分子生物組pcr檢測(cè)程序性能驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)操作程序

分子生物組pcr)檢測(cè)程序性能驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)操作程序1.目的：制定分子生物組檢測(cè)程序性能驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，以規(guī)范檢測(cè)程序性能驗(yàn)證操作。2.適用范圍：所有采用基因擴(kuò)增檢驗(yàn)方法檢測(cè)的項(xiàng)目。3.職責(zé)和責(zé)任人：3.1組長(zhǎng)負(fù)責(zé)組織工作人員具體實(shí)施，并審核報(bào)告；3.2工作人員負(fù)責(zé)對(duì)適用范圍內(nèi)的檢測(cè)程序進(jìn)行驗(yàn)證操作，并撰寫(xiě)報(bào)告；3.3技術(shù)主管負(fù)責(zé)監(jiān)督規(guī)程的實(shí)施；3.4質(zhì)量主管參與對(duì)檢驗(yàn)程序有效性的評(píng)價(jià)及指導(dǎo)；3.5檢驗(yàn)科主任負(fù)責(zé)批準(zhǔn)檢測(cè)程序的實(shí)施。4.內(nèi)容：4.1正確度：檢測(cè)程序測(cè)定結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度。4.1.1驗(yàn)證方法：采用對(duì)照試驗(yàn)，將質(zhì)控品或已獲認(rèn)可實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)本作為樣品，進(jìn)行定量分析，與質(zhì)控品靶值或比對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)值比較，誤差在可接受范圍即可接受。4.1.2樣品數(shù)量：至少5份，包括正常和異常水平或不同常見(jiàn)基因突變型。4.1.3頻率：至少每年2次。4.1.4判定標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)于定性試驗(yàn)，陰陽(yáng)性應(yīng)一致；對(duì)于定量試驗(yàn)，應(yīng)有≥80%的結(jié)果符合要求。4.2特異性：在可能存在其他成分的條件下，采用的方法能正確測(cè)定待測(cè)物的特性。4.2.1驗(yàn)證方法：取一份陰性標(biāo)本，加入其他常見(jiàn)病原體高濃度核酸樣本，進(jìn)行10次獨(dú)立的檢測(cè)。4.2.2判斷標(biāo)準(zhǔn)：觀察并記錄檢測(cè)結(jié)果為陰陽(yáng)性的差異。4.3精密度：同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。4.3.1驗(yàn)證方法：4.3.1.1重復(fù)精密度（批內(nèi)精密度）：選擇具有醫(yī)學(xué)決定水平的高低值標(biāo)本，在較短得時(shí)間內(nèi)及穩(wěn)定的條件下各作20次獨(dú)立測(cè)定。計(jì)算其均值、標(biāo)準(zhǔn)差與變異系數(shù)。標(biāo)本可用患者血清或選用質(zhì)控品進(jìn)行，所檢測(cè)所有數(shù)據(jù)超出2SD的數(shù)據(jù)不能超過(guò)2個(gè)，否則應(yīng)分析。重測(cè)時(shí)，不需要重新測(cè)試全部樣本。如果發(fā)現(xiàn)多個(gè)離群值或數(shù)據(jù)點(diǎn)過(guò)于分散，需要檢查可能導(dǎo)致這種誤差的原因，并進(jìn)行糾正后重新測(cè)試全部樣本。計(jì)算出三次測(cè)定結(jié)果的平均值和每一稀釋度的預(yù)期值。使用Excel軟件進(jìn)行二元一次的回歸分析，以實(shí)測(cè)均值為X，以預(yù)期值為Y。在初步判斷無(wú)離群值后，數(shù)據(jù)擬合為直線，所有數(shù)據(jù)幾乎均落在一條直線上，相關(guān)系數(shù)≥0.95為符合要求。否則，應(yīng)重新進(jìn)行線性驗(yàn)證。測(cè)量范圍指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。驗(yàn)證方法與線性驗(yàn)證相同，其線性范圍即為測(cè)量范圍。當(dāng)肝炎系列核酸檢測(cè)線性范圍足夠?qū)挄r(shí)，其范圍即可成為其臨床可報(bào)告范圍。因?yàn)楫?dāng)上述驗(yàn)證的熒光定量PCR法核酸檢測(cè)檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中檢測(cè)程序的線性范圍很寬時(shí)，高濃度已屬臨床高載量患者，符合抗病毒治療指標(biāo)，不必要對(duì)更高的載量進(jìn)行精確檢測(cè)；若結(jié)果低于檢測(cè)限，已為臨床療效監(jiān)測(cè)效果較好的指標(biāo)，大量研究表明，此群患者對(duì)抗病毒治療不敏感，因此對(duì)療效監(jiān)測(cè)意義不大，如果的確需要更低更準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，則建議采用更敏感的檢測(cè)方法。血液樣本中的內(nèi)源產(chǎn)物血紅蛋白、膽紅素和甘油三酯會(huì)對(duì)核酸的檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生干擾，導(dǎo)致標(biāo)本溶血、黃疸及脂血時(shí)檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。驗(yàn)證方法是采用回收試驗(yàn)，分別在5個(gè)已知分析物濃度的樣品中加入不同干粉或液體干擾物，達(dá)到制造商聲明的干擾物濃度后進(jìn)行檢測(cè)、分析。判斷標(biāo)準(zhǔn)是至少4個(gè)樣品測(cè)量結(jié)果與分析物預(yù)期濃度偏倚<±7.5%時(shí)，說(shuō)明干擾物對(duì)分