表面增強(qiáng)拉曼散射技術(shù)對(duì)血漿和藥物中甲咪唑的測(cè)定

表面增強(qiáng)拉曼散射技術(shù)對(duì)血漿和藥物中甲咪唑的測(cè)定

1進(jìn)癥表面增強(qiáng)曼索反應(yīng)原理甲基丙烯酸是一種抗甲狀腺藥物，通常用于各種甲狀腺功能障礙的患者。表面增強(qiáng)拉曼散射技術(shù)(Surface-enhancedramanscattering,SERS)具有光譜特征性強(qiáng)、靈敏度高、制樣簡(jiǎn)單,以及檢測(cè)快捷等優(yōu)點(diǎn)2實(shí)驗(yàn)部分2.1高效液相色譜便攜式i-拉曼785H光譜儀(上海必達(dá)泰克光電科技有限公司);1290液相色譜/G6460B系列三級(jí)四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀(安捷倫科技有限公司);C二水合檸檬酸三鈉(C2.2sers銀納米制備實(shí)驗(yàn)中所用玻璃器皿均在王水(HCl-HNO2.3甲咪唑藥液的制備分別用超純水和乙醇溶解適量的甲巰咪唑和2-巰基異煙酸,得到5.50mmol/L甲巰咪唑儲(chǔ)備液和0.31mmol/L2-巰基異煙酸儲(chǔ)備液,于4℃保存?zhèn)溆?。移?0μL2-巰基異煙酸儲(chǔ)備液和不同體積的甲巰咪唑儲(chǔ)備液,用水稀釋至0.50mL,得到11個(gè)甲巰咪唑校正樣本,其中甲巰咪唑的濃度分別為0.06,0.18,0.37,0.55,0.73,0.92,1.10,1.28,1.47,1.65和1.83μmol/L。移取1.00mL正常人血漿(用LC-MS/MS沒有檢測(cè)出甲巰咪唑)于10.0mL離心管中,用乙腈稀釋至8.0mL,于20℃以10000r/min離心20min;吸取4.00mL上清液,定容至50.0mL,備用。移取10μL2-巰基異煙酸儲(chǔ)備液與適量甲巰咪唑儲(chǔ)備液,用上述血漿上清液稀釋至0.5mL,得到甲巰咪唑濃度分別為0.28,0.46,0.83,1.01,1.19,1.38和1.74μmol/L的血漿預(yù)測(cè)樣本(對(duì)每個(gè)甲巰咪唑濃度水平,均配制3個(gè)重復(fù)血漿樣本)。準(zhǔn)確稱取一片甲巰咪唑藥片(0.0721g),用水溶解并定容至50.0mL,再以水將其稀釋50倍,得到甲巰咪唑藥片儲(chǔ)備液。如表1所示,將20μL藥片儲(chǔ)備液與10μL2-巰基異煙酸儲(chǔ)備液和適量甲巰咪唑儲(chǔ)備液混合后用超純水稀釋至0.5mL,得到藥片預(yù)測(cè)集樣本。2.4sers光譜的采集將10μL樣本、50μL的銀納米顆粒(AgNPs)、以及2.5μL2mol/LKCl混勻后,立即用毛細(xì)管取樣,使用耦合了BAC151A拉曼影像顯微鏡采樣系統(tǒng)的便攜式i-Raman785H光譜儀采集其SERS光譜。樣本SERS光譜采集參數(shù)如下:拉曼位移范圍500~1600cm!2.5lcms試驗(yàn)為了驗(yàn)證SERS技術(shù)結(jié)合MEM2.6sers光譜信號(hào)強(qiáng)度的影響如圖1所示,甲巰咪唑的SERS光譜包含有1515cm由于樣本的SERS光譜信號(hào)強(qiáng)度除了與待測(cè)分析物濃度有關(guān)之外,還會(huì)受SERS增強(qiáng)基底(如銀納米顆粒)物理性質(zhì)變化的影響,這使得樣本的SERS光譜信號(hào)強(qiáng)度與待測(cè)分析物的濃度之間的關(guān)系常不為簡(jiǎn)單的線性關(guān)系。本研究采用如下MEM其中,x本研究將用水配制的甲巰咪唑校正集樣本的SERS光譜作為校正集,在其上建立MEMc采用RMSEP和ARPE評(píng)價(jià)和比較MEM3結(jié)果與討論3.1-基異酸鈉采用內(nèi)標(biāo)加入法對(duì)待測(cè)樣本中的甲巰咪唑進(jìn)行SERS定量分析。內(nèi)標(biāo)物2-巰基異煙酸(其SERS特征峰數(shù)量少且信號(hào)較強(qiáng))和待測(cè)分析物2-巰基異煙酸均含有巰基,它們可通過與銀納米顆粒表面形成穩(wěn)定的Ague5c6S鍵而修飾在銀納米顆粒表面。由于甲巰咪唑與2-巰基異煙酸之間可能存在對(duì)銀納米顆粒表面上結(jié)合位點(diǎn)的競(jìng)爭(zhēng)現(xiàn)象,作為內(nèi)標(biāo)物加入的2-巰基異煙酸的濃度若太低,則其SERS信號(hào)太弱,起不到內(nèi)標(biāo)作用;但2-巰基異煙酸濃度也不能太高,否則會(huì)影響甲巰咪唑的檢測(cè)靈敏度。為了實(shí)現(xiàn)對(duì)本研究所考察濃度范圍內(nèi)的甲巰咪唑進(jìn)行較準(zhǔn)確的定量分析,將所加入的2-巰基異煙酸的濃度設(shè)置為一個(gè)比較適中的值,即6.2μmol/L。3.2種方法獲得sers光譜的比較在SERS定量分析過程中遇到的最大問題是:樣本的SERS光譜信號(hào)重現(xiàn)性較差。如圖2所示,在其它實(shí)驗(yàn)條件完全一樣的情況下,將激光聚焦在同一根取樣毛細(xì)管(毛細(xì)管中裝有同一銀納米顆粒-KCl-樣本混合物)中不同位置所獲得一組SERS光譜之間存在明顯差異。這主要是由SERS增強(qiáng)基底納米銀顆粒的形狀和大小分布不均勻所致。由OPLEC3.3甲咪唑的定量分析3