氨基甲酸酯類carbamate農(nóng)殘

氨基甲酸酯類(carbamate)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。1使用目的：本試劑盒用于蔬菜、水果、相應食物、水及中毒殘留物中氨基甲酸酯類(carbamate)殘留的定量檢測。2實驗原理本試劑盒采用競爭ELISA方法，在微孔板包被有颯基甲酸酯類(carbamale)偶聯(lián)抗原，加入氨基甲酸酯類(carbamate)標準品或樣品，游離氨基甲酸酯類(carbamate)與微孔條上預包被的氨基甲酸酯類(carbamale)偶聯(lián)抗原互相競爭抗氨基甲酸酯類(carbamate)抗體醐標記物，用TMB底物顯色,加入終止液后顏色由藍色變?yōu)辄S色，用酶標儀在450nm波長下進行檢測，吸光值與樣品中氨基甲酸酯類(carbamate)含量成反比，通過標準曲線計算樣品中氨基甲酸酯類(carbamate)的含量。3試劑盒組成預包被的氨基甲酸酯類(carbamale)偶聯(lián)抗原的可拆酶標板：1塊(12孔x8條)。氨基甲酸酯類(carbamate)標準品:6瓶(1ml/瓶),含量分別是：0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppbo抗氨基甲酸酯類(carbamate)抗體酶結合物：1瓶(6ml)。顯色液A：1瓶(6ml)o顯色液B1瓶(6ml)。終止液：1瓶(6ml),2M硫酸。樣本稀釋液：1瓶(10x,6ml),用于樣品稀釋用。濃縮洗滌液：1瓶(20x,20ml),用于洗板。說明書一份。4需要而未提供的材料設備波長450nm酶標儀。粉碎機。筒。振蕩器。漏斗。WhatmanNo1或相當?shù)臑V紙。微量移液器。4.2試劑去離子水或蒸飼水。甲醇。5貯存試劑盒貯存于2~8℃,切勿冷凍未用完的微孔板應該密封干燥保存6注意事項6』使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。不要使用過期試劑盒。試劑盒使用前，將試劑恢復至室溫（25±2℃）,建議至少回溫2小時。標準品中含有氨基甲酸酯類（carbamate）,使用時應特別注意，操作時應帶手套。終止液中含有硫酸，使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。不同標準品、樣品所用吸頭不能混用，否則會影響試驗結果。不同批號試劑盒中的試劑不得混用；不同標準品、樣品所用吸頭不得混用，否則會影響實驗結果。稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液，否則會影響實驗結果混合試劑時應避免起泡。7工作液準備氨基甲酸酯類（carbamate）標準品溶液:0ppb,0.1ppb,0.3ppb,0.9ppb,2.7ppb,8.1ppb濃縮洗滌液：用蒸僧水按1:20（1+19）稀釋備用樣本稀釋液：用蒸儲水按1:10（1+9）稀釋備用顯色劑：己備用，避免光線直照反應終止液：已備用8樣品處理程序（樣品在提取過程中，要嚴格按說明書操作，提取過程中應準確稀釋，否則會出現(xiàn)結果不準確，樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存）取10g粉碎的樣品,加20ml70%甲醇溶液強力振蕩3分鐘JIJWhatmanNo1濾紙過濾取25口1處理后的樣品，加入25例樣本稀釋液于反應孔中（樣本稀釋倍數(shù)為2）9酶免分析步驟實驗須知實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復至室溫（25±2℃）,時間約2小時?；販刂潦覝兀?5±2℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存注：一定保證回溫充分，否則影響檢測的精確度和準確度。使用后請立即將試劑放回2~8℃保存請不要改變分析程序請使用精確的微量移液器操作一旦開始，請不要中斷任何程序ELISA結果的可重復性極大程度的取決于操作程序，請嚴格按照要求操作為避免交叉污染，每個標準品和樣品均應使用不同的吸頭加樣加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內表面分析步驟預先進行編號，標記B0、標準品和樣品的位置，推薦進行雙孔檢測取所需數(shù)量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存923樣品稀釋液（10x）、濃縮洗滌液（20x）稀釋成工作液（蒸飽水或去離子水稀釋）在B0孔中加入50|jL0ppb標準品溶液在各標準孔中加入50m的標準品溶液在各樣品孔中加入50口1樣品溶液在所有孔中加入50口1的抗氨基甲酸酯類（carbamate）抗體酶結合物輕輕晃動反應板幾秒鐘。37C溫浴30min（溫浴過程中不時輕拍反應板，可以減少雙孔誤差）甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，最后一次應在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體。應滌程序完成后，立即用微量移液器在每個微孔中先加入509顯色液A,再加5O|J1顯色液B：輕微晃動反應板使之徹底混勻37℃溫浴1。111m孔中加入5O|J1終止液，混勻450nm下檢測吸光度,結果在5min內讀取。10結果計算定量分析所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值(B)除以第一個標準(0標準)的吸光度值(B0)再乘以100%,即百分吸光度值。B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值BO-Oppb標準溶液的平均吸光度值以氨基甲酸酯類(carbamate)濃度的對數(shù)值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標準曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值，可從曲線上得到對應點的橫坐標，即為氨基甲酸酯類(carbamate)濃度的對數(shù)值，求得反對數(shù)即為測定液中氨基甲酸酯類(carbamate)濃度C(ppb)由于樣品經(jīng)過了預先稀釋，因此根據(jù)標準曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋倍數(shù)。半定量測定目測半定量測定：首先選擇一個適當?shù)臉藴室号c樣品同運行，根據(jù)樣品與標準品顏色深淺比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。儀器半定量測定：首先選擇一個適當?shù)臉藴室号c樣品同運行，根據(jù)樣品與標準品吸光度值的高低比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。11特異性物質交叉反應氨基甲酸酯類(carbamate)100%12試劑盒參數(shù)本試劑盒檢測下限為0.05ppbB0吸光度最佳值應大于