重）。

活疫苗（livingvaccine）如BCG、鼠疫、炭疽、脊髓灰質(zhì)炎和麻疹疫苗等?？杉ぐl(fā)HI、CMI；多由減毒病原菌制成；偶可發(fā)生回復(fù)突變，毒力回升，接種后發(fā)病。聯(lián)合疫苗在試用中。

基因工程疫苗：目的基因原核或真核細(xì)胞

基因產(chǎn)物（如乙肝疫苗）

導(dǎo)入

人工培養(yǎng)一、人工主動(dòng)免疫常用生物制品疫苗:死疫苗(killedvaccine)如白百破31重組載體疫苗：蛋白質(zhì)抗原基因減毒的病毒或細(xì)菌基因整合基因產(chǎn)物疫苗合成疫苗：

根據(jù)病原體抗原的氨基酸序列，合成的多肽可作為疫苗。如流感病毒和乙肝病毒的多肽疫苗。

缺點(diǎn)是免疫原性弱、只激發(fā)B細(xì)胞引起HI，因?yàn)榭共《疽蕾嘋MI）。轉(zhuǎn)入

培養(yǎng)

表達(dá)重組載體疫苗：轉(zhuǎn)入培養(yǎng)表達(dá)32亞單位疫苗：

除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。如腦膜炎球菌和流感桿菌表面的特異性多糖+吸附劑制成疫苗（不含類脂、無毒）、流感疫苗、乙肝疫苗等，這種疫苗防止減毒活疫苗回復(fù)突變和腫瘤病毒潛在的致癌作用。DNA疫苗：

即基因疫苗或核酸疫苗（第三代疫苗），這種核酸既是載體又能在真核細(xì)胞中表達(dá)抗原，誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞毒殺傷功能的T細(xì)胞，有效預(yù)防病毒、胞內(nèi)寄生菌及寄生蟲引起的傳染。亞單位疫苗：33轉(zhuǎn)基因植物疫苗：

將編碼某一病原體保護(hù)性抗原的基因轉(zhuǎn)入植物并在植物中表達(dá)，人們食用植物時(shí)，就完成了預(yù)防接種。如食用西紅柿，獲得乙肝疫苗的接種。治療疫苗：

葡萄球菌的自身疫苗治療葡萄球菌的感染、乙肝疫苗治療乙肝帶毒者?？赡艿臋C(jī)制是前者是脫敏作用，后者是打破免疫耐受。

類毒素：

細(xì)菌外毒素+0.3%~0.4%甲醛類毒素(毒性消失,保留抗原性).如白百破疫苗.轉(zhuǎn)基因植物疫苗：34絨毛尿囊膜（allantocherion）病毒＋特異性抗體＋雞紅細(xì)胞＝不凝集如腦膜炎球菌和流感桿菌表面的特異性多糖+吸附劑制成疫苗（不含類脂、無毒）、流感疫苗、乙肝疫苗等，這種疫苗防止減毒活疫苗回復(fù)突變和腫瘤病毒潛在的致癌作用。核酶（ribozyme）對(duì)一般病毒檢測(cè)意義不大①采取標(biāo)本分離病毒為時(shí)已晚絨毛尿囊膜（allantocherion）EAV核心抗原抗體(1)血凝抑制試驗(yàn)—正粘病毒型與亞型鑒定多由減毒病原菌制成；絨毛尿囊膜（allantocherion）臨床診斷少用嗜神經(jīng)病毒卵黃囊（yolksac）②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；優(yōu)點(diǎn)：結(jié)果易觀察，可建立動(dòng)物模型痘苗病毒、人類皰疹病毒接種部位流感病毒、腮腺炎病毒②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒二、人工被動(dòng)免疫常用生物制品

免疫球蛋白血清丙種球蛋白

細(xì)胞免疫制劑

IFN-α、β、γ細(xì)胞因子IL-2、IL-6、IL-12TNF、CSF

淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞

——LAK細(xì)胞

絨毛尿囊膜（allantocherion）二、人工被動(dòng)免疫常35第三節(jié)病毒感染的治療

核苷類藥物

非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑蛋白酶抑制劑其他抗病毒藥物

干擾素和干擾素誘生劑

中草藥

基因治療劑

治療性疫苗

抗病化學(xué)制劑反義寡核苷酸干擾RNA核酶（ribozyme）

第三節(jié)病毒感染的治療36思考題1.分離培養(yǎng)病毒的方法有那些?2.病毒性感染的快速診斷方法有哪些？3.預(yù)防病毒性感染有哪些人工自動(dòng)免疫制劑？4.診斷病毒的核酸技術(shù)有哪些？思考題1.分離培養(yǎng)病毒的方法有那些?37Bye~Bye~382.雞胚培養(yǎng)

采用孵化9～14天的雞胚

絨毛尿囊膜（allantocherion）痘苗病毒、人類皰疹病毒尿囊腔（allantoiccavity）接種部位流感病毒、腮腺炎病毒羊膜腔（amnioticcavity）流感病毒的初次分離卵黃囊（yolksac）

嗜神經(jīng)病毒

2.雞胚培養(yǎng)392、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低缺點(diǎn)：操作程序復(fù)雜2、雞胚培養(yǎng)優(yōu)點(diǎn)：易管理，不帶微生物，成本較低401．病毒增殖鑒定

(1)細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect,

CPE）

①細(xì)胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落等（多數(shù)病毒）；

②形成多核巨細(xì)胞或稱融合細(xì)胞（麻疹病毒、巨細(xì)胞病毒、呼吸道合胞病毒等）；

③在培養(yǎng)細(xì)胞中形成包涵體（狂犬病病毒、麻疹病毒等）。

（二）病毒的鑒定

1．病毒增殖鑒定（二）病毒的鑒定413.病毒血清學(xué)鑒定

鑒定病毒種、型、亞型

(1)血凝抑制試驗(yàn)—正粘病毒型與亞型鑒定

病毒＋雞紅細(xì)胞＝凝集（血凝試驗(yàn)）

病毒＋特異性抗體＋雞紅細(xì)胞＝不凝集

（血凝抑制試驗(yàn)）

3.病毒血清學(xué)鑒定鑒定病毒種、型、亞型42（三）病毒感染的血清學(xué)診斷應(yīng)用：①采取標(biāo)本分離病毒為時(shí)已晚②目前尚無分離此病毒的方法或難以分離的病毒③為證實(shí)所分離的病毒的臨床意義④進(jìn)行血清流行病學(xué)調(diào)查等（三）病毒感染的血清學(xué)診斷應(yīng)用：43缺點(diǎn)：有飼養(yǎng)條件要求，費(fèi)用高，動(dòng)物接種部位流感病毒、腮腺炎病毒早期抗體檢測(cè)（IgM）四、病毒感染的快速診斷(1)血凝抑制試驗(yàn)—正粘病毒型與亞型鑒定除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。第一節(jié)病毒感染的檢查方法懸浮細(xì)胞培養(yǎng)除去病原體的核酸，提取其表面抗原制備的疫苗。細(xì)胞因子IL-2、IL-6、IL-12EAV衣殼抗原抗體(1)血凝抑制試驗(yàn)—正粘病毒型與亞型鑒定二、人工被動(dòng)免疫常用生物制品（三）病毒數(shù)量與感染性測(cè)定絨毛尿囊膜（allantocherion）一般原則：特異、敏感、快速、簡便(1)細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathiceffect,CPE）③為證實(shí)所分離的病毒的臨床意義應(yīng)用：近期感染指標(biāo)。絨毛尿囊膜（allant