浙科版公開課一輪復(fù)習(xí)植物組織培養(yǎng)市公開課一等獎?wù)n件省賽課獲獎?wù)n件

植物組織培養(yǎng)專項

1/68一、植物組織培養(yǎng)概念植物組織培養(yǎng)：

是指在無菌條件下利用人工培養(yǎng)基對離體植物器官、組織、細胞、原生質(zhì)體等進行培養(yǎng)。2/68外植體（explant）：由活體植物體上切取下來，用于組織培養(yǎng)多種接種材料。包括多種器官、組織、細胞或原生質(zhì)體等。愈傷組織（callus）：原指植物受傷后在傷口表面形成一團薄壁細胞；在組織培養(yǎng)中，是指在人工培養(yǎng)基上由外植體形成一團無序生長具有旺盛分裂能力薄壁細胞。3/68二、植物組織培養(yǎng)技術(shù)理論基礎(chǔ)植物細胞全能性(Plantcellulartotipotency）從理論上講，植物體每個生活細胞都具有該植物體所有遺傳信息，在特定離體培養(yǎng)條件下，具有發(fā)育成完整植株潛在能力。

4/68從理論上講，植物具有全能性細胞有三類：（1）受精卵（2）發(fā)育中分生組織細胞：可取自分生組織、根尖、嫩莖、幼葉、花等；（3）雌雄配子及單倍體細胞：胚囊及卵細胞、花粉及精子細胞。5/68三、植物組織培養(yǎng)類型1.按培養(yǎng)材料分為：

愈傷組織培養(yǎng)最為常見組織培養(yǎng)

器官培養(yǎng)

胚、胚乳、子房、根、莖、葉花和幼果部分組織培養(yǎng)

懸浮細胞培養(yǎng)莖尖分生組織培養(yǎng)原生質(zhì)體培養(yǎng)游離單細胞培養(yǎng)細胞團培養(yǎng)6/68常用組織培養(yǎng)有莖尖培養(yǎng)、芽尖培養(yǎng)、花器官培養(yǎng)、發(fā)狀根培養(yǎng)等。其中：（1）莖尖培養(yǎng)、芽尖培養(yǎng)：植物迅速繁殖常用辦法；（2）花器培養(yǎng)和莖尖培養(yǎng)：取得無病毒植株主要途徑；（3）發(fā)狀根培養(yǎng)（土壤農(nóng)桿菌侵染形成“病態(tài)”根）：主要目標(biāo)為取得某些次級代謝產(chǎn)物。在迅速繁殖中，最常用培養(yǎng)材料是莖尖，一般切塊在0.5cm左右。但假如為培養(yǎng)無病毒苗，一般僅取莖尖分生組織部分，其長度在0.1mm下列。7/68

人工種子（Artificialseed，SyntheticSeed）：是指植物離體培養(yǎng)產(chǎn)生胚狀體或不定芽被包裹在具有營養(yǎng)和保護功能人工胚乳和人工種皮中，從而形成能發(fā)芽出苗顆粒體。作為繁殖材料。8/68藻酸鈉在室溫下為液體，很適合于制造人工種子。當(dāng)體細胞胚與藻酸鈉混合后，再滴入硝酸鈣或氯化鈣溶液中，30min內(nèi)表面形成一層持久種皮。人工胚乳含植物激素、蔗糖、無機鹽等物質(zhì)9/68人工種子長處1.建立高效迅速植物無性繁殖辦法（無性繁殖植物）。2.對于制種困難優(yōu)秀雜種種子能夠迅速取得大量種子。3.與田間制種相比，能夠節(jié)省制種用地，且不受季節(jié)限制。4.與利用試管苗相比，可避免移栽困難，實現(xiàn)機械化操作，便于儲藏和運輸。10/682、根據(jù)培養(yǎng)基類型分為:

（1）固體培養(yǎng)（Solidculture）:瓊脂、卡拉膠等固化。（2）半液半固體培養(yǎng)(SemisolidCulture)：固液雙層。（3）液體培養(yǎng)(LiquidCulture)：震蕩(搖床）、旋轉(zhuǎn)或靜置培養(yǎng)。11/682、根據(jù)培養(yǎng)基類型分為:

1）．固體培養(yǎng)法即用瓊脂固化培養(yǎng)基來培養(yǎng)植物材料辦法。是目前最常用辦法。雖然該辦法設(shè)備簡單，易行，但養(yǎng)分分布不均，生長速度不均衡，并常有褐化中毒現(xiàn)象發(fā)生。2）．液體培養(yǎng)法即用不加固化劑液體培養(yǎng)基培養(yǎng)植物材料辦法。由于液體中氧氣含量較少，因此一般需要通過攪動或振動培養(yǎng)液辦法以確保氧氣供應(yīng)，采取搖床進行培養(yǎng)，這種定期浸沒辦法，既能使培養(yǎng)基均一，又能確保氧氣供應(yīng)。12/68固體培養(yǎng)：液體培養(yǎng)13/68四、植物組織培養(yǎng)技術(shù)途徑植物細胞通過再分化形成完整個體能夠通過兩種途徑：器官發(fā)生和體細胞胚發(fā)生途徑。P23（一）器官發(fā)生途徑：培養(yǎng)條件下組織或細胞團（愈傷組織）分化形成不定根、不定芽等器官過程。（二）胚狀體發(fā)生途徑：是指在愈傷組織中產(chǎn)生出某些與種子中胚相同構(gòu)造，即同步形成一種有苗端和根端雙極性構(gòu)造，而發(fā)育成再生植株途徑。14/68直接器官發(fā)生間接器官發(fā)生直接器官發(fā)生：外植體中已存在器官原基，深入培養(yǎng)即形成對應(yīng)組織器官，進而再生植株。如莖尖、根尖分生組織培養(yǎng)；如菊花組織培養(yǎng)（選修一、試驗11）間接器官發(fā)生：另一種情況是外植體某些部位細胞，在重新分裂后先形成愈傷組織，然后由愈傷組織分化形成器官原基（選修三p22第二段）15/68制備外植體

將已消毒材料，用無菌刀、剪、鑷等，在無菌環(huán)境下，剝?nèi)パ亏[片、嫩枝外皮和種皮胚乳等，葉片則不需剝皮。然后切成0.2－0.5厘米厚小片，這就是外植體。在操作中嚴(yán)禁用手觸動材料。（1）直接器官發(fā)生途徑16/68接種和培養(yǎng)

1.接種

在無菌壞境下，采取頂芽、側(cè)芽或帶有芽莖切段，將切好外植體立即接在培養(yǎng)基上，每瓶接種4－10個。

2.封口

接種后，瓶、管用無菌藥棉或蓋封口，培養(yǎng)皿用無菌膠帶封口。

3.溫度

培養(yǎng)基大多應(yīng)保持在25℃左右，但要因植物種類及材料部位不一樣而區(qū)分看待。

17/68接種和培養(yǎng)

4.增殖

把材料分株或切段轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基中，增殖培養(yǎng)基一般在分化培養(yǎng)基上加以改良，以利于增殖率提升。

5.根誘導(dǎo)

繼代培養(yǎng)形成不定芽和側(cè)芽等一般沒有根，必須轉(zhuǎn)到生根培養(yǎng)基上進行生根培養(yǎng)。1個月后即可取得鍵壯根系。18/68煉苗移栽

試管苗從無菌到光、溫、濕穩(wěn)定環(huán)境進入自然環(huán)境，必須進行煉苗。一般移植前，先將培養(yǎng)容器打開，于室內(nèi)自然光照下放3天，然后取出小苗，用自來水把根系上營養(yǎng)基沖洗潔凈，再栽入已準(zhǔn)備好基質(zhì)中，基質(zhì)使用前最佳消毒。移栽前要合適遮蔭，加強水分管理，保持較高空氣濕度（相對濕度98%左右），但基質(zhì)不宜過濕，以防爛苗。19/68外植體脫分化愈傷組織再分化不定芽不定根再生植株（2）間接器官發(fā)生途徑（選修三p22第二段）再分化20/68小麥愈傷組織器官發(fā)生途徑先芽后根21/68大蒜根尖培養(yǎng)及植株再生先根后芽22/68通過器官發(fā)生形成再生植株大體上有三種方式:第一種方式是先芽后根;第二種方式為先根后芽;第三種方式是在愈傷組織不一樣部位形成芽和根，再通過維管組織聯(lián)系形成完整植株。23/68（二）體細胞胚胎發(fā)生途徑（胚狀體發(fā)生途徑）：體細胞胚概念：離體培養(yǎng)條件下沒有通過受精過程，但通過了胚胎發(fā)育過程中所形成胚類似物，統(tǒng)稱為體細胞胚或胚狀體。體細胞胚發(fā)生過程：細胞脫分化后形成類胚構(gòu)造，然后經(jīng)歷與合子胚相同發(fā)育過程，從細胞團、球形胚、心形胚、胚狀體24/68（二）體細胞胚發(fā)生途徑分類

1.從外植體直接發(fā)生以葉片為外植體培養(yǎng)中2.經(jīng)胚性愈傷組織發(fā)生3.懸浮培養(yǎng)細胞發(fā)生（胚性細胞團）25/68葉誘導(dǎo)形成瘤狀物,繼續(xù)發(fā)育，通過球形胚、心形胚等發(fā)育過程，最后形成體細胞胚

1.從外植體直接發(fā)生——以葉片為外植體培養(yǎng)中26/68胚狀體發(fā)生途徑外植體脫分化愈傷組織再分化胚狀體再生植株2.經(jīng)胚性愈傷組織發(fā)生27/68菊花體細胞胚胎發(fā)生及植株再生胚狀體28/68外植體脫分化再分化胚性細胞胚性細胞特點：細胞質(zhì)豐富、液泡小而細胞核大。搖床胚狀體3.懸浮細胞培養(yǎng)29/68植物組織培養(yǎng)再生植株途徑激素調(diào)控30/68五、植物組織培養(yǎng)技術(shù)應(yīng)用1、優(yōu)質(zhì)種苗迅速無性繁殖：迅速繁殖某些稀有植物或有較大經(jīng)濟價值植物，不受地理環(huán)境和季節(jié)限制，達成迅速、高效目標(biāo)；

園藝植物種苗工廠化生產(chǎn)31/68無毒組織2.通過莖尖培養(yǎng)生產(chǎn)脫毒健康種苗：如草莓、香蕉、甘蔗、馬鈴薯、大蒜等。所取得脫毒苗一定要通過判定，確認不帶病毒才能使用。莖尖培養(yǎng)脫毒32/683、植物種質(zhì)資源保存、挽救瀕于滅絕植物植物組織培養(yǎng)結(jié)合超低溫保存技術(shù)，能夠給植物種質(zhì)保存帶來一次大飛躍。由于保存一種細胞就相稱與保存一粒種子，但所占空間僅為本來幾萬分之一，并且在低溫液氮中能夠長時間保存，不像種子那樣需要年年更新或經(jīng)常更新。33/68

花粉、花藥培養(yǎng)產(chǎn)生單倍體植株4、通過花藥和花粉培養(yǎng)取得單倍體植株、縮短育種年限。34/68在遠源雜交中，雜交后形成胚往往在未成熟狀態(tài)時，就停頓生長，不能形成有生活力種子，因而雜交不孕，這給遠緣雜交造成極大困難。遠緣雜交中，由于生理上和遺傳上障礙而不能雜交成功，可采取試管受精加以克服，產(chǎn)生雜種胚在試管中發(fā)育成完整植株。5、幼胚拯救，克服遠緣雜交障礙35/68(1)(1)(2)(3)(4)(5)6、植物細胞融合通過原生質(zhì)體融合，可部分克服有性雜交不親和性，而取得體細胞雜種，從而發(fā)明新種或育成優(yōu)良品種。酶解法（纖維素酶、果膠酶等）甘露醇（較高滲入壓）物理法：離心、振動、電刺激等化學(xué)法：聚乙二醇（PEG）原生質(zhì)體融合再生壁脫分化再分化36/687、培養(yǎng)細胞突變體應(yīng)用培養(yǎng)細胞處于不停分生狀態(tài)，它就容易受培養(yǎng)條件和外加壓力（如射線、化學(xué)物質(zhì)）影響而產(chǎn)生突變，用細胞培養(yǎng)進行誘發(fā)、篩選和判定期,處理細胞數(shù)遠遠多于處理個體數(shù),因此某些突變率極低性狀有也許從中選擇出來，從而育成新品種。目前用這種辦法已經(jīng)篩選到抗病、抗鹽、高蛋白、高產(chǎn)等突變體，有些已經(jīng)用于生產(chǎn)。37/68接收目標(biāo)基因受體細胞要產(chǎn)生再生植株，就需要通過組織培養(yǎng)辦法才能實現(xiàn)。

8.用于基因工程技術(shù)發(fā)明植物新種質(zhì)。38/689、大規(guī)模植物細胞、組織和器官培養(yǎng)生產(chǎn)次生代謝物質(zhì)；中國中草藥是一份人類珍貴財富，但很多種中草藥資源匱乏，產(chǎn)量不足，甚至瀕于滅絕。假如能利用組織和細胞培養(yǎng)辦法在試驗室內(nèi)生產(chǎn)，不再依附于自然環(huán)境，不但能夠處理現(xiàn)有困難，并且能夠通過篩選高產(chǎn)有效成份細胞系，來提升其藥用價值。例如用培養(yǎng)人參懸浮細胞，來生產(chǎn)人參皂苷，已在日本等國家形成規(guī)模。39/68

根培養(yǎng):毛狀根培養(yǎng)利用培養(yǎng)植物細胞和組織細胞作為生物反應(yīng)器，有也許生產(chǎn)出人類所需要天然有機化合物,如蛋白質(zhì)、脂肪、糖類、藥品、香料、生物緘及其他活性化合物。也能夠生產(chǎn)某些抗生素、疫苗等，如用生食蔬菜生產(chǎn)乙肝疫苗正在試驗中。40/6841/68組織培養(yǎng)詳細過程42/68現(xiàn)以MS培養(yǎng)基為例介紹配備培養(yǎng)基主要過程。1．配制MS大量元素母液將大量元素分別配制成母液P602．配制MS微量元素母液將微量元素配制成母液。3．配制MS有機母液肌醇、鹽酸硫胺素、煙酸、甘氨酸、鹽酸吡哆醇

4．配制MS鐵鹽母液EDTA二鈉、FeSO4?7H2O各自配成母液倒入試劑瓶中，寄存于冰箱中因此MS母液有5種大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有機母液和MS鐵鹽母液，共8種母液。，使用時再分別稀釋。一.培養(yǎng)基配制43/68激素母液配制多種生長素和細胞分裂素要單獨配制，不能混合在一起生長素類（NAA萘乙酸）一般要先用0.1mol/LNaOH溶解細胞分裂素（BA芐基腺嘌呤）一般要先用0.1mol/L鹽酸溶解，然后再加蒸餾水定容。一般配成母液冰箱保存44/68二．配制培養(yǎng)基

以配備1LMS培養(yǎng)基為例，按次序進行如下操作：1．先在燒杯中放入某些蒸餾水。2．分別取上面八種母液10ml倒入。3．一般稱取30g蔗糖倒入，攪拌溶解。4．加蒸餾水用量筒定溶至1L。5．按設(shè)計好方案添加多種激素，由于激素用量很小，并且激素對組培植物生長至關(guān)主要。因此最佳用移液器吸取，減少誤差。6．用精密試紙或酸度計調(diào)整PH至5.7～5.8?？膳銱CL和NaOH用來調(diào)溶液PH值。45/687．稱取5g左右瓊脂粉，倒入上面配好溶液中，放在電爐上加熱至沸騰，直到瓊脂粉熔化。8．稍微冷卻后，分裝入培養(yǎng)容器中。無蓋培養(yǎng)容器要用封口膜或牛皮紙封口，用橡皮筋或繩子扎緊。9．放入消毒滅菌鍋滅菌，滅菌20分鐘左右。10．滅菌后從滅菌鍋中取出培養(yǎng)基，平放在試驗臺上令其冷卻凝固。46/68三.滅菌有菌范圍是：凡是暴露在空氣中物體，接觸自然水源物體，最少它表面都是有菌。依此觀點，無菌室等未處理地方、超凈臺表面、簡單煮沸培養(yǎng)基、我們使用刀、剪在未處理之前、我們身體整個外表及與外界相連內(nèi)表，如整個消化道、呼吸道，即我們呼出氣體、培養(yǎng)容器無論洗得多潔凈等等都是有菌。47/68三.滅菌無菌范圍是：經(jīng)高溫灼燒或一定期間、蒸煮過后物體，經(jīng)其他物理或化學(xué)滅菌辦法處理后物體，高層大氣、巖石內(nèi)部、健康動、植物不與外部接觸組織內(nèi)部，強酸強堿，化學(xué)元素滅菌劑等表面和內(nèi)部都是無菌。。48/68因此通過嚴(yán)格滅菌操作空間（接種、超凈臺等）和使用器皿，以及操作者衣著和手都不帶任何活著微生物。在這樣條件下進行操作，就叫做無菌操作。49/68常用滅菌辦法可分為物理和化學(xué)兩類，即：物理辦法如干熱（烘燒和灼燒）、濕熱（常壓或高壓蒸煮）、射線處理（紫外線、超聲波、微波）、過濾、清洗和大量無菌水沖洗等措施；化學(xué)辦法是使用甲醛、過氧化氫、高錳酸鉀、漂白粉、次氯酸鈉、抗菌素、酒精化學(xué)藥品處理。這些辦法和藥劑要根據(jù)工作中不一樣材料不一樣目標(biāo)合適選用。50/68步驟進行：1．在接種前20分鐘，打開超凈工作臺風(fēng)機以及臺上紫外線燈；2．接種員先洗凈雙手，在緩沖間換好專用試驗服，并換穿拖鞋等；3．上工作臺后，用酒精棉球搽拭雙手，尤其是指甲處。然后搽拭工作臺面；4．先用酒精棉球搽拭接種工具，再將鑷子和剪刀從頭至尾過火一遍，然后反復(fù)過火尖端處，對培養(yǎng)皿要過火烤干；5．接種時，接種員雙手不能離開工作臺，不能說話、走動和咳嗽等；6．接種完成后要清理潔凈工作臺，可用紫外線燈滅菌30分鐘，若連續(xù)接種，每5天要大強度滅菌一次。51/68接種是將已消毒好根、莖、葉等離體器官，經(jīng)切割或剪裁成小段或小塊，放入培養(yǎng)基過程。無菌接種步驟：1．將初步洗滌及切割材料放入燒杯，帶入超凈臺上，用消毒劑滅菌，再用無菌水沖洗，最后瀝去水分，取出放置在滅過菌紗布上或濾紙上。2．材料吸干后，一手拿鑷子、一手拿剪刀或解剖刀，對材料進行合適切割。如葉片切成0.5cm平方小塊；莖切成具有一種節(jié)小段。微莖尖要剝成只含1～2片幼葉莖尖大小等。在接種過程中要經(jīng)常灼燒接種器械，避免交叉污染。四.接種52/683．用灼燒消毒過器械將切割好外植體插植或放置到培養(yǎng)基上。詳細操作過程（以試管為例）是：先解開包口紙，將試管幾乎水平拿著，使試管口接近酒精燈火焰，并將管口在火焰上方轉(zhuǎn)動，使管口里外灼燒數(shù)秒鐘。若用棉塞蓋口，可先在管口外面灼燒，去掉棉塞，再燒管口里面。然后用鑷子夾取一塊切好外植體送入試管內(nèi)，輕輕插入培養(yǎng)基上。若是葉片直接附在培養(yǎng)基上，以放1～3塊為宜。至于材料放置辦法莖尖、莖段要正放（尖端向上）。接種完后，將管口在火焰上再灼燒數(shù)秒種。并用棉塞，塞好后，包上包口紙，包口紙里面也要過火。53/68五.培養(yǎng)

培養(yǎng)指把培養(yǎng)材料放在培養(yǎng)室（無光、合適溫度、無菌）里，使之生長，分裂和分化形成愈傷組織，光照條件下深入分化成再生植株過程。54/681．初代培養(yǎng)

接種某些外植體后，最初幾代培養(yǎng)。初代培養(yǎng)時，常用誘導(dǎo)或分化培養(yǎng)基，即培養(yǎng)基中具有較多細胞分裂素和少許生長素。1）頂芽和腋芽發(fā)育采取外源細胞分裂素，可促進使具有頂芽或休眠側(cè)芽啟動生長，從而形成一種微型多枝多芽小灌木叢狀構(gòu)造。在幾個月內(nèi)能夠?qū)⑦@種叢狀苗一種枝條轉(zhuǎn)接繼代，并且迅速取得多數(shù)嫩莖。它不通過發(fā)生愈傷組織而再生，因此是最能使無性系后裔保持原品種一種繁殖方式。在采樣時，只能采取頂芽、側(cè)芽或帶有芽莖切段55/682）不定芽發(fā)育在培養(yǎng)中由外植體產(chǎn)生不定芽，一般首先要經(jīng)脫分化過程，形成愈傷組織細胞。然后，經(jīng)再分化，即由這些分生組織形成器官原基（這與胚狀體不一樣）。多數(shù)情況下它形成芽，后形成根。另一種方式是從器官中直接產(chǎn)生不定芽，有些植物具有從各個器官上長出不定芽能力如矮牽牛等。用靠培養(yǎng)不定芽得到培養(yǎng)物，一般采取芽叢進行繁殖，如非洲菊、草莓等。56/683）體細胞胚狀體發(fā)生與發(fā)育體細胞胚狀體類似于合子胚但又有所不一樣，它也通過球形，心形，魚雷形和胚狀體胚胎發(fā)育時期，最后發(fā)育成小苗。但它是由體細胞發(fā)生。胚狀體能夠從愈傷組織表面產(chǎn)生，也可從外植體表面已分化細胞中產(chǎn)生，或從懸浮培養(yǎng)細胞中產(chǎn)生。57/682.繼代培養(yǎng)

在初代培養(yǎng)基礎(chǔ)上所取得芽、苗、胚狀體和原球莖等，數(shù)量都還不夠，它們需要深入增殖，從而發(fā)揮迅速繁殖優(yōu)勢。繼代培養(yǎng)是繼初代培養(yǎng)之后連續(xù)數(shù)代擴繁殖培養(yǎng)過程。意在繁殖出相稱數(shù)量無根苗，最后能達成邊繁殖邊生根目標(biāo)。繼代培養(yǎng)后裔是按幾何級數(shù)增加過程。58/68六.馴化移栽

試管苗更適合于高濕環(huán)境生長，當(dāng)將它們移栽到試管外環(huán)境時，試管苗失水率會很高，非常容易死亡。一般采取措施有：對外界要增加濕度、削弱光照；對試管內(nèi)要通透氣體、增施二氧化碳肥料、逐漸減少空氣濕度等。另外，對栽培馴化基質(zhì)要進行滅菌是由于試管苗在無菌環(huán)境中生長，對外界細菌、真菌抵抗能力極差。為了提升其成活率，在培養(yǎng)基質(zhì)中可進行滅菌處理。59/681．移栽用基質(zhì)和容器適合于栽種試管苗基質(zhì)要具有透氣性、保濕性和一定肥力，容易滅菌處理，并不利于雜菌滋生特點。一般可選用蛭石、砂子等。為了增加粘著力和一定肥力可配合草炭土或腐殖土。配時需按百分比搭配。這些介質(zhì)在使用前應(yīng)高壓滅菌。或用最少小火烘烤來消滅其中微生物。草炭土是由沉積在沼澤中植物殘骸通過長時間腐爛所形成，其保水性好，蓄肥能力強60/682．移栽前準(zhǔn)備

移栽前可將培養(yǎng)物不開口移到自然光照下鍛煉2-3天，讓試管苗接收強光照射，使其長得壯實起來，然后再開口練苗1-2天，經(jīng)受較低濕度處理，以適應(yīng)將來自然濕度條件。61/683．移栽和幼苗管理

從試管中取出發(fā)根小苗，用自來水洗掉根部粘著培養(yǎng)基，要所有除去，以防殘留培養(yǎng)基滋生雜菌。但要輕輕除去，應(yīng)避免造成傷根。移植時用一種筷子粗竹簽在基質(zhì)中插一小孔，然后將小苗插入，注意幼苗較嫩，避免弄傷，栽后把苗周圍基質(zhì)壓實，栽前基質(zhì)要澆透水。栽后輕澆薄水。再將苗移入高濕度環(huán)境中。確?？諝鉂穸冗_90%以上。62/68試管苗在移栽過程中，要把水分平衡、合適介質(zhì)、控制雜菌和合適光、溫條件控制好，試管苗是很容易移栽。63/68植物組織培養(yǎng)技術(shù)發(fā)展歷史

1、早期摸索階段（1930年此前）1893年，Schwann和Scheiden提出細胞學(xué)說及植物細胞全能性理論。1923年，德國植物生理學(xué)家Haberlandt第一次嘗試采取植物組織培養(yǎng)技術(shù)對小野芝麻、風(fēng)眼蘭葉肉組織及萬年青屬植物表皮細胞進行培養(yǎng)，但未能培養(yǎng)成活。1923年，Hanning初次對十字花科蘿卜和辣根胚培養(yǎng)成功。1923年，Knudson將蘭花種子在離體條件下非共生萌發(fā)。同年，Knotte和Robbins對離體根尖進行了培養(yǎng)。Robbins還對豌豆、玉米及棉花莖尖進行了培養(yǎng)，只形成某些缺綠葉和根。1925年，Laibach利用胚培養(yǎng)技術(shù)對亞麻種間雜種胚進行了培養(yǎng)，并于1929年利用亞麻胚培養(yǎng)來克服雜交不親和性。64/682、植物組織培養(yǎng)技術(shù)初步形成（1930-1960年）

1933年，我國植物生理學(xué)家李繼侗培養(yǎng)銀杏胚胎，并發(fā)覺銀杏胚乳提取液可促進離體胚生長。

1937年，White發(fā)覺B族維生素對離體根培養(yǎng)主要性。并指出IAA對植物生長發(fā)育控制起主要作用。

1937,1938年，Gantheret在培養(yǎng)基中加入上述生長因子，使得柳樹形成層誘導(dǎo)形成愈傷組織連續(xù)生長。Nobecomt對煙草種間雜種莖段形成層細胞培養(yǎng)也得到了類似成果。

1948年，Skoog等通過對煙草莖段和髓培養(yǎng)發(fā)覺，不定芽和不定根發(fā)生由生長素/腺嘌呤百分比決定。

1950年，Ball從紅杉愈傷組織培養(yǎng)中再生取得器官。65/681952年，Morel和Martin通過度生組織培養(yǎng)取得大麗花脫毒植株，同年