水產(chǎn)品添加劑的檢測(cè)-防腐劑的測(cè)定

苯甲酸和山梨酸的測(cè)定——?dú)庀嗌V法原理一試劑二目錄頁(yè)儀器三分析步驟四結(jié)果表述五我國(guó)現(xiàn)階段可以批準(zhǔn)使用的有30多種，而苯甲酸及其鈉鹽、山梨酸及其鉀鹽是最常見(jiàn)的食物防腐劑，其使用的主要目的就是防止食品變質(zhì)。但是，如果食品中加入過(guò)量的苯甲酸和山梨酸，就會(huì)破壞食物中的維生素，從而加重人體的負(fù)擔(dān)，所以我們必須意識(shí)到苯甲酸和山梨酸的危害性。苯甲酸山梨酸一、原理試樣經(jīng)鹽酸酸化后,用乙醚提取苯甲酸、山梨酸,采用氣相色譜-氫火焰離子化檢測(cè)器進(jìn)行分離測(cè)定,外標(biāo)法定量。二、試劑（1）鹽酸溶液(1+1):取50mL鹽酸,邊攪拌邊慢慢加入到50mL水中,混勻。（2）氯化鈉溶液(40g/L):稱取40g氯化鈉,用適量水溶解,加鹽酸溶液2mL,加水定容到1L。（3）正己烷-乙酸乙酯混合溶液(1+1):

取100mL正己烷和100mL乙酸乙酯,混勻。（4）標(biāo)準(zhǔn)溶液①苯甲酸、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1000mg/L):分別準(zhǔn)確稱取苯甲酸、山梨酸各0.1g(精確到0.0001g),用甲醇溶解并分別定容至100mL。轉(zhuǎn)移至密閉容器中。②苯甲酸、山梨酸混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(200mg/L):分別準(zhǔn)確吸取苯甲酸、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液各10.0mL于50mL容量瓶中,用乙酸乙酯定容。轉(zhuǎn)移至密閉容器中。③苯甲酸、山梨酸混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液:分別準(zhǔn)確吸取苯甲酸、山梨酸混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液0mL、0.05mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL和10.0mL,用正己烷-乙酸乙酯混合溶劑(1+1)定容至10mL,配制成質(zhì)量濃度分別為0mg/L、1.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L、100mg/L和200mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。臨用現(xiàn)配。三、儀器（1）氣相色譜儀:帶氫火焰離子化檢測(cè)器(FID)。（2）分析天平:感量為0.001g和0.0001g。（3）渦旋振蕩器。（4）離心機(jī):轉(zhuǎn)速>8000r/min。（5）勻漿機(jī)。（6）氮吹儀。四、分析步驟1.試樣的制備非均勻的液態(tài)、半固態(tài)樣品用組織勻漿機(jī)勻漿;固體樣品用研磨機(jī)充分粉碎并攪拌均勻。取其中的200g裝入玻璃容器中,密封,液體試樣于4℃保存,其他試樣于-18℃保存。2.提取準(zhǔn)確稱取約2.5g(精確至0.001g)試樣于50mL離心管中,加0.5g氯化鈉、0.5mL鹽酸溶液(1+1)和0.5mL乙醇,用15mL和10mL乙醚提取兩次,每次振搖1min,于8000r/min離心3min。每次均將上層乙醚提取液通過(guò)無(wú)水硫酸鈉濾入25mL容量瓶中。加乙醚清洗無(wú)水硫酸鈉層并收集至約25mL刻度,最后用乙醚定容,混勻。準(zhǔn)確吸取5mL乙醚提取液于5mL具塞刻度試管中,于35℃氮吹至干,加入2mL正己烷-乙酸乙酯(1+1)混合溶液溶解殘?jiān)?待氣相色譜測(cè)定。3.儀器參考條件（1）色譜柱:聚乙二醇毛細(xì)管氣相色譜柱,內(nèi)徑320μm,長(zhǎng)30m,膜厚度0.25μm,或等效色譜柱。（2）載氣:氮?dú)?流速3mL/min。（3）空氣:400mL/min。（4）氫氣:40mL/min。（5）進(jìn)樣口溫度:250℃。（6）檢測(cè)器溫度:250℃。（7）柱溫程序:初始溫度80℃,保持2min,以15℃/min的速率升溫至250℃,保持5min。（8）進(jìn)樣量:2μL。（9）分流比:10∶1。4.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液分別注入氣相色譜儀中,以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。5.試樣溶液的測(cè)定將試樣溶液注入氣相色譜儀中,得到峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到待測(cè)液中苯甲酸、山梨酸的質(zhì)量濃度。五、結(jié)果表述試樣中苯甲酸、山梨酸含量按下式計(jì)算:式中:X——試樣中待測(cè)組分含量,單位為克每千克(g/kg);ρ——由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的樣液中待測(cè)物的質(zhì)量濃度,單位為毫克每升(mg/L);V——加入正己烷-乙酸乙酯(1+1)混合溶劑的體積,單位為毫升(mL);25——試樣乙醚提取液的總體積,單位為毫升(mL);m——試樣的質(zhì)量,單位為克(g);苯甲酸和山梨酸的測(cè)定——液相色譜法原理一試劑二目錄頁(yè)儀器三分析步驟四結(jié)果表述五一、原理樣品經(jīng)水提取,高脂肪樣品經(jīng)正己烷脫脂、高蛋白樣品經(jīng)蛋白沉淀劑沉淀蛋白,采用液相色譜分離、紫外檢測(cè)器檢測(cè),外標(biāo)法定量。二、試劑（1）氨水溶液(1+99):取氨水1mL,加到99mL水中,混勻。（2）亞鐵氰化鉀溶液(92g/L):稱取106g亞鐵氰化鉀,加入適量水溶解,用水定容至1000mL。（3）乙酸鋅溶液(183g/L):稱取220g乙酸鋅溶于少量水中,加入30mL冰乙酸,用水定容至1000mL。（4）流動(dòng)相乙酸銨溶液(20mmol/L):稱取1.54g乙酸銨,加入適量水溶解,用水定容至1000mL,經(jīng)0.22μm水相微孔濾膜過(guò)濾后備用。甲酸-乙酸銨溶液(2mmol/L甲酸+20mmol/L乙酸銨):稱取1.54g乙酸銨,加入適量水溶解,（5）標(biāo)準(zhǔn)溶液配制①苯甲酸、山梨酸和糖精鈉(以糖精計(jì))標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液(1000mg/L):分別準(zhǔn)確稱取苯甲酸鈉、山梨酸鉀和糖精鈉0.118g、0.134g和0.117g(精確到0.0001g),用水溶解并分別定容至100mL。②苯甲酸、山梨酸和糖精鈉(以糖精計(jì))混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液(200mg/L):分別準(zhǔn)確吸取苯甲酸、山梨酸和糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液各10.0mL于50mL容量瓶中,用水定容。③苯甲酸、山梨酸和糖精鈉(以糖精計(jì))混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液:分別準(zhǔn)確吸取苯甲酸、山梨酸和糖精鈉混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液0mL、0.05mL、0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL和10.0mL,用水定容至10mL,配制成質(zhì)量濃度分別為0mg/L、1.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L、100mg/L和200mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液。臨用現(xiàn)配。三、儀器（1）高效液相色譜儀:配紫外檢測(cè)器。（2）分析天平:感量為0.001g和0.0001g。（3）渦旋振蕩器。（4）離心機(jī):轉(zhuǎn)速>8000r/min。（5）勻漿機(jī)。（6）恒溫水浴鍋。（7）超聲波發(fā)生器。四、分析步驟1.試樣的制備非均勻的液態(tài)、半固態(tài)樣品用組織勻漿機(jī)勻漿;固體樣品用研磨機(jī)充分粉碎并攪拌均勻。取其中的200g裝入玻璃容器中,密封,液體試樣于4℃保存,其他試樣于-18℃保存。2.提取準(zhǔn)確稱取約2g(精確到0.001g)試樣于50mL具塞離心管中,加水約25mL,渦旋混勻,于50℃水浴超聲20min,冷卻至室溫后加亞鐵氰化鉀溶液2mL和乙酸鋅溶液2mL,混勻,于8000r/min離心5min,將水相轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中,于殘?jiān)屑铀?0mL,渦旋混勻后超聲5min,于8000r/min離心5min,將水相轉(zhuǎn)移到同一50mL容量瓶中,并用水定容至刻度,混勻。取適量上清液過(guò)0.22μm濾膜,待液相色譜測(cè)定。3.儀器參考條件（1）色譜柱:C18柱,柱長(zhǎng)250mm,內(nèi)徑4.6mm,粒徑5μm,或等效色譜柱。（2）流動(dòng)相:甲醇+乙酸銨溶液=5+95。（3）流速:1mL/min。（4）檢測(cè)波長(zhǎng):230nm。（5）進(jìn)樣量:10μL。4.標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作將混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液分別注入液相色譜儀中,測(cè)定相應(yīng)的峰面積,以混合標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),以峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。5.試樣溶液的測(cè)定將試樣溶液注入液相色譜儀中,得到峰面